第3章-氨基酸和蛋白质

第3章氨基酸和蛋白质单元自测题名词解释或概念比较1．氨基酸，2．肽键与肽，3．结构域，4．单体蛋白和寡聚蛋白，5．蛋白质的构象与构型，6．肽键，7．蛋白质的化学修饰，8．疏水效应，9．分子伴侣，10．Western印迹，11．同促效应与异促效应，12．Bohr效应，13．抗原决定簇，14．半抗原，15．亲和层析，16．必须氨基酸与非必须氨基酸，7．透析，18．双向电泳，19．Edman降解法，20．等电点，21．多克隆抗体与单克隆抗体，22．单纯蛋白质与綴合蛋白质，23．同寡聚蛋白与杂寡聚蛋白，24．等电聚焦。填空题1．氨基酸在晶体状态或在水溶液中主要以形式存在。2．天冬氨酸的pK1（－COOH）值是2.09，pK2（β－COOH）值是3.86，pK3（－NH3+）值是9.82，它的等电点是。组氨酸的pK1（－COOH）值是1.82，pK2（咪唑基）值是6.00，pK3（－NH3+）值是9.17，它的等电点是。3．在近紫外区能吸收紫外光的氨基酸有，和。其中的摩尔吸光系数最大。4．在氨基酸的含量分析中，可以先用法分离氨基酸，再用显色法进行定量分析。5．在进行蛋白质的N末端氨基酸序列分析中，主要利用反应。6．根据蛋白质的形状和溶解度的差异，可以将它们分为，和。7．球状蛋白质中，大部分的氨基酸残基在分子的表面，而大部分的氨基酸残基在分子的内核。8．生物体内的蛋白质在折叠过程中通常有和参与。9．目前研究蛋白质晶体结构的方法主要是。10．血红蛋白（Hb）与氧结合时呈现效应，是通过血红蛋白的现象实现的。肌肉组织中CO2和H+促进O2的释放，这种现象称为效应。11．用溴化氰水解蛋白质时，肽键在残基的右端裂解。12．用胰凝乳蛋白酶水解蛋白质时，肽键在和残基的右端裂解。13．蛋白质分子上的磷酸化修饰位点主要在，和三种氨基酸上。14．在膜蛋白的跨膜区上，氨基酸朝向分子外侧，氨基酸朝向分子内侧。15．镰刀型红细胞贫血是由于正常血红蛋白分子中的一个被置换引起的。16．胰岛素是分泌的多肽激素。前胰岛素原被蛋白酶水解，失去N端的，生成。再经过肽酶激活，失去，生成具有生物活性的胰岛素。17．在不同生物体内行使相同或相似功能的蛋白质称为，其氨基酸序列中有许多位置的氨基酸残基对大多数物种来说都是相同的，称为；而其它位置的氨基酸残基对大多数物种来说都是不同的，称为。18．常见的丝氨酸蛋白酶有，和。19．影响α螺旋形成的主要因素有R基的和。20．蛋白质变性以后，结构遭到破坏，而结构仍然保持完整。21．免疫球蛋白是由条肽链组成的血液蛋白，每条肽链的N末端为区，是识别抗原的活性区域，C末端部分是区。22．蛋白质分子中的α螺旋结构靠链内氢键维持，每转一圈上升个氨基酸残基。23．细胞色素C中的的脱辅基蛋白与血红素辅基以键结合。24．在糖蛋白中，糖链通常与蛋白质的，和残基共价结合。25．现要在葡聚糖凝胶G－75柱上分离下列4种蛋白质，它们的分子量分别是A.12000，B.62000，C.28000，D.9000。他们从柱中流出的先后次序是，，，和。26．蛋白质水溶液在pH6具有缓冲作用，这主要是由于蛋白质分子中的基团的解离作用。27．中性盐对球状蛋白质的溶解度有显著的影响。在低浓度时，中性盐可以增加蛋白质的溶解度，这种现象称为。当盐的浓度增加到一定数值时，蛋白质的溶解度开始下降，并有蛋白质沉淀出现，这种现象称为。28．鉴定蛋白质纯度的电泳方法主要有，和。