本检验乱七八糟甲磺酸替尼衍生物

中文摘要1英文摘要2前言3正文5参考文献致谢 ]目的STI-571STI-571衍生物。应STI571K562的生长抑制作用进行了研究。HHT合用，为慢性粒细胞白血病（CML）的临床治疗提供更为有效的治疗方案。方法STI571衍生物对K562的生长抑制作用进行研究。在光学显微镜下可观察到细胞被染为蓝色，而活细胞不，借此可以在计数细胞时对死细胞与活细胞加以鉴别。其计数IC50IG503次实验，取均值和方差。B16、B17、B20、B22、B23、B24、B25、B26、B28k562细胞具有生长抑制的作用。K562B25IG500.1μM，相对于阳性STI-571(STI-571IG500.20μM2倍。Imatinibmesylatederivativesagainstchronicgranulocyteactivity ]ObjectiveOurresearchteamhasdesignedandsynthesizedaseriesofderivativesbasedonthestructureofSTI571.AndthecellgrowthinhibitioneffectsoftheseSTI571derivativesonhumanleukemiacellswereinvestigatedbytrypanblueexclusiontest,withspecialattentionto6promisingcompoundsamongthem.Screeningoftheactivecompounds,continuetoshareHHTandchronicmyeloidleukemia(CML)intheclinicaltreatmenttoprovidemoreeffectivetreatment.MaterialandmethodThecellgrowthinhibitioneffectsoftheseSTI571derivativesonhumanleukemiacellswereinvestigatedbytrypanblueexclusiontest,withspecialattentionto6promisingcompoundsamongthem.Intheopticalmicroscopeobservedthedeadcellswerestainedblue,whilethelivingcellsdidnotstain,whichinthecellcountofdeadcellsandlivecellstodifferentiate.ThediagnosticperformanceofIC50andindependentexperimentswererepeated3times,andthemeanandvariance.ResultsTheSTI57derivativesA20,B5,B6,B7,B8,B11,B12,B14,B15,B16,B17,B20,B22,B23,B24,B25,B26,B28hastheinhibitioneffectonk562cell.ConclusionEspeciallyB25witha0.1μMIG50toK562cells,isalmosttwotimesmoreactivethanSTI571,whoseIG50toK562cellsis0.20μMaccordingtoourtest. ]CML,STI571,Growthinhibition,K562前CML是一种多能造血干细胞恶性克隆性疾病，是第一个被证实为获得性异常成人急性淋巴细胞性白血病(ALL)患者和5%的儿童ALL患者。Ph是由9q34上的Abelson小鼠白血病癌(Abelsonmurineleukaemiaviraloncogene，Abl)与22q11上的断裂点区(breakpointclusterregionBcr)发生易位融合而成[1]该融合编码的Bcr-Abl融合蛋白具有异常活化的酪氨酸激骨髓酶活性，能够持续导致自CML慢性期各种病理过程。继发的其他CML疾病由慢性期发展到加速期或急性期[1,2]。目前，CML治疗方CMLCML中位数存活期并未明显改善。异移植是有效根治CML的，但由于配型，手术风险大，大约只有Bcr/Abl激酶上的三磷酸腺苷(ATP)结合位点结合，抑Bcr/AblCML细胞凋亡。能够抑制包性。IIII41%IFN-αPh阳性(Ph+CML76%PhPh+)CML慢性期患者获得完全遗传学Fig.1Thestructureof伊马替尼的耐药性可以分为性耐(Primary)和继发性耐药(Acquired)。在新诊断病例中，用药3个月后未达到完全血液学反应(hematologicresponse,CHR6个月未达到显著细胞遗传学反应(majorcytogenetic应被破坏，病变进展到加速期或原始胞期,称为继发耐药。目前认为,引起性耐药和出bcr/abl融合[7]。这一现象表明：尽管急变期患者会发生变异但疾病的复发仍然与bcr／abl融合有关研究发现，bcr/abl融合激酶区的点突变是伊马替尼继发合的过度表达有关，尤其是组的扩增和额外Ph的获得[9,10]。非bcr/abl性耐药。尽管多数伊马替尼继发性耐药的产生与bcr/abl融合再马替尼前已有相当数量的细胞具有潜在的抗伊马替尼的bcr/abl融合变异。但这一bcr/abl依赖性耐药的发生机制[12,13]。