微生物技术部分

微生物技术部分第1页，共41页，2023年，2月20日，星期六（二）无菌技术无菌操作泛指在培养微生物的操作中，所有防止杂菌污染的方法。1、目的：防止外来杂菌入侵，获得纯净培养物p152、方面：p15*实验操作空间、操作者衣着和手，进行清洁和消毒*微生物培养的器皿、接种工具和培养基灭菌*实验操作在酒精灯火焰附近进行*避免已经经过灭菌处理的材料与周围物品接触第2页，共41页，2023年，2月20日，星期六比较含义常用方法消毒使用较为温和的物理或化学方法仅杀死物体表面或内部一部分对人体有害的微生物，不包括芽孢和孢子。p15灭菌使用强烈的理化因素杀死物体内外所有微生物，包括芽孢和孢子。p15高压蒸汽灭菌灼烧灭菌干热灭菌煮沸消毒法；巴氏消毒法；化学药剂消毒；第3页，共41页，2023年，2月20日，星期六

定义常用方法处理对象消毒使用较为温和的物理或化学方法杀死物体表面或内部的部分微生物煮沸玻璃仪器巴氏消毒法不耐高温的液体紫外线实验室、操作台化学药剂消毒：如酒精溶液手，操作台等灭菌使用强烈的理化因素杀死物体内外所有的微生物，包括芽孢和孢子培养基、棉塞、玻璃仪器等接种环、涂布器玻璃仪器3、灭菌与消毒：高压蒸汽灼烧干热第4页，共41页，2023年，2月20日，星期六

定义常用方法微生物培养和组培中的应用消毒使用较为温和的物理或化学方法杀死物体表面或内部的部分微生物煮沸玻璃仪器紫外线实验室、操作台、衣物等酒精溶液手、外植体等次氯酸钠溶液等外植体灭菌使用强烈的理化因素杀死物体内外所有的微生物，包括芽孢和孢子高压蒸汽培养基、玻璃仪器、棉塞、牛皮纸等灼烧接种环、涂布器干热玻璃仪器第5页，共41页，2023年，2月20日，星期六121℃，100kPa，15~30min第6页，共41页，2023年，2月20日，星期六接种用具、试管口、瓶口放在酒精灯火焰的充分燃烧层中进行灼烧灭菌第7页，共41页，2023年，2月20日，星期六将玻璃器皿、金属用具等能耐高温并需要保持干燥的物品放到干热灭菌箱内，160-170℃下加热1-2h。第8页，共41页，2023年，2月20日，星期六二、基本操作程序（以大肠杆菌的纯化为例）配制培养基包装器材灭菌菌种扩增倒平板接种倒置培养观察、记录、分析保存菌种第9页，共41页，2023年，2月20日，星期六配制培养基称量计算溶化物质牛肉膏蛋白胨NaCl琼脂水重量5g10g5g20g定溶至1000mL电子天平和称量纸调节PH第10页，共41页，2023年，2月20日，星期六溶化营养→琼脂（搅拌）→加水定容→调节PH第11页，共41页，2023年，2月20日，星期六高压蒸汽灭菌第12页，共41页，2023年，2月20日，星期六二、基本操作程序（以大肠杆菌的纯化为例）配制培养基包装器材灭菌菌种扩增倒平板接种倒置培养观察、记录、分析保存菌种高压蒸汽第13页，共41页，2023年，2月20日，星期六倒平板60℃左右，酒精棉球擦手，点酒精灯；操作过程第14页，共41页，2023年，2月20日，星期六倒平板第15页，共41页，2023年，2月20日，星期六微生物的接种（纯化）单菌落第16页，共41页，2023年，2月20日，星期六二、基本操作程序（以大肠杆菌的纯化为例）配制培养基包装器材灭菌菌种扩增倒平板接种倒置培养观察、记录、分析保存菌种高压蒸汽平板划线法稀释涂布平板法第17页，共41页，2023年，2月20日，星期六平板划线法随着划线的进行，接种环上的微生物细胞的数量将逐渐减少，并分散开。经培养后，可在平板表面得到单菌落。第18页，共41页，2023年，2月20日，星期六接种：划线灼烧接种环→取菌液→划线分离→烧至暗红第19页，共41页，2023年，2月20日，星期六接种：划线第20页，共41页，2023年，2月20日，星期六①④③②划线分离第21页，共41页，2023年，2月20日，星期六平板划线的操作方法交叉划线法连续划线法第22页，共41页，2023年，2月20日，星期六划线方法第23页，共41页，2023年，2月20日，星期六第24页，共41页，2023年，2月20日，星期六第25页，共41页，2023年，2月20日，星期六第26页，共41页，2023年，2月20日，星期六第27页，共41页，2023年，2月20日，星期六第28页，共41页，2023年，2月20日，星期六稀释涂布平板法第29页，共41页，2023年，2月20日，星期六A.系列稀释操作P19101102103104105106(1)将分别盛有9mL水的试管灭菌并编号。(2)用移液管吸取1mL培养的菌液，注入第二支试管中，轻压橡皮头，吹吸三次使之充分混匀。(3)从101倍稀释的试管中吸取1mL稀释液，注入第三支试管中，重复步骤2，直至到第六支试管。第30页，共41页，2023年，2月20日，星期六B.涂布平板操作P19第31页，共41页，2023年，2月20日，星期六第32页，共41页，2023年，2月20日，星期六二、基本操作程序（以大肠杆菌的纯化为例）配制培养基包装器材灭菌菌种扩增倒平板接种倒置培养观察、记录、分析保存菌种高压蒸汽平板划线法稀释涂布平板法恒温培养箱第33页，共41页，2023年，2月20日，星期六平板和一个未接种的平板，恒温37℃倒置培养

恒温箱中培养第34页，共41页，2023年，2月20日，星期六原液稀释101倍稀释103倍稀释102倍第35页，共41页，2023年，2月20日，星期六菌种的保存（1）临时保藏固体斜面培养基：4℃，3~6月转接新培养基（2）长期保藏甘油管藏：菌液：灭菌甘油=1：1混合，-20℃第36页，共41页，2023年，2月20日，星期六芽孢

A、某些细菌在其生长发育后期，在细胞内形成一个圆形或椭圆形、厚壁、含水量极低、抗逆性极强的休眠体，称为芽孢第37页，共41页，2023年，2月20日，星期六被埋在琥珀中达2500万年的芽孢，当放到营养培养基上时仍可萌发生长。

第38页，共41页，2023年，2月20日，星期六3