29．测定蛋白质相对分子量的主要方法有，和。30．利用蛋白质分子对其配体分子特有的识别能力建立起来的分离纯化蛋白质的方法是31．要保持蛋白质胶体溶液稳定，蛋白质分子应该具备下列三个条件：分子大小在范围内，和等。32．抗原－抗体识别、结合必要条件是和。33．蛋白质中杂环族氨基酸包括，和。34．蛋白质的糖基化过程发生在细胞的和部位。35．蛋白质分子周围的和是稳定蛋白质胶体的主要因素。36．肌红蛋白和血红蛋白在进化中形成多肽微环境，其作用是，，和。37．沉淀蛋白质的方法主要有，，，和。38．研究溶液中蛋白质构象的光谱学方法主要有，，和。选择题1．蛋白质水解过程中，下列哪一种方法对色氨酸的破坏最大。A.酸水解法B.碱水解法C.酶水解法D.高温水解法2．在蛋白质一级结构测定时要确定二硫键的位置，可以用下列哪一种方法测定出含二硫键的肽段。A.巯基化合物还原B.过甲酸氧化C.对角线电泳D.双向电泳3．研究蛋白质的空间结构时，用下列哪一种方法最有效。A.荧光光谱B.紫外光谱C.X光衍射D.圆二色性4．蛋白质亚基间的空间排布、相互作用及接触部位的空间结构称为A.二级结构B.三级结构C.四级结构D.结构域5．遍在蛋白（ubiquitin）具有（）的功能A.促进蛋白质的降解B.协助蛋白质折叠C.促进蛋白质合成6．在蛋白质分子中，下列哪一种氨基酸残基的侧链可以作为糖基化位点。A.脯氨酸B.赖氨酸C.丙氨酸D.丝氨酸7．在SDS聚丙烯酰氨凝胶电泳时，用（）还原二硫键。A.尿素B.巯基乙醇C.过甲酸D.SDS8．免疫球蛋白是一种（）蛋白。A.核蛋白B.蛋白铁C.铜蛋白D.糖蛋白9．胰岛素的活化时，胰岛素原转变成胰岛素的过程是在（）中进行的。A.线粒体B.内质网C.溶酶体D.高尔基体10．180个氨基酸残基形成完整的-螺旋（3.613）时，其螺旋长度是A.27nmB.25nmC.26nmD.12nm11．下列关于D氨基酸的叙述中，哪一项是不正确的？A.D氨基酸多数由L－氨基酸经消旋作用而形成B.消旋酶的辅因子是磷酸吡哆醛C.D氨基酸往往存在于肽类抗生素中D.肽链中的D－氨基酸来源于游离的合成前体D－氨基酸12．在人工合成多肽时，常用的氨基保护剂是A.叔丁氧甲酰基B.苄酯C.叔丁酯D.苄基13．下列哪种氨基酸是成人的必需氨基酸？A.AlaB.TyrC.LeuD.Ser14．下面关于锁链素的叙述哪项是正确的？A.它是非蛋白质氨基酸B.它是蛋白质的基本氨基酸C.它存在于某些蛋白质中D.它只存在于弹性蛋白中 15．胶原蛋白中，含量最多的氨基酸残基是A.组氨酸B.丙氨酸C.甘氨酸D.缬氨酸16．下列哪一种试剂可以用来测定多肽链的N末端。A.溴化氰B.胰蛋白酶C.盐酸胍D.丹磺酰氯17．一个蛋白质的pI值是5.0，如果把它放在pH6.0缓冲溶液中电泳，其泳动方向是A.向正极移动B.向负极移动C.在原位不动18．蛋白质的等离子点是什么情况下净电荷为零的pH值A.无盐情况下B.高盐浓度下C.低盐浓度下19．下列关于折叠的叙述哪一点是不正确的？A.折叠的肽链处于伸展状态B.它是借助疏水作用而稳定的C.它的氢键是肽链骨架的与间形成的D.角蛋白通过湿热处理可转变成折叠结构20．血红蛋白的氧合曲线向右移动是由于A.O2分压降低B.CO2分压降低C.CO2分压升高D.pH增加21．Edman试剂与多肽链游离N末端氨基酸偶联的反应介质应该是A.弱酸性的B.弱碱性的C.