综上所述，开发新的更有效的其他结构系列的酪氨酸激酶抑制剂成为药学研究人员进一步研究的首要问题。因此，有必要继续寻找更为强效的抗耐药的Bcr-Abl激酶选择性抑制剂，为抗癌药物的研究提供新的方向[14,15。正白血病细胞株K562本维持传代。细胞接种于含有10％胎牛（FetalBovineSerum,FBS）、100U/mL青霉素、100μg/mL链霉素、0.2％NaHCO3RPMI-164037℃、5%CO2、饱和湿度的培养箱内培养。STI571及其衍生物准确称量，以DMSO为溶剂，配制成10mM的液20℃分装保存。使用时先将母液稀释于无水乙醇中，再用培养液进行稀释。不同体积DMSO0.1％。1mol/L取浓盐酸（12mol/L）1mL11mLRPMI-1640培养基干 青霉 链霉 100三蒸 膜过滤除菌后450mL分装，4℃保存。使用前加入50mL胎牛，轻轻摇匀即可。氯化钠 氯化钾 磷酸氢二钠 磷酸氢二钾 三蒸 1mol/LPH7.41000mL，0.22μm微孔滤膜250mL分装，4℃保存。台盼蓝染液称取适量台盼蓝粉末放入研钵中，先加少量三蒸水研磨，再加三蒸44℃PBS0.4ATRA：SigmaRPMI-1640培养基干粉：Hyclone公司胎牛（FBS）：TBD公司G（PenicillinG）：大连美罗大药碳酸氢钠（NaHCO3）：博迪化工氯化钠（NaCl）：博迪化工氯化钾（KCl）：汕头市西陇化工磷酸氢二钠（Na2HPO4·12H2O）：博迪化工磷酸氢二钾（KH2PO4）：博迪化工细胞培养级二甲基亚砜（DimethylSulfoxide,DMSO）：Biomol公司普通试剂级二甲基亚砜（DMSO）：科密欧化学试剂色谱纯乙醇（Ethanol）：科密欧化学试剂分析纯乙醇（Ethanol）：市百世化工台盼蓝（TrypanBlue）：博而美生物试剂CO2Heraeus公司，型号：BB15超净工作台：哈尔滨市东联电子技术开发，型号：BCN-1360。倒置显微镜：江南光电，型号：XD-101。PH测试仪：梅－托利多仪器（），型号：DELTA-320。磁力搅拌器：振荣科学仪器，型号：90-3。自动纯水蒸馏器：亚荣生化仪器厂，型号：SZ-93溶剂过滤器：市恒奥科技发展，型号：HL-01。真空泵：市恒奥科技发展，型号：HP-01。电子分析天平：梅－托利多仪器（），型号：AR1140自动立式压力蒸气灭菌器：申安医疗器械厂，型号：40B1。数控超声波器：昆山市超声仪器，型号：KQ3200DE电热鼓风干燥箱：市永光明医疗仪器厂，型号：101-IAS。超低温冰箱：SANYO公司，型号：MDF-382E。液氮容器：沈阳航天新光低温容器制造公司，型号：YDS-35。血球计数板：求精生化试剂仪器24孔细胞培养板：Costar公台盼蓝排斥法化合物的细胞生长抑制作用及细胞毒作用实验5×104个/ml24孔板，2ml/well药物配制好后以一定的浓度加入孔中，设立对照孔，药物浓度梯度孔。加DMSO浓度要<0.1%，乙醇浓度<1%。72h计数。1ml50ul50ul0.4%台盼蓝的ep2分钟。10ul细胞染色液打入血细胞计数板和盖玻片之间，在×10物镜下计计算IG50将细胞数带入，求出结果带入IC50计算软件，求出IG50

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N HNS N HNSONN HHNNOIG50K562IG5054321计算各个受试样品不同浓度细胞数的均值，用下列计算细胞增殖抑制率细胞增殖抑制率 （

）×将各个药物的浓度及其相对应的抑制率分别输入统计软件中求得各个化合物的误差（SE）IG50值﹥5μM。不具有生长抑制的作用。STI57A20,B1,B3,B4,B5,B6,B7,B8,B11,B12,B14,B15,B16,B17,B20,B22,B23,B24,B25,B26,B28IG50值均﹤5μMK562B25IG500.1μM,STI-(STI-571IG500.20μM2K562细胞具有较强的生ATPy-磷酸基团转移至蛋白分化和凋亡等。Bcr-AblCrkl、Shc、Syp、Fes、Vavpaxilin等，影响细胞增殖、分化和凋亡的信号转导过程。Bcr-AblBcl-2bad的磷酸化，也可通Ras依赖途径抑制细胞凋亡。Bcr-AblFakpaxilin磷酸化，从而改变细胞骨架结构干扰细胞间的相互黏附作用导致过多未成释放到外周血。Bcr-AblStar系统，使Star蛋白磷酸化并作为由活性的转录因子进入核内，影响相关的表达，进而改变靶细胞的增殖与分化；作用于白血病介素-3受体。因此开发络氨酸抑制剂可能有效的用于CML治疗方法包括常规化学治疗、干扰素(Interferon-α，IFN-α)治疗、异骨髓移植(allogeneticbonemarrowtransntation,BMT)和造血干细胞移植(hematopoieticstemcelltransntation,HSCT)等。化疗虽然可以使大多数CML趋于稳定，但是多年来CML中位数存活期并未明显改善。异骨髓移植是有效根治CML，但由于配型，手术风险大，大约只有5%的患者可以治愈。故，有必要寻找伊马替尼用于急变期患者治疗有效性较低，复发病例仍可检测出bcr/abl融合。这一现象表明：尽管急变期患者会发生变异但疾病的复发仍然与bcr／abl合有关。研究发现，bcr/abl融合激酶区的点突变是伊马替尼继发性耐药最常见的发病机制。