第11章3其他类型hplc色谱法uplc

2023/4/91第十一章-3

其他类型高效液相色谱法超高效液相色谱法UltraPerformanceLiquidChromatography，UPLC22023/4/9宋敏中国药科大学药物分析教研室特 点色谱柱填料一直向着更小颗粒，dp仅为1.7μm高压，色谱仪输液泵提供的输出压力可达140MPa快速，常规高效液相色谱需要30min完成的样品分析在超高效液相色谱仪上缩短为仅需5min高效，柱效达20万块/m理论塔板数32023/4/9宋敏中国药科大学药物分析教研室基本原理

dpH42023/4/9宋敏中国药科大学药物分析教研室结果

（一）比HPLC更高的分离度dpnR52023/4/9宋敏中国药科大学药物分析教研室结果

（二）比HPLC更高的分析速度柱长缩短会加快分离速度颗粒度越小，最佳流速也越大，进而可以通过提高流速来进一步加快分离速度62023/4/9宋敏中国药科大学药物分析教研室结果

（三）比HPLC更高的灵敏度更高的柱效、更窄的色谱峰宽，因为色谱峰变得更窄，峰高也就更高了。因此，UPLC技术在改善分离度的同时亦可提高检测灵敏度72023/4/9宋敏中国药科大学药物分析教研室关键技术新型的色谱填料及装填技术耐压而且颗粒度分布范围很窄的1.7µm颗粒填料超高效液相色谱仪泵：密封、高压动力，精度高高速检测器：非常高的采样速度和非常小的时间常数；死体积要尽可能小；光学灵敏度82023/4/9宋敏中国药科大学药物分析教研室应 用体内药物分析、中药分析、代谢组学分析及其它一些生化领域先导化合物的筛选蛋白质组学研究天然产物的分析2023/4/99第十一章-4

其他类型高效液相色谱法制备高效液相色谱法PreparativeHighPerformanceLiquidChromatography102023/4/9宋敏中国药科大学药物分析教研室与分析型HPLC比较目的：制备一定量的纯化合物分析型HPLC制备型HPLC目的获得样品的定性和定量信息分离、富集和纯化样品组分特点进样量够检测即可进样量尽可能大，以得到更多的纯品柱内径1mm～5mm柱内径1cm～10cm或更大柱填料5μm或更小柱填料7μm或更大输液泵一般流量为1ml/min输液泵流量大于10ml/min样品在流动相中的溶解度通常不重要样品在流动相中的溶解度很重要流动相的挥发性不重要流动相应具有挥发性理论基础线性色谱非线性色谱112023/4/9宋敏中国药科大学药物分析教研室制备高效液相色谱分离方法的建立122023/4/9宋敏中国药科大学药物分析教研室（一）制备型HPLC分离条件的选择1．柱效（n）色谱柱超载，但不能严重超载，否则柱效会类似于呈指数下降，其分离能力急剧下降甚至基本上没有什么分离能力2．容量因子（k）容量因子不宜过高，一般控制在1~5这个范围内就可以了，因为容量因子的增大是以时间和大量溶剂消耗为代价的132023/4/9宋敏中国药科大学药物分析教研室（一）制备型HPLC分离条件的选择3．分离因子（α）固定相－分析型色谱柱中的填料最好与后面使用的制备型色谱柱的填料是同一型号的产品流动相－目标物与其最邻近杂质达到尽可能大的分离度142023/4/9宋敏中国药科大学药物分析教研室（一）制备型HPLC分离条件的选择4．样品的溶解度

需要将大剂量的样品溶解在有限量的流动相中pH值或者离子强度替代溶剂加热样品并提高色谱柱的柱温添加表面活性剂

152023/4/9宋敏中国药科大学药物分析教研室（二）制备性分离设计1．峰接触法增加待分离样品的进样量，直至待分离组分的色谱峰与最邻近组分的色谱峰刚好接触为止2.峰重叠法增大待分离样品的进样量，直至待分离组分的色谱峰与最邻近组分的色谱峰发生重叠162023/4/9宋敏中国药科大学药物分析教研室（三）制备规模的制备性分离d1是分析柱的直径d2是制备柱的直径L1是分析型柱的长度L2是制备柱的长度172023/4/9宋敏中国药科大学药物分析教研室制备高效液相