强酸性的D.中性的22．每分子血红蛋白含铁原子数为A.1个B.2个C.3个D.4个23．双缩脲反应通常用来用来测定（）的含量。A.DNAB.RNAC.胍基D.蛋白质24．在酶促合成多肽的过程中，可以用下列哪一种酶作为催化剂A.蛋白激酶B.氨酰tRNA连接酶C.氨基转移酶D.蛋白水解酶25．某一种蛋白质在pH5.0时向阴极移动，其等电点应该是A.＞5.0B.＝5.0C.＜5.026．在pH7的水溶液中，典型的球状蛋白质分子中，处在分子内部的氨基酸残基是A.AspB.LysC.PheD.Thr27．下列关于HbA的叙述哪一项是正确的？A.由两个亚基和两个亚基组成（22）B.由两个亚基和两个亚基组成（22）C.由两个亚基和两个亚基组成（22）D.由两个亚基和两个亚基组成（22）28．在丁醇－乙酸－水溶剂系统中进行纸层析时，发现氨基酸的Rf值太小，为了使Rf值增大，应在A.层析缸中多加一些展层溶剂 B.溶剂系统中加大丁醇的比例C.溶剂系统中加大乙酸的比例 D.溶剂系统中加大水的比例29．GSH的全称是A.谷氨酰半胱氨酰甘氨酸B.谷氨酰半胱氨酰甘氨酸C.谷氨酰胱氨酰甘氨酸 D.谷氨酰胱氨酰甘氨酸30．蛋白质分子中的天冬酰胺和谷氨酰胺是A.蛋白质合成好以后经过转酰胺作用生产的B.蛋白质合成好以后经过转氨基作用生产的C.生物合成时从mRNA模板上译读出来的D.生物合成时从rRNA模板上译读出来的31．下列关于纤维状蛋白质的叙述哪一项是正确的？A.纤维状蛋白质包括角蛋白、角蛋白、胶原蛋白、弹性蛋白和肌球蛋白等B.角蛋白主要存在于皮肤中C.胶原蛋白主要在肌肉组织中存在D.丝心蛋白是角蛋白32．世界上第一个人工合成的酶是A.牛胰核糖核酸酶B.胰蛋白酶C.溶菌酶D.羧肽酶A33．下列哪种蛋白质分子中含有羧基谷氨酸？A.胰蛋白酶B.凝血酶原C.胶原蛋白D.胰岛素 34．下列关于IgG的叙述中哪一项是不正确的A.每个抗体有两个抗原结合部位B.在多发性骨髓细胞癌患者的尿中有不完整的免疫球蛋白C.轻链和重链都有恒定的C末端氨基酸序列和可变为N末端氨基酸序列D.保持免疫球蛋白链间连结的唯一作用力是非共价键35．下列的四种氨基酸中，没有旋光性的氨基酸是A.GlyB.ArgC.PheD.His36．对丙酮酸激酶缺乏症患者来说，测定其生理生化指标之前，你能预示会发生下述哪种现象？A.血红蛋白对氧亲和力升高B.血红蛋白对氧亲和力降低C.2，3二磷酸甘油酸水平下降D.2，3二磷酸甘油酸水平不变是非题1．蛋白质在结构和功能上的多样性，是由20种基本氨基酸R侧链的物理和化学性质的差异造成的。2．用碱水解蛋白质，得到的游离氨基酸都是L－氨基酸。3．在蛋白质分子中，每一种氨基酸至少都有一个对应的遗传密码。4．蛋白质在生物体内合成之后的共价修饰都属于不可逆化学修饰。5．在用凯氏定氮法测定粗蛋白质的含量时，不同种类蛋白质的含氮量都是16%。6．多肽链中游离α-氨基与游离α-羧基的距离比氨基酸中的大，因此多肽中的末端α-羧基的pKa值比游离氨基酸中的大一些。7．生物体内蛋白质的合成方向是从N端到C端，在体外用化学合成法合成蛋白质时，通常是从C端到N端。8．在各种－螺旋结构中，每圈螺旋占3.6个氨基酸残基。9．蛋白质的－螺旋结构中，左手螺旋比右手螺旋更稳定。10．糖蛋白中，糖与蛋白质以共价键连接。11．蛋白质变性时，蛋白质分子的天然构象解体，共价键被破坏。12．