目前已发现20多种突变类型，如T315、E255、E255、Y253H和H396P等。耐药相关性变异直接与伊马替尼结合的酪氨酸激酶构型发生改变，降低其与伊马替尼结合的能力，导致耐药性的产生。此外约有10％的耐药性患者与bcr/abl融合的过度表达有关，尤其是组的扩增和额外h的获得。尽管多数伊马替尼继发性耐药的产生与bcr/abl融合再次活化有关，但仍然有部分患者耐药机制与之无关。这可能与高肿瘤负荷下胚细胞潜在的抗伊马替尼的bcr／abl合变异有关。已有临床研究发现有些患者在应用伊马替尼前已有相当数量的细胞具有潜在的抗伊马替尼的融合变异。但这一结果还不能解释非bcr/abl依赖性耐药的发生机制。故，急待开发新型甲磺酸伊马替尼衍生物用于慢性粒细胞性白血病的治疗。甲磺酸伊马替尼(Imatinibmesylate，STI571，Gleevec)/GlivecBcr/Abl酪Bcr/Abl激酶上的三磷酸腺苷(ATP)结合位点结合，抑Bcr/AblCML细胞凋亡。能够抑制包性。IIII41%IFN-αPh阳性(Ph+CML76%PhPh+CML慢性期患者获得完全遗传学HHT合用，为抗癌药物的研究提供新的方向。细胞损伤或时，台盼蓝可变性的细胞膜，与的DNA结合，使其，而活细胞能台盼蓝进入细胞内。在光学显微镜下可观察到细胞被染FaderlS,TalpazM,EstrovZ.Thebiologyofchronicmyeloidleukemia.NewEnglandjournalofmedicine,1999(3):385-391.Laurent,E.Talpaz,M.KantarjianH.TheBCRgeneandphiladelphiachromosome-positiveleukemogenesis.Cancerresearch,2001(6):315-354.Kurzrock,R.Kantarjian,HM.DrukerBJ.Philadelphiachromosome-positiveleukemias:frombasicmechanismstomoleculartherapeutics.AnnualofInternationMedicine,2003(10):175-l84.GuilhotF.Sustaineddurabilityofresponse’plushighratesofcytogeneticresponsesresuhinlong-termbenefitfornewlydiagnosedchronie-phasechronicmyeloid1eukemia(CML-CP)treatedwithimatinib(1M)therapy.Blood,2004,104;10a:3216-3218.GorreME,mmedM,EllwoodK,eta1.C1inicaltoSTI-571cancertherapycausedbyBCR-ABLgenemutationoramplifieation.Science,2001,293(5531):876-ShahNP,NicollfM,NagarB,etal.MultipleBCR-ABLkinasemutationsconferpolyclonal tothetyrosinekinaseinhibitorimtinib(STI571)inchronicphaseandblastcrisischronicmyeloid1eukemia.CancerCell,2002,2(2);117-125.HoehhausA,KreilS,CorbinAS,etalMolecular andchromosomalmechanismsoftoimatinib(STI-571)therapy.Leukemia,2002,16(11):2190-2196.GadzickiD,vonNeuhoffN,SteinemannD,etal.BCR-ABLgeneamplification’ndoverexpressioninapatientwithchronicmyeloidleukemiatreatedwithimatinib．CancerGenetCytogenet,2005,159(2):164-167.YamamotoM,KakihanaK,Kurosu,eta1.Clonal,evolutionwUhinv(11)(p15q22) NUP98／DDXl0fusiongeneinimatinib-resistantchronicmyelogenous1eukemia.CancerGenetCytogenet,2005,157(2);104-108.ShiliangYin,RuiWang,andYongkuiJing.Bcl-XLisadominantantiapoptoticproteinthatinhibitsho rringtonine-inducedapoptosisinleukemiacells.MolecularPharmacology.2011,79(6):1072-1083.ChangS,YinSL,YingJK,etal.DesignandSynthesisofNovel2-Phenylaminopyrimidine(PAP)DerivativesandTheirAntiproliferativeEffectsinHumanChronicMyeloidLeukemiaCells.Molecules,2009,14:4166-4179.Meng