实验诊断学与其常用检测项目临床意义2017-3-14

实验诊断学及其常用检测项目的临床意义赵虎复旦大学附属华东医院检验科2018-3-13第一页，共111页。主要授课内容实验诊断学概念与展望血液和尿液的常规检验生物化学常规检验临床免疫学的常规检验临床微生物学常规检验分子生物学检验第二页，共111页。实验诊断学概述一、实验诊断学概述第三页，共111页。（一）基本概念实验诊断（laboratorydiagnosis）临床实验室对采自病人的样本进行检测、分析，所得到的信息为临床预防、诊断、治疗疾病或预后评价提供参考，整个的医学活动即为实验诊断。第四页，共111页。实验诊断学与检验医学相同点：核心都是检验。异同点：研究和教学的目的各有侧重。实验诊断学：以检验结果的临床应用为目的检验医学：以检验方法的研究和改进为目的第五页，共111页。（二）分类（内容）

根据实验诊断学的内容，分为：血液学检验体液排泄物检验生物化学检验临床免疫学检验临床病原学检验分子生物学检验第六页，共111页。（三）现状与发展趋势

实验诊断学现状：诊断学的子学科独立的学科手工操作高度自动化定性分析定量分析常量分析微量分析第七页，共111页。现状与发展趋势

发展趋势个体化诊断：遗传基因、后天突变、疾病基因、代谢特征、药物敏感性床边检测（POCT）：血糖尿糖、凝血状态、心肌损伤、酸碱平衡状态、感染性疾病、药物水平检验中心：社区医院、专科诊所、或特色检验项目第八页，共111页。（四）临床危机值电解质：K、Na、Ca；血糖血常规：WBC、RBC、PLT血气：pO2、pCO2、pH凝血：PT、APTT、INR心肌酶：TNT、CK-MB质量血培养：血标本细菌培养第九页，共111页。二、血液检查第十页，共111页。（一）白细胞系列参数WBC：白细胞数量，正常人参考为4-10×109/LNE%：中性粒细胞百分比，正常参考为50%-75%NE#：中性粒细胞绝对值LY%：淋巴细胞百分比，正常参考为20%-40%LY#：淋巴细胞绝对值MO%：单核细胞百分比，正常参考为3%-10%MO#：单核细胞绝对值EO%：嗜酸细胞百分比，正常参考为0.5%-5%EO#：嗜酸细胞绝对值BA%：嗜碱细胞百分比，正常参考为0-2%BA#：嗜碱细胞绝对值第十一页，共111页。中性粒细胞变化临床意义生理性变化：新生儿WBC升高，一般在15×109/L；3～4天降至10×109/L左右；3月后接近成人水平。运动、疼痛和情绪影响：当剧烈运动、疼痛和激动时，WBC↑↑，以N为主，为循环池和边缘池细胞重新调配的结果。日间变化：在安静和休息时WBC较低；活动和进食后较高；下午高于上午；一日之内最高值约为最低值的1～2倍。妊娠与分娩：妊娠>5个月，WBC↑。通常在(12~17)×109/L，分娩时疼痛和产伤可更高，如无并发症产后2周左右恢复正常。第十二页，共111页。中性粒细胞变化临床意义病理性增多急性感染：化脓性球菌严重的组织损伤或大量的血细胞破坏急性大出血急性中毒肿瘤性增多骨髓增殖性疾病第十三页，共111页。中性粒细胞变化临床意义病理性减少某些感染：沙门菌感染，病毒感染某些血液病慢性理化损伤自身免疫性疾病脾功能亢进第十四页，共111页。（二）红细胞系列参数RBC：红细胞数量，正常参考男性为4.0-5.5×1012/L

女性为3.5-5.0×1012/LHgb：外周血中Hb浓度，正常参考为110-160g/LHct：血细胞压积，也可指红细胞压积，正常参考为0.35-0.50MCV：平均红细胞体积，正常参考为80-100fLMCH：平均红细胞Hb含量，指平均每个红细胞含Hb量正常参考为27-34pgMCHC：平均红细胞Hb浓度，指红细胞中Hb浓度，正常参考为320-360g/LRDW：红细胞分布宽度，正常参考为11.5%-15%第十五页，共111页。红细胞增多的临床意义生理性增多：新生儿、高原生活、剧烈运动、精神因素等。病理性增多相对性增多：血浆水分丢失，有形成分相对增加，绝对值没有发生变绝对性增多：继发性：心、肺疾病、异常血红蛋白病、某些肿瘤等原发性：真性红细胞增多症第十六页，共111页。红细胞减少的临床意义生理性减少：儿童、孕妇、老年人。病理性减少：骨髓造血功能低下，如再障。造血原料缺乏，如缺铁贫、巨幼贫。红细胞破坏增加，如溶贫。红细胞丢失过多。第十七页，共111页。（三）血小板系列参数PLT：血小板数量，正常参考为100-300×109/LMPV：平均血小板体积，正常参考为6.5-12.5fLPct：血小板压积，正常参考为0.108%-0.271%PDW：血小板分布宽度，正常参考为11.5%-18%第十八页，共111页。（三、尿液检查第十九页，共111页。（一）尿液理学检查尿量颜色及透明度比密尿渗量气味第二十页，共111页。尿量尿量取决于肾小球的滤过率和肾小管的重吸收尿量变化与气候、饮水量和食物等有关正常成人：1,000-2,000ml/24h新生儿：30-60ml/24h，婴儿：100-150ml/24h儿童：500-1000ml/24h