β桶型膜蛋白分子中，跨膜肽段的二级结构是－螺旋。13．蛋白质折叠过程中，折叠结构在生理条件下是自由能最低的构象，因此多肽链的折叠是自发过程。14．在蛋白质分子中，肽键是唯一的一种连接氨基酸残基的共价键。15．甘氨酸和脯氨酸在－螺旋中出现的频率很高。16．hsp70蛋白是一类热休克蛋白质，它们通过抑制新生肽链的不恰当聚集，协助多肽链的正确折叠。17．在免疫分析中，单克隆抗体比多克隆抗体具有对抗原更强的专一性。18．具有单个跨膜肽段的膜蛋白分子中，跨膜肽段的二级结构通常是β折叠。19．在生物膜上，膜蛋白可以多次穿过脂双层。20．蛋白质分子中任何一个氨基酸改变，一定会引起该蛋白质功能的改变。21．20种基本氨基酸中都有不对称碳原子，因此它们都具有旋光性。22．具有天然构象的蛋白质，主链上的单键可以自由旋转。23．不同种类的蛋白质，对280nm紫外光的摩尔吸光系数是相同的。24．蛋白质变性以后，摩尔吸光系数会增大。26．从DNA的序列可以准确推断出蛋白质中氨基酸的序列，反之从氨基酸的序列也可以准确推断出DNA序列。27．溶液中的球状蛋白质分子，在等电点时溶解度最大。28．凝胶过滤法可以用来测定蛋白质的相对分子量，分子量小的蛋白质先流出层析柱，分子量大的后流出层析柱。29．蛋白质的SDS聚丙烯酰氨凝胶电泳中，分子量大的蛋白质在凝胶中的迁移速度较快。30．质膜上的糖蛋白的糖基都位于膜的外侧。31．血红蛋白与肌红蛋白的结构相似，都具有结合氧的能力。在生理条件下氧与血红蛋白的亲和力比与肌红蛋白的亲和力强。32．多聚谷氨酸在pH7时，由于γ－羧基解离，不易形成α螺旋结构。33．核糖核酸酶分子的变性－复性实验可以证明，蛋白质的一级结构决定高级结构。34．茚三酮在弱酸中与－氨基酸共热，引起氨基酸的氧化脱氨、脱羧反应，茚三酮与氨和还原茚三酮反应，生成紫色化合物。35．肽链中的肽键一般是反式构型，而脯氨酸的肽键可能出现顺、反两种构型。36．双缩脲反应是肽和蛋白质特有的反应，游离氨基酸没有此反应。37．蛋白质分子中，一个氨基酸的α－氨基与另一个氨基酸的α－羧基缩合，只有末端基团及侧链基团具有化学活性。38．从能量学上看，反平的β－折叠比平行的更稳定。39．多肽链的二级结构主要由R基的长程顺序决定，多肽链的三级结构主要由氨基酸的短程顺序决定。40．二磷酸甘油酸（BPG）能降低氧与血红蛋白的亲和力。（五）简答与计算1．根据下列实验结果，推断多肽的序列。A.氨基酸的组成是Gly，Leu，Phe和Tyr，它们的摩尔比是2：1：1：1B.用2，4-二硝基氟苯处理该多肽，然后完全水解。水解产物中有Tyr的2，4-二硝基氟苯衍生物，但是没有游离的Tyr。C.用胃蛋白酶完全水解该多肽，产物中含有Leu和Phe的二肽，及含有Gly和Tyr（比例为2：1）的三肽。（胃蛋白酶的特异降解位点是Phe和Tyr的N端肽键。）2.α螺旋的稳定性不仅取决于肽链内部的氢键，而且还与氨基酸侧链的性质有关。室温下，在溶液中下列多聚氨基酸哪些能形成α螺旋?哪些能形成其他有规则的结构?哪些能形成无规则的结构?并说明其理由。(1)多聚亮氨酸pH=7，(2)多聚异亮氨酸pH=7.0(3)多聚精氨酸pH=7.0(4)多聚精氨酸pH=13.0(5)多聚谷氨酸pH=1.5(6)多聚苏氨酸pH=7.0(7)多聚羟脯氨酸pH=7.03．谷氨酸解离基团的pK值分别是pK1(－COOH)=2.19，pK2(－NH3)=9.67，pKR(－COOH)=4.25，谷氨酸的等电点应是多少？