DB32T 3762.2-2020新型冠状病毒检测技术规范 第2部分：病毒分离与鉴定_第1页
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ICS11.020C2江苏省地DB32方标准DB/T3762.2—2020TechnicalspecificationsforSARSCoV-2detectionPartVirusisolationandidentification江苏省市场监督管理局发布前言BTGB/T1.1-2009给出的规则起草。江苏省卫生健康委员会提出。。与消毒。本部分适用于新型冠状病毒感染患者各类临床样本中新型冠状病毒(SARS-CoV-2)的分离培养，。范性引用文件凡是不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。冠状病毒实验室生物安全指南中华人民共和国国家卫生健康委员会定义文件4环境与设施质，并需在生物安全三级(BSL-3)实验室进行。设备与耗材5.1设备5.2耗材一次性平皿、剪刀、镊子、聚四氟乙烯研磨器(塑料)、离心管、细胞培养瓶/细胞管、移液器、与材料临床样本呼吸道样本：咽拭子、痰液、肺泡灌洗液等。尸体解剖组织样本。.2试剂6.2.1Hanks溶液(每毫升含青、链霉素各2000单位)。6.2.2DMEM培养液(含10%胎牛血清)。6.2.3DMEM维持液(含2%胎牛血清)。a.3细胞非洲绿猴肾传代细胞(VERO-E6)、人肝癌细胞(Huh7)等。实验前准备7.1.1将实验所需细胞置37℃5%CO2培养箱培养至单层。样本处理呼吸道样本及肛拭子a)在生物安全柜内涡旋震荡装有呼吸道样本(咽拭子、痰液、肺泡灌洗液等)及肛拭子的采样b)将上述处理过的样本4℃，4000rpm，离心5min，以去除杂质。肺组织样本%in血液样本a0%~20%加入青链霉素，置4℃冰箱处理样本4~6小时或过夜。接种病毒7.4细胞病变(CPE)观察与培养物收集鉴定7.4.1细胞病变(CPE)观察按上述方法样本接种细胞后，每24h在倒置显微镜下观察细胞形态变化(CPE)：以0%~25%细胞CPE变化为“+”，26%~50%细胞CPE变化为“++”，51%~75%细胞CPE变化为“+++”，76%~100%细胞培养物收集收集的培养物需反复冻融三次，4℃，4000rpm，离心15min，收集上清。养结果鉴定b)分离培养物进

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