生物学实验细胞

生物学实验细胞第1页/共44页实验一

普通光学显微镜的结构和使用第2页/共44页【实验目的】了解普通光学显微镜的构造及原理，熟练掌握其操作方法；了解人血与蛙血细胞的形态差异。第3页/共44页【实验原理】显微镜种类：显微镜的组成系统：光学、机械、电子。普通光镜的光学系统：物镜、目镜、聚光器、光阑等。普通光镜的机械系统：镜筒、镜臂、物镜转换器、调焦螺旋（粗调和细调）、载物台、镜座等第4页/共44页【实验步骤】A：显微镜的使用取用显微镜时，右手握镜臂，左手托镜座，避免倾斜；接通电源，打开光圈，上升聚光器；标本片置于载物台上，材料对准通光孔；低倍下调焦；选择合适区域推到中央，换高倍镜调焦（细调）；观察绘图；结束时将显微镜复原到非工作状态。第5页/共44页显微镜使用的注意点：禁止单手提拿显微镜和随意拆卸零部件；低倍下调焦时先上升载物台（或下降镜筒），再缓慢下降载物台或上升镜筒，使物镜镜头与玻片距离由小到大调焦。一般直接转换成高倍镜后细调焦距；观察标本时两眼同时睁开；调节合适的光圈和电流强度可使成像更清晰；如果使用100×油镜，应在标本上滴一滴香柏油，使镜头底端与该介质接触。观察完后及时用二甲苯擦拭油镜头。注意其它镜头不得接触香柏油。第6页/共44页【实验步骤】B：操作练习：血细胞涂片的观察材料：人血和蛙血涂片观察内容：血细胞的组成；两种红细胞的形态差异等。附：字母装片，精液涂片。【作业】绘图：人血和蛙血细胞形态第7页/共44页实验二动物细胞的基本形态与显微测量第8页/共44页【实验目的】掌握光镜下多种细胞的形态和结构特征；掌握显微测微尺的使用和测量细胞大小的方法。第9页/共44页【实验原理】动物各种不同组织的细胞具有不同的形态大小等特征上皮组织：单层扁平上皮单层立方上皮单层柱状上皮复层扁平上皮……结缔组织：骨软骨血液……肌组织：骨骼肌心肌平滑肌神经组织第10页/共44页单层柱状上皮与复层扁平上皮第11页/共44页骨骼肌细胞与心肌细胞第12页/共44页平滑肌细胞

第13页/共44页神经元肝细胞第14页/共44页【实验原理】显微测微尺由目镜测微尺和镜台测微尺组成，台尺的每小格已知0.01nm，在相应放大倍数的物镜下对目尺加以标定后，即可通过目尺准确测量细胞的大小。第15页/共44页【实验步骤】A.