为什么？4．某一蛋白质分子含有100个氨基酸残基，它是一条充分伸展的多肽链，试计算该蛋白质肽链的长度和分子量。5．举例说明蛋白质的一级结构决定蛋白质的高级结构。6．在真核细胞的染色体DNA上有大量的组蛋白（pI约10.8），这些组蛋白能与DNA分子上的磷酸基团紧密结合。试问组蛋白的等电点为什么会很高，组蛋白依靠什么力与磷酸基团结合？7．血库中长时间储存的血液，如果不采取措施，2，3－BPG的浓度会下降。如果这样的血用于输血，可能会产生什么后果？8.在有蛋白质抗体存在或不存在情况下，请各写出一种方法证明某一种较低分子量的蛋白质是否为此蛋白质的降解产物?9．某种溶液中含有下列三种三肽：Tyr－Arg－Ser，Glu－Met－Phe和Asp－Pro－Lys。并且，－COOH基团的pK=3.8，－NH3pK8.5。问在哪种pH（2.0，6.0，13.0）条件下，用电泳分离这三种三肽效果最好？10．血红蛋白含铁量为0.34%，血红蛋白的最小相对分子质量是多少？实验数据表明血红蛋白的相对分子质量是64500，计算血红蛋白含有几个铁原子？11．向1.0L浓度为1.0mol/L的处于等电点的甘氨酸溶液中加入0.3mol的HCL，问所得溶液的pH值是多少？如果加入1.0L浓度为0.3mol的NaOH以替代HCL时，溶液的12．试以IgG为例，简述免疫球蛋白分子的结构特点。13．氨基酸混合物的分离可用哪些方法？14．从某种植物中分离得到一种脯氨酸羟化酶的抑制剂，将它喂食大鼠，会导致其血管变脆，牙龈出血，为什么？人类患维生素C缺乏症时也会出现上述症状，为什么？15．分别计算谷氨酸的－COOH四分之三被解离时溶液的pH；赖氨酸的－NH3+五分之一被解离时溶液的pH。（－COOHpKa＝4.25，－NH3+pKa＝10.53）16．将含有天冬氨酸（pI＝2.98）、甘氨酸（pI＝5.97）、苏氨酸（pI＝6.53）、亮氨酸（pI＝5.98）、赖氨酸（pI＝9.84）的pH3.0柠檬酸缓冲液，加到预先用同样缓冲液平衡过的Dowex－50的将阳离子交换树脂中，用缓冲液洗脱，这5种氨基酸将按什么顺序洗脱下来？17．有一个A肽，经过酸水解后分析氨基酸组成，得知由Lys、His、Asp、Ala、Val、Tyr和两Glu及两个NH3分子组成。（1）FDNB与A肽反应后，水解得到DNP－Asp。（2）用羧肽酶水解A肽，得到游离Val。（3）用胰蛋白酶水解A肽，得到两种肽段。一个肽段（Lys、Asp、Glu、Ala、Tyr）在pH6.4时净电荷为零；另一个肽段（His、Glu、Val）与FDNB反应后，水解得到DNP－His，且此肽段在pH6.4时带正电荷。（4）用糜蛋白酶水解A肽，得到两种肽段。一个肽段（Asp、Ala、Tyr）在pH6.4时净电荷为零；另一个肽段（Lys、His、2Glu、Val）在pH6.4时带正电荷，求A肽的氨基酸序列。18．简述制备单克隆抗体的基本步骤。19．蛋白质A和B各有一个配体X的结合部位，蛋白质A的解离常数Kd为1.0×10－6mol/L，蛋白质B的解离常数Kd为1.0×10－9mol/L。问（1）哪一个蛋白质对配体的亲和力高？（2）将这两个蛋白质的解离常数Kd转换为结合常数Ka。20．谷氨酸各个基团的解离常数及等电点分别是pK1α－COOH为2.19，pK2α－N+H3为9.67，pKRR－COOH为4.25，pI为3.22。