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文档简介
过氧化S(h2o2)检测试剂盒(硫酸钛比色法)简介:过氧化氢(H2O2)是生物体内最常见的活性氧分子,主要由SOD和XOD等催化产生,由CAT和POD等催化降解。Leagene过氧化氢(H2O2)检测试剂盒(硫酸钛比色法)其检测原理是H2O2与硫酸肽反应发生的过氧化物-钛复合物黄色沉淀,溶解于强酸中,其黄色深浅与过氧化氢浓度在一定范围内呈线性关系,通过分光光度计检测412nm处吸光度。该试剂盒主要用于检测植物组织、血清、血浆等样品中过氧化氢(H2O2)含量。该试剂盒仅用于科研领域,不宜用于临床诊断或其他用途。组成:编号名称一—TO107650TStorage试剂(A):H2O2标准1mlRT试剂(B):碱性基液10.5mlRT试剂(C):硫酸钛1gRT试剂(D):酸性基液100mlRT使用说明书1份自备材料:1、蒸馏水2、丙酮3、低温离心机4、比色杯5、分光光度计操作步骤(仅供参考):1、准备样品:植物样品:取正常或逆境下的新鲜植物组织,清洗干净,擦干,切碎,迅速称取,加入预冷的丙酮,在冰浴条件下迅速匀浆或研磨,41离心,收集上清液,测量提取液总体积,4°C保存备用。血浆、血清和尿液样品:血浆、血清按照常规方法制备后可以直接用于本试剂盒的测定,4C保存,用于过氧化氢的检测。高活性样品:如果样品中含有较高浓度的过氧化氢,可以使用丙酮进行恰当的稀释。
2、酉己制100pM丙酮-H2O2溶液取H2O2标准准确溶解于蒸馏水中即得10mM的H2O2o取H2O2准确溶解于丙酮中,即为100pM的丙酮-H2O2溶液,按下表依次稀释:加入物(ml)12345内酮-H2O2溶液(100|jM)0.20.40.60.81预冷内酮0.80.60.40.20H2O2含量(nmol)204060801003、酉己制硫酸钛溶液:将硫酸钛小心缓慢的加入至浓盐酸中,即为硫酸钛溶液,4C避光保存。4、H2O2加样:按照下表设置空白管、标准管、测定管,溶液应按照顺序依次加入,并注意避免产生气泡。如果样品中的h2o2浓度过高,可以减少样品用量或适当稀释后再进行测定,样品的检测最好能设置平行管。加入物(ml)空白管标准管测定管预冷内酮1——系列内酮-h2o2溶液—1—彳寺测样品——1碱性基液(直接加入到溶液)0.20.20.2硫酸钛溶液(直接加入到溶液)0.10.10.1加入碱性基液、硫酸钛溶液时,应直接加入溶液,不要粘到管壁。5、H2O2测定:混匀弃上清液,留取沉淀,如有必要可加入预冷丙酮反复洗涤沉淀物。向标准管、测定管的沉淀中加入2ml酸性基液,摇动,使沉淀完全溶解(注意:空白管无需该步骤)。比色杯光径1cm,以空白调零,以分光光度计测定412nm处系列标准管、测定管的吸光度。如果没有分光光度计,亦可用酶标仪检测,但如果有条件,尽量采用分光光度计测定。计算:以系列丙酮-H2O2溶液(20、40、60、80、100nmol/L)为横坐标,以对应的吸光度为纵坐标,绘制标准曲线,求得回归方程。以测定管吸光度代入回归方程求得待测样品中H2O2含量。组织样品H2O2(nmol/g)=(m0xVT)/(m1xVS)液体样品H2O2(nmol/ml)=(m0xVT)/VS注意*项:1、本试剂盒亦可用酶标仪进行检测,但检测的样本数相应增多。如果有条件,尽量采用
分光光度计检测。2、H2O2标准和碱性基液应严格密闭保存,避免挥发,否则效率会下降。3、H2O2标准和酸性基液有一定腐蚀性,请小心操作。4、加入碱性基液、硫酸钛溶液时,应直接加入溶液,不要粘到管壁。5、过氧化物-钛复合物黄色沉淀溶解于酸性基液时需要一段时间,需完全溶解,否则有可能影响比色结果。6、为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。有效期:12个月有效。相关:编号名称CS0001ACK红细胞裂解液(ACKLysisBuffer)DF0111中性
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