细胞工程复习资料

1)大量元素母液配制MS培养基的大量元素主要包括硝酸铵(NH4NO3)、硝酸钾2)微量元素母液配制MS培养基的微量元素由7种化合物(除Fe外)组成MnSO4?4H2O、3)铁盐母液配制MS培养基中的铁盐是硫酸亚铁(FeSO4?4H2O)和乙二胺四乙酸二钠4)有机母液的配制5)激素母液配制MS培养基的有机成分有甘氨酸、肌醇、烟酸、烟酸硫胺素和盐酸MS培养基中的激素有生长素类、细胞分裂素1)配制母液不但可以保证各物1)湿热灭菌(高压蒸汽灭菌)优点：高温高压蒸汽对生物材料有良好的穿透力，能造成2)过滤除菌优点：3)干热灭菌缺点：干热灭菌存在能源消耗大、浪费时间、安全性差问题灭菌，而且要求距照射物质以不超过1.2m为宜。6)药剂喷雾消毒1)在接种前打开超净工作台紫外灯照射20~30min，关闭紫外灯后，打开超净工作台的风机2)接种人员先洗净，在缓冲室内换好经过消毒的工作服，带上口罩，并换上拖鞋等。4)先用酒精棉球擦拭接种工具，然后在酒精灯火焰上进行灼烧灭菌或放在接种器械灭菌器5)把植物材料放在75%乙醇中浸泡约30s，再用0.1%的升汞中浸泡5~10min，浸泡时刻进行搅动，使植物材料与消毒剂有良好的接触，然后用无菌水冲洗3~5次。6)接种时培养瓶瓶口要在酒精灯火焰附近，并在接种前后灼烧瓶口。7)接种结束后，清理和关闭超净工作台。称之愈伤组织(callus)变(dedifferentiation)。终形成各种组织、器官或胚状体等，即再分化(rededifferentiation)人工种子：(artificialseeds)又称合成种子(syntheticseeds)或体细胞种子(somaticseeds)。芽包裹在含有养分和保护功能的人工胚乳和人工种皮中官发生是单极的。细胞胚维管组织分布是独立的Y的再生植株遗传性比器官发生的稳定。然后进行脱水干燥，再将畸形胚选出后才能进行包埋。在脱水之前用ABA处理体细胞胚强时体数或苗mmmm几十微米，有时也称顶端分生组织。离体无性繁殖中,培养物的增殖方式有4种。腋生枝型特点(1)繁殖率高(2)能保持植物遗传稳定性(3)可缩短林木繁殖周期。不原球茎型是兰花种子萌发时产生的呈珠粒状、缩短的、类似嫩茎的器官，可萌发成苗离体无性繁殖一般可分为5个阶段。健境的过程和基因型其中生理状态包括年龄、取材、季节、生长、环境部位污染问题和褐变、玻璃化污染问题预防措施(1)通风(2)去湿(3)光照(4)防霉(5)改进外植体消毒方法或使用抗生素1)选择合适的外植体：一般来说，最好选择生长处于旺盛的外植体。2)合适的培养条件：无机盐成分、植物生长物质水平、适宜温度和光照、及时继代培养均3)使用抗氧化剂：在培养基中，使用半胱氨酸、抗坏血酸等抗氧化剂能够较为有效地避免4)使用吸附剂：使用聚乙烯基吡咯烷酮、0.1%-0.5％的活性炭对防止褐变也有较为明显的1)降低细胞分裂素的浓度，调节激素配合2)增加培养基中的溶质水平，以降低培养基的渗透势3)降低氨态氮，提高硝态氮的含量；4)增加容器的气体交换，降低容器内相对湿度5)降低培养温度，增加自然光照。6)在培养基中添加间苯三酚、根皮苷或生长抑制剂等物质。(35-40℃)即钝化失活,繁殖力下降,失去侵染能力,而植物基本不受伤害.(2)、低温处理又称冷冻疗法原理：降低温度能使病毒活力下降。化学处理(1).病毒抗血清预处理：用齿舌兰环斑病毒(ORV)的血清处理兰属离体分生养基中加入2-硫脲嘧啶，可除去组织中马铃薯Y病毒(PVY)。放线菌D和放线菌酮能抑制呋喃核苷，防治动物RNA病毒和DNA病毒病的广谱性抗病毒制剂。含病毒，可通过植物组织培养就行脱毒)(1)、脱毒 植株→分离大小合适的茎尖分生组织→茎尖分生组织培养→病毒检验适当大小的茎尖分生组织的分离(3)、茎尖分生组织培养基的类型和培养条件害2)、看护培养特点：简便、成功率高；不能在显微镜下直接观察.3)、饲养层培养特点：操作简便；不能在显微镜下追踪细胞的分裂和细胞团的形成持，培养基的成分及pH等也易于变动，细胞短期培养后往往不能再生长。5)、液体浅层静置培养法特点:易于补加新鲜培养基、可以镜检1)、物理方法(1)体积选择法:将培养一段时间的细胞经过一定大小的筛网过滤,收集筛网上层的细胞;再经过较小孔径筛网上面的细胞.选择每一孔径筛网过滤得到的细胞分别再进行2)冷处理法:收集细胞,在4℃温度下处理数天,添加新鲜培养液培养.使细胞停滞在G1期或G2期，经过一段时间的饥饿之后，当重新在培养基中加入这种限制答：(一)筛选得到高产细胞系(株)常用方法有：1)、克隆选择(有相同遗传基因的细胞群)指通过单细胞克隆技术和细胞团克隆技术，将培养细胞中能够积累较多次生代谢物且学诱变或紫外线照射等各种物理化学方法诱变产生比原亲本细胞全成能力高的细胞系(株)(二)培养条件1)、适宜温度2)、不断调节PH3)、营养成分：一方面要满足植物细胞素、组合、浓度、pH、光照和温度⑶渗(2)RFLP检测，具有种的特异性和遗传稳定性，能直接发现同源染色体上核苷酸碱基花药培养指用植物组织培养技术将发育到一定阶段的花药剥离下来(切去花丝部分)，接种最终形成完整植株的技术养。是什么?成5、花药(或花粉)培养过程中决定再生植株倍性的因素有哪些?答：倍性鉴定有直接鉴定法和间接鉴定法两大类，其中间接鉴定法分为1.植株形态观察法体加倍的方法有1.小苗处理法2.茎尖处理法3.培养基处理法同?,仍需进行表面消毒后再接种未授粉的子房可将花被表面消毒后,在无菌条件下直接剥取子房接种6.植物胚乳有哪些类型?答:①被子植物胚乳：双受精产物，属三倍体组织②裸子植物胚乳：很特殊，在受精前就形9.离体受精有何意义?答:离体授粉与离体受精的意义:1、克服远缘杂交不亲合性2、克服自交不亲和性3、诱导孤雌生殖4、双受精及胚胎早期发育机理的研究成愈伤组织和完整植株时所产生的变异称为植物体细胞无性系变异及成分等因素的影响(2)人工诱变，包括物理诱变和化学诱变。物理诱变就是利(1)染色体组型变异，如出现多倍体和非整倍体。(2)染色体结构变异，由染色体重排(3)基因突变(4)DNA总量变异和DNA重复序列拷贝数的变异(5)基因丢失(6)DNA碱基修饰(7)转座子的激活，由转座引起突变。(