（1）Glu-和Glu=各一半时的pH值（2）Glu总是带正电荷的pH范围（3）Glu±和Glu-能作为缓冲液使用的pH范围21．人工合成的多聚L脯氨酸，能够形成胶原三螺旋结构中的一个单股螺旋的构象，试问：(1)多聚L脯氨酸能否形成三螺旋?为什么?(2)你认为多聚(甘—脯—甘—脯)能否组成类似胶原的三螺旋结构?为什么?六、参考答案（一）名词解释或概念比较1．氨基酸是含有至少一个碱性氨基和一个酸性羧基的有机化合物，氨基一般连接在－碳原子上。氨基酸是肽和蛋白质的构件分子。2．肽键是一个氨基酸的－羧基与另一个氨基酸的－氨基缩合形成的酰胺键。肽是指两个或两个以上氨基酸通过肽键形成的聚合物。3．多肽链在二级结构或超二级结构基础上折叠成两个或多个趋于紧密的近乎球状的三维实体，这种实体称为结构域。结构域是大分子球状蛋白质三级结构的折叠单位，一般由100－200个氨基酸残基构成。4．由一条多肽链组成或由有共价键连接的多条多肽链组成的蛋白质称为单体蛋白，例如溶菌酶和胰凝乳蛋白酶。由两个或两个以上亚基组成的蛋白质称为寡聚蛋白，亚基之间是非共价间连接的。例如血红蛋白是一个由4个亚基组成的寡聚蛋白，寡聚蛋白具有别构作用。5．蛋白质的构象是指蛋白质的立体结构或空间结构，表示在蛋白质分子中由于单键的旋转所产生的所有原子或基团的空间排列。一个蛋白质构象有无数种，构象的变化不需要共价键的断裂，只需要单键的旋转。在生物体内，蛋白质往往只有一种构象，称为天然构象。构型表示在立体异构体中其取代基团的空间排布。构型的改变必须要有共价键的断裂和重新生成。构型的改变会引起光学性质的变化，而且D型和L型异构体可以区分和分离。6．一个氨基酸的－氨基与另一个氨基酸的－羧基脱水缩合形成的酰胺键称为肽键，肽键具有平面性质。7．在较温和条件下，以可控制的方式使蛋白质与某种试剂（称化学修饰剂）起特异反应，以引起蛋白质中个别氨基酸残基的侧链基团发生共价化学改变。可用于研究某个氨基酸残基的功能或改变蛋白质的理化性质。8．水介质中的球状蛋白质的折叠总是趋向于把疏水残基埋藏在分子的内部，这种现象称为疏水作用。蛋白质溶液系统的熵增加是疏水作用的主要动力。9．是一个协助新合成的多肽链正确折叠和转运的蛋白质家族。它们能够抑制新生肽链的不恰当的聚集，排除与其它蛋白质的不合理结合，协助多肽链的正确折叠和跨膜转运，协助寡聚蛋白的组装。10．是一种利用抗原－抗体反应检测特异蛋白质的方法。首先对蛋白质样品进行凝胶电泳分离，将被分离开的蛋白质转移到硝酸纤维素膜上，然后相继用第一抗体、酶标第二抗体以及底物进行处理，只有含待测蛋白质的条带显示颜色。11．别构效应可以分为同促效应和异促效应。同促效应发生作用的部位是相同的，例如都是催化部位，即一种配体的结合对其它部位的同种配体的亲和力的影响。异促效应发生作用的部位是不相同的，即活性部位的结合行为受到别构部位与效应物结合的影响。12．氧与血红蛋白的结合深受pH和CO2浓度的影响。H+和CO2浓度增加，使得血红蛋白的氧合曲线向右移动，提高了O2从血红蛋白的释放量。13．14．分子量小于5000的化合物一般没有抗原性，不能引起免疫反应。如果将这些小分子化合物共价连接到蛋白质上，这种形式的小分子可以引起免疫反应。这种自身无抗原性，与载体结合以后有了抗原性的物质称为半抗原。15．亲和层析是利用蛋白质分子对其配体分子特有的识别、结合能力建立起来的高效的分离纯化方法。