微生物在药学中的应用课件

第四篇

微生物在药学中的应用

BEAConfidential.|1抗生素（antibiotics）原始含义：由微生物产生的、能抑制其它微生物生长的物质。现指：生物（包括微生物、植物和动物）在其生命活动过程中产生的（或由其它方法获得的）、能在低微浓度下有选择性地抑制或影响它种生物机能的有机物质。分类（1）按化学结构

ß-内酰胺类—青霉素、头孢菌素等

四环类—四环素、土霉素、金霉素

氨基糖苷类—链霉素、卡那霉素、庆大霉素

大环内酯类—红霉素、螺旋霉素、麦迪霉素

多肽类—多黏菌素、杆菌肽等多烯类—制霉菌素、两性霉素B、万古霉素 苯羟基胺类—氯霉素 蒽环类—柔红霉素、阿霉素 环桥类—利福霉素 其他医疗用抗生素的特点差异毒力大生物活性强、有不同抗菌谱不易使病原菌产生耐药性毒副作用小，不易引起超敏反应半衰期长，生物利用度高抗生素传统分离方法土壤标本涂布于平板培养基培养无菌水稀释挑取单菌落扩培培养观察抑菌圈鉴定精制临床研究滤纸片法筛选抗生素生产的工艺过程1.菌种2.孢子制备3.种子制备4.发酵5.发酵液预处理6.提取及精制7.成品检验和包装（7）通气搅拌：机械搅拌；挡板防涡流（8）消泡沫：

玉米油、豆油、泡敌—聚氧乙烯氧丙烯甘油0.01-0.02%（9）消毒灭菌，防止杂菌污染 菌种、空气、培养基、管道设备、防噬菌体。（10）放罐时间： 菌丝浓度、形态、残糖、氨基氮、pO2、pH、效价。5、发酵液的预处理（1）发酵液中含Ca2+

、Mg2+

、Fe3+

、Protein等杂质；（2）Ca2++草酸→草酸钙↓（还可促进蛋白质沉淀）（3）磷酸盐除Mg2+（4）黄血盐除Fe3+（5）ZnSO4与黄血盐形成复盐吸附蛋白质（6）过滤6、抗生素提取和精制（1）溶媒萃取法—Pen（2）离子交换法—氨基糖苷类抗生素（3）吸附法（活性炭、大孔吸附树脂）—头孢菌素（4）沉淀法——四环素7、成品检定和包装抗菌药物的发展史也就是细菌对其耐药性的发展史（1）抗菌药物只要使用了足够时间，就会出现细菌耐药性，如使用青霉素25年后出现耐青霉素肺炎球菌、氟喹诺酮使用10年后出现了肠杆菌耐药；（2）耐药性是不断进化的，随着抗菌药物的应用，耐药也从低度耐药向中度、高度耐药转化；（3）对一种抗菌药物耐药的微生物可能对其他抗菌药物也耐药；（4）细菌耐药性的消亡很慢；（5）使用抗菌药物治疗后，患者容易携带耐药菌。（一）、抗药性产生的遗传机制1、自发突变与药物选择（1）由敏感菌的遗传物质自发突变产生。（2）药物选择的结果是杀死敏感菌，耐药菌富集。2、细胞间抗药性的基因转移

染色体上的耐药基因—通过接合、转化、转导和转座子而转移。

质粒上的耐药基因—自行复制，代代相传，并在不同种属间转移（性菌毛的接合作用）（二）、抗药性产生的生化机制

1、合成了修饰抗生素的酶例：β-内酰胺类抗生素—产生β-内酰胺酶

2、使药物作用靶位失活

例：磺胺类抗药菌—合成另一种对磺胺不敏感的酶

3、细胞质膜透性改变

例：抗四环素细菌—膜孔蛋白结构改变，降低细胞膜通透性

抗生素的效价单位及效价测定法

p308一、抗生素的效价单位效价（potency）——在同一条件下比较抗生素检品和标准品的抗菌活性，从而得出检品的效价。单位（unit,u）是衡量抗生素有效成分的具体尺度。效价＝×100％抗生素效价检品的抗菌活性标准品的抗菌活性100%效价=检品的实际单位数检品的标示量100%=抗生素效价单位重量单位（生物活性部分重量）：1µg≌1U类似重量单位（特定抗生素盐纯品重量）1µg≌1U重量折算单位（原始活性单位相当的纯品重量为1U）

ex:Pen0.5988µg≌1U,1mg≌1670U特定单位（特定样品的某一重量为一定单位）例:一批特定杆菌肽1mg≌55U第二十章药物的体外抗菌试验抗生素的体外抑菌实验

MIC——最低抑菌浓度MBC——最低杀菌浓度

药物体外抗菌试验琼脂扩散法滤纸片法打洞法（挖孔法）管碟法挖沟法连续稀释法液体稀释法斜面稀释法平板稀释法第二十一章

药物制剂的微生物学检查

一般药品的无菌检查——直接接种法需氧菌、厌氧菌、霉菌的检查需氧菌：30~35℃，7天厌氧菌：30~35℃，7天霉菌：20~25℃，7天观察培养液是否混浊或涂片染色镜检

阳性对照—（24h有菌生长）金黄色葡萄球菌CMCC（B）26003生孢梭状芽胞杆菌CMCC（B）64941白色念珠菌CMCC（F）98001第二节非灭菌制剂的微生物限度检查适用于非灭菌制剂（口服及外用药）及其原辅料，检测项目：1.细菌总数测定2.霉菌（酵母）总数测定3.控制菌的检查4.活螨的检查一、细菌总数测定(琼脂倾注平皿计数)1阴性平板不长菌2细菌37℃培养24~48h3细菌总数结果报告方式（1）高、低稀释度菌落数在30~300以内，计算比值；（2）比值≤2，以高稀释度平均值为准；（3）比值>2，以低稀释度为准。二、霉菌（酵母）总数测定虎红培养基，25~28℃，48~72h，5~50个菌落三、控制菌（质控菌）的检查1口服药—不能检出沙门氏菌、大肠杆菌2外用药、眼科制剂—不能检出金葡菌、绿脓杆菌、破伤风梭菌。质控菌检测方法

药物预处理增菌液增菌培养分离、纯培养菌落等培养特征观察镜检形态学检查（如革兰氏染色）生理生化反应检查血清学反应动物