分别观察肠上皮细胞、骨骼肌细胞、心肌细胞、神经细胞和肝细胞等切片，注意比较鉴别细胞的形态结构，核形态数量和位置等特征。B.蛙血细胞大小的测量1.蛙血涂片的制备2.目镜测微尺的标定3.细胞大小的测量第16页/共44页【作业】1.绘图：各种细胞的形态结构2.记录5个以上的蛙血细胞的长、短径，得到平均细胞大小第17页/共44页实验三细胞器的显示与观察第18页/共44页【实验目的】了解光镜下细胞器的形态和分布掌握超活染色法制作光镜标本的基本方法第19页/共44页【实验原理】活体染色是能使活的细胞或组织着色且无毒害的一种染色方法。可用于研究生活状态下的细胞形态结构和生理或病理变化。活体染料被特异性地固定和堆积在细胞内某种细胞器上而显色。活体染色分为体内活染和体外活染（超活染色）。詹纳斯绿B是毒性较小的碱性染料，可专一性地对线粒体进行超活染色。其原理是由于线粒体内细胞色素氧化酶系的作用，使JGB保持氧化状态，呈亮绿色；而周围的细胞质中染料被还原为无色的色基。第20页/共44页【实验步骤】人口腔上皮细胞线粒体的超活染色与观察用牙签刮取口腔颊部粘膜的上皮细胞，在洁净的载玻片上与1dJGB染液混匀，染色15min以上。盖上盖玻片，光镜下观察线粒体的形态和分布。B.小鼠肝脏细胞线粒体的超活染色与观察取小鼠肝脏边缘较簿组织，置于含Ringer液平皿中挤压洗涤2-3次，吸去Ringer液，加JGB染液染色30min，Ringer液洗涤1次后转移至载玻片，将组织拉碎，去稍大的组织块，盖上盖玻片，镜检。C.高尔基复合体标本的观察兔脊神经节切片D.动物细胞中心体标本观察第21页/共44页【作业】绘图：人口腔上皮细胞（显示线粒体）小鼠肝细胞（显示线粒体）兔脊神经节细胞（显示高尔基体）第22页/共44页实验四细胞膜的通透性第23页/共44页【实验目的】掌握细胞膜的选择通透性和细胞内外水分子交换的原理。第24页/共44页【实验原理】细胞与周围环境之间可进行选择性物质交换。水分子通常以简单扩散的方式通过细胞膜，如果细胞内外存在渗透压差时，水分子表现从渗透压低的一侧向高的一侧扩散。将红细胞置于低渗溶液中，溶剂很快进入细胞内，发生溶血，释放出血红蛋白，重新封闭的红细胞膜构成血影。而在高渗溶液中，动物细胞发生脱水皱缩。将红细胞置于数种等渗溶液中，由于红细胞膜对各种溶质的通透性不同，有的不能通过，能通过的溶质通过的速度也有差异。随着溶质的进入，红细胞内渗透压提高，带动水分的摄入，最终引起溶血。通过溶血时间的测定可估计红细胞膜对各种溶质通透性的大小。第25页/共44页第26页/共44页【实验步骤】1、制备10％兔红细胞悬液：兔心脏抽血，加肝素抗凝，加等渗氯化钠稀释10×成不透明的悬液。2、在1支试管加5ml蒸馏水，再加0.5ml10％红细胞悬液，观察溶血现象的发生。3、10支试管分别加5ml不同的等渗溶液，再加0.5ml10％红细胞悬液，观察溶血现象是否发生，记录溶血发生时间。4、显微镜下观察红细胞血影。第27页/共44页等渗溶液是否溶血溶血时间结果分析氯化钠氯化铵醋酸铵硝酸钠草酸铵硫酸钠葡萄糖甘油乙醇丙酮【作业】第28页/共44页植物细胞骨架的光学显微镜观察实验五第29页/共44页【实验目的】掌握考马斯亮蓝法检测细胞骨架的方法第30页/共44页【实验原理】A.细胞化学染色与DNA和RNA的定位核酸分为DNA和RNA，呈酸性可与碱性染料反应而显色和定位。由于两类核酸分子聚合程度不同，对不同的碱性染料亲和力不同，甲基绿-哌洛宁染料的两种组分分别对DNA和RNA有高亲和力，并分别将二者染成蓝绿色和红色。第31页/共44页【实验原理】B.细胞计数血细胞计数板包括2个计数室，每个计数室有9个大格，每大格的体积为0.1mm3，计数4大格内（4个角）的细胞数，根据每大格的体积和细胞悬液的稀释倍数即可算出细胞密度。第32页/共44页【实验步骤】A.DNA和RNA的定位制备蛙血涂片1张，晾干。固定：70％乙醇固定5min。染色：滴1d甲基绿-哌洛宁染液染色5-10min，水冲洗后在纯丙酮中分化处理2-3s。观察绘图第33页/共44页【实验步骤】B.血细胞计数制备蛙血细胞悬液，稀释400-600×熟悉血细胞计数板，找到计数室和计数区域盖玻片盖在计数板槽上，吸取1d血细胞悬液滴在盖玻片外侧边缘，使其渗入计数室10×物镜下计数（四角的4大格）细胞密度换算：细胞数/ml=4大格细胞数/4×10000×稀释倍数第34页/共44页【作业】绘图：核酸的细胞内定位细胞计数结果和密度换算第35页/共44页实验五细胞的有丝分裂和减数分裂第36页/共44页【实验目的】掌握细胞有丝分裂的过程和各时期特征；熟悉植物细胞染色体压片标本的制作方法；了解生殖细胞减数分裂过程和特征。第37页/共44页【实验原理】体细胞有丝分裂第38页/共44页【实验步骤】A大蒜根尖有丝分裂压片的制备和观察1大蒜根尖用0.5%秋水仙素处理2－4h2洗去Col后，切下根尖置于小瓶中，加1:1无水乙醇和浓盐酸固定、离析，10min3吸去固定液后，水洗2次×5min4材料置于载玻片上，切去根冠和伸长区，保留分生区，加品红染色30min545％醋酸分色后，盖上盖玻片，压片6显微镜观察：统计分裂指数，分辩各时相特征。B有丝分裂切片的观察观察马蛔虫受精卵有丝分裂切片第39页/共44页洋葱根尖细胞的有丝分裂（40×）第40页/共44页