把待纯化的蛋白质的特异配体共价连接到载体表面，将此载体装入层析柱。当蛋白质混合物加到层析柱上时，待纯化的蛋白质与配体特异结合，吸附在层析柱上，而其它的蛋白质（杂蛋白）不能被吸附，通过洗脱可以除去。最后用含游离配体的溶液可以将与配体结合的蛋白质洗脱下来。16．必须氨基酸是指人（或其它脊椎动物）自己不能合成，需要从食物中直接获得的氨基酸，例如赖氨酸、苏氨酸等氨基酸。非必须氨基酸是指人（或其它脊椎动物）自己能从简单的前体合成的，不需要从食物中直接获得的氨基酸，例如甘氨酸、丙氨酸等氨基酸。17．小分子化合物能自由穿过半透膜扩散到水或缓冲液中，而生物大分子（例如蛋白质）不能透过半透膜，被截留在半透膜内。用此技术可以将小分子化合物与生物大分子分离。18．是将等电点聚焦电泳和SDS－聚丙烯酰胺凝胶电泳结合起来的一种电泳方法。首先，先进行等电点聚焦电泳，按照蛋白质的等电点差异分离；然后，再进行SDS－聚丙烯酰胺凝胶电泳，按照蛋白质的大小差异分离。染色后得到的电泳图是二维分布的蛋白质图。19．是一种用来测定多肽和蛋白质氨基酸序列的方法。用异硫氰酸苯酯与多肽的N末端的氨基酸反应，从多肽链的N末端切下第一个氨基酸残基，用层析法可以测定这个被切下的氨基酸残基。回收余下的多肽链（少了一个氨基酸残基），再进行下一轮Edman降解循环，切下N末端的第二个氨基酸残基，并测定。重复循环过程，直到测定出整个多肽的氨基酸序列。20．氨基酸、肽和蛋白质分子都是两性分子，使得这些分子带有的净电荷为零时，对应的溶液的pH值称为等点电。结构不同的两性分子，等电点不同。21．多克隆抗体是识别一个蛋白质（抗原）的不同抗原决定簇的多种抗体的混合物。单克隆抗体由同一个B细胞克隆合成并分泌，是一种均一的抗体，识别同一个抗原决定簇。22．仅由氨基酸组成的蛋白质称为单纯蛋白质，例如核糖核酸酶和肌动蛋白。由氨基酸和其它各种化学成分组成的蛋白质称为綴合蛋白质，其中非蛋白质部分称为辅基或配体，例如糖蛋白和脂蛋白。23．由相同亚基组成的寡聚蛋白称为同寡聚蛋白，例如乳酸脱氢酶LDH1，由4个H亚基组成。由两种或两种以上亚基组成的寡聚蛋白称为杂寡聚蛋白，例如血红蛋白，由2个α亚基和2个β亚基组成。24．是一种高分辨率的蛋白质分离技术，也可以用于测定蛋白质的等电点。将蛋白质混合物放在具有pH梯度的电泳介质中，在外电场的作用下蛋白质移动并聚焦（停留）在等于其等电点的pH梯度处，形成一个很窄的区带。(二)填空题1.两性离子2.2.97，7.593.苯丙氨酸，色氨酸，酪氨酸；色氨酸4.离子交换层析，茚三酮5.苯异硫氰酸酯或Edman6.纤维状蛋白质，球状蛋白质，膜蛋白7.极性，非极性8.异构酶，伴侣蛋白9.X射线衍射法/X射线晶体结构分析10.协同效应，变构，波尔11.甲硫氨酸12.赖氨酸，精氨酸13.丝氨酸，苏氨酸，酪氨酸14.非极性或疏水，极性或亲水15.谷氨酸，缬氨酸16.胰岛β细胞，信号肽，胰岛素原，C肽17.同源蛋白质，不变残基，可变残基18.胰蛋白酶，胰凝乳蛋白酶，弹性蛋白酶19.大小，电荷性质20.高级结构/二、三和四级，一级21.4，可变，不变22.323.共价24.天冬酰胺，丝氨酸，苏氨酸25.B,C,A,D26.组氨酸的咪唑基27.盐溶，盐析28.等电点聚焦电泳，毛细管电泳，聚丙烯酰胺凝胶电泳29.