尿蛋白电泳操作规程

PAGEPAGE1尿蛋白电泳操作规程一．项目名称尿蛋白电泳（HYDRAGELPROTEINURIE）二．检验方法名称SDS－琼脂糖凝胶区带电泳三．方法学原理在含有多量的阴离子去垢剂十二烷基磺酸钠（SDS）液体中,蛋白质可与其连接，形成SDS—蛋白质复合物。这种复合物蛋白本身的构造已经破坏,他们都表现出相同的构造和相同的负电荷。当这种SDS—蛋白质复合物在具有适当筛选功能的介质中电泳时，如在含高浓度琼脂糖的HYDRAGEL5PROTEINURIE凝胶上电泳时,蛋白质按它们的分子量大小进行分离。HYDRAGEL5PROTEINURIE分子量＜65-70Kda)还（分子量＞65—70KDa）对蛋白来源进行分类（肾小球，肾小管性和混合性。四．方法学溯源1930年由Tiselius发现了移界电泳boundaryeectrophoresis),(zoneelecrrophoresis）所克服，区带电泳的条件和支持介质的选择是电泳成败的关键。五．仪器（一）型号：SEBIA HYDRASYS(PN1210）（二）分析和计算参数:14/小时所需样本量：5ul50分钟重复性有良好的批内和批间重复性50－300V(0－500mA功率0－100W六．试剂及配套品（一）试剂HYDRAGEL5PROTEINURIE试剂盒商标：SEBIA测试（3）货号：PN4115脱色液(1）商标:SEBIA（2）包装规格:Packfor10×100ml（3）货号：PN4540(4) 成分：柠檬酸洗涤液商标：SEBIA:Packfor10×80ml（3）货号:PN4541（4）成分：叠氮钠（二）配套品尿蛋白质控:SEBIA包装规格：Packfor5×1ml（3）货号：PN4781七．操作步骤㈠开机，启动电泳仪。㈡打开密闭的凝胶片盒，取出凝胶片并放在关闭的凝胶片盒上，用滤纸条轻柔、迅速地吸去凝胶片槽孔中的多余水分，在每一槽孔内加入5ul,.㈢选择«PROTEINURIA1*5»程序进行一个凝胶片的电泳，或者«PROTEINURIA2＊5»程序进行两个凝胶片的电泳。120ul或者在放两个凝胶片时，在偏下的左半侧和右半侧各加100ul的蒸㈤自然放下支架，关上电泳舱盖，按下键盘左侧的绿色箭头“START”键，电泳开始，确保仪器右侧的空气通道不被堵塞。取出已烘干色液瓶内是否有300ml染色液，脱色液瓶内是否有1000ml300ml«Proteinuria»染色。㈦在染色、脱色以及干燥步骤完成后，电泳仪自动发出蜂鸣声，取出凝胶支架并取下已干燥的凝胶片，可用湿软的纸擦干凝胶片背面的塑料支持膜。㈧关机。八．参考范围本试验是定性结果.九．临床意义㈠生理性蛋白尿：尿蛋白含量是很低的,通常低于120mg/24h,男女之间无明显差异。主要是白蛋白，有时可有极微量的转铁蛋白或免疫球蛋白,当尿蛋白＞120mg/24h时，应考虑为病理性蛋白。对阳性的尿蛋白（＞120mg/24h）应注意随访。电泳条带显示位置在样本加样点与白蛋白部分之间，白蛋白是其主要组分。㈢肾小管型蛋白尿:极端之间。如(RBP)，溶菌.㈣混合型蛋白尿：其蛋白特征为肾小管及肾小球的蛋白同时并存。通过此方法我们可以很容易地对肾脏疾病作早期诊断/鉴别诊断及分型、治疗效果的观察、肾活检（属创伤性诊断）前的筛查、甚至代替肾活检。十．标本要求㈠取242℃～8冷冻样品中加入HEPES0.1M(pH6。75）0.02g/dl，则可提高保存的稳定性。勿用硼酸做为防腐剂。解冻后样本可产生蛋白变性导致的细小点样痕迹。㈡取20ul稀释液（慢慢吸，保证无气泡小试管底部，保证粘稠液体不粘在管壁上，加80ul5秒钟。如果尿蛋白＞0.2g/dl,则尿液先用盐水稀释至0。2g/dl左右，然后再按下列标准程序操作.注意：混浊的尿样本（未稀释的或浓缩的）点样后很难渗透到点样器的,法（300010分钟）或者过滤法（:0.45um十一.操作注意事项㈠为达到最佳检测效果，同一试剂