沉降速度法/沉降平衡法，凝胶过滤法，SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳法30.亲和层析法31.1－100nm，带有同种电荷，能形成水化层32.抗原决定簇与抗体结合部位构象互补，二者各有对应的化学基团通过作用力使二者结合（离子键、氢键等）33．色氨酸，组氨酸，脯氨酸34．内质网，高尔基体35．双电层，水化层36．固定血红素，保护血红素铁免遭氧化，为氧分子提供一个合适的结合部位37．盐析法，有机溶剂沉淀法，重金属盐沉淀法，生物碱试剂沉淀法，加热变性沉淀法38．紫外差光谱法，荧光和荧光偏振法，圆二色性法，核磁共振法（三）选择题1．A2．C3．C4．C5．A6．D7．B8．D9．D10．A11．D12．A13．C14．D15．C16．D17．A18．A19．B20．C21．B22．D23．D24．D25．A26．C27．A28．B29．B30．C31．A32．A33．B34．D35．A36．B（四）是非题1．对2．错3．错4．错5．错6．对7．对8．错9．错10．对11．错12．错13．对14．错15．错16．对17．对18．错19．对20．错21．错22．错23．错24．对25．错26．错27．错28．错29．错30．错31．错32．对33．对34．对35．对36．对37．对38．对39．错40．对（五）简答与计算1．Tyr－Gly－Gly－Phe－Leu2．(1)多聚亮氨酸的R基团不带电荷，适合于形成。螺旋。(2)异亮氨酸的β碳位上有分支，所以形成无规则结构(3)在pH7.0时，所有精氨酸R的基团都带正电荷，正电荷彼此相斥，使氢键不能形成，所以形成无规则结构。(4)在pHl3.0时，精氨酸的R基团不带电荷，并且β碳位上没有分支，所以形成α螺旋。(5)在pHl.5时，谷氨酸的R基团不带电荷，并且芦碳位上没有分支，所以形成α螺旋。(6)因为苏氨酸β碳位上有分支，所以不能形成α螺旋。(7)脯氨酸和羟脯氨酸折叠成脯氨酸螺旋，这脯氨酸螺旋是不同于α螺旋的有规则结构。一个小肽的氨基酸顺序的测定用异硫氰酸苯酯；多肽链的氨基末端的确定用丹磺酰氯；一个没有二硫键的蛋白质的可逆变性用尿素；芳香族氨基酸残基的羧基一侧肽键的水解用胰凝乳蛋白酶；甲硫氨酸的羧基一侧肽键的裂解用溴化氰；通过氧化途径将二硫键打开用过甲酸。3．pI=（2.19＋4.25）/2＝3.22谷氨酸的等电点应是3.22。 在pH3.22时，－COOH和－COOH共解离1个基团，即Glu分子处于净电荷为零的两性离子状态。4．在伸展的多肽链中，每一个氨基酸残基长度是0.36nm。该肽链的长度是0.3610036nm。氨基酸残基的平均分子量为120（也可为110），则该蛋白质的分子量是100120120005．牛胰核糖核酸酶变性－复性实验。天然的牛胰核糖核酸酶在8mol/L的尿素或6mol/L的盐酸胍存在下，用β硫基乙醇处理后，分子内的4个二硫键断裂，紧密的球状结构伸展成松散的无规卷曲构象，活性丧失。用透析法将变性剂除掉后，牛胰核糖核酸酶能回复到天然构象，活性能达到原来活性的95％以上。而8个半胱氨酸随机结合，形成正确构象的概率是1/105。这说明牛胰核糖核酸酶肽链上的氨基酸序列信息控制肽链折叠成正确的天然构象。6．Lys，His和Arg的含量较高。静电相互作用。组蛋白的pI值是10.8，在生理条件下组蛋白带大量的正电荷，而DNA的磷酸基团带大量的负电荷。7．