无尿（anurina）

少尿(oliguria)多尿(polyuria)

正常(normal)l00ml

400ml

1500ml

2500ml

第二十一页，共111页。颜色和透明度尿色随尿量的多少、饮食（酸度）、药物及病变而改变。正常新鲜尿为淡黄色、清晰透明。新鲜尿液发生浑浊的原因尿酸盐沉淀：加热或加碱后溶解。磷酸盐或碳酸盐沉淀：碱性尿中出现，加酸后溶解，碳酸盐溶解时有气泡产生。第二十二页，共111页。尿液比密(SG)测定比密被用于度量肾脏在维持机体内环境稳定中的浓缩稀释能力，即肾小管功能重要指标。高比密尿：高热脱水、蛋白尿、糖尿、急性肾小管肾炎、心功能不全；尿有造影剂低比密尿：尿崩症、高血压、慢性肾炎、肾盂肾炎；使用利尿药物注意事项：高糖、高蛋白、高尿素氮，尿比密应进行校正。X线造影剂、右旋糖酐、甘露醇等使比密升高。连续测定尿比密比一次测定更有价值。第二十三页，共111页。尿液气味尿液气味是尿中溶解物质浓度的指标正常尿液：可受食物或药物影响，尿液气味发生改变病理性尿液：新鲜排出的尿液即有氨臭味提示有慢性膀胱炎、慢性尿潴留等；烂苹果味则提示有糖尿病酮症酸中毒；腐臭味提示有泌尿系感染或晚期膀胱癌；大蒜臭味提示有机磷中毒；“老鼠尿”样臭味提示有苯丙酮尿症。第二十四页，共111页。（二）尿液化学检验液酸碱度比重蛋白葡萄糖酮体胆红素胆原亚硝酸盐红细胞白细胞第二十五页，共111页。（三）尿沉渣（尿有形成分）细胞红细胞肉眼血尿：每升尿液中含血量超过1ml，肉眼可见到不同程度混浊红色的尿液显微镜血尿：血液含量在0.1%以下，外观无血色，镜下红细胞平均≥３/HPF的尿液白细胞：正常尿液中可偶然见到1～2个WBC/HPF，如5个或5个以上白细胞为增多。泌尿系统炎症泌尿系统附近器官炎症肾移植术后排斥反应第二十六页，共111页。尿沉渣（尿有形成分）管型腊样管型透明管型颗粒管型细胞管型红细胞管型白细胞管型上皮细胞管型混合型管型第二十七页，共111页。（四）结晶生理性结晶草酸钙结晶尿酸结晶马尿酸结晶磷酸盐类结晶病理性结晶胆红素结晶胱氨酸/亮氨酸/酪氨酸结晶胆固醇结晶含铁血黄素颗粒药物结晶第二十八页，共111页。四、生化检查第二十九页，共111页。（一）肝脏功能检查肝实质损伤ALTAST胆汁郁积γ-GTALP5’-NT肝纤维化MAOPH第三十页，共111页。（二）肾脏功能检查肾小球滤过功能内生肌酐清除率试验血清尿素肌酐尿酸测定、血β2-MGCysC尿Alb/Ig第三十一页，共111页。肾脏功能检查近端肾小管功能排泌功能：酚红排泄试验重吸收功能：尿氨基酸、葡萄糖重吸收TmG/β2-MG/α1-MG第三十二页，共111页。肾脏功能检查远端肾小管重吸收功能浓缩稀释试验尿渗量、血浆渗量渗透清除率自由水清除率第三十三页，共111页。（三）脂代谢检查胆固醇（THOL）甘油三脂（TG）脂蛋白高密度脂蛋白（HDL）低密度脂蛋白（LDL）载脂蛋白载脂蛋白A（Apo-A）载脂蛋白B（Apo-B）载脂蛋白a（LP(a)）第三十四页，共111页。五、免疫学检查第三十五页，共111页。IgG—单体Ig，占总Ig的70-80%。病毒、细菌、寄生虫抗体。生高：各种慢性感染、淋巴瘤、SLE等降低：体液免疫缺陷病、联合免疫缺陷病、重链病、轻链病等。IgA：分为血清型和分泌型，血清型占总Ig的10-15%，后者存在于分泌物中。升高：SLE、类风关、肝硬化、肾病；降低：反复呼吸道感染、重链病、轻链病、免疫缺陷病、自身免疫性疾病和代谢病。（一）免疫功能检测第三十六页，共111页。免疫功能检测IgM：初次免疫应答反应中的Ig，最早出现，分子量最大。占总Ig的5-10%。升高：病毒感染早期、肝硬化、SLE、类风关、肝硬化、肾病；降低：先天性免疫缺陷病、代谢病。第三十七页，共111页。免疫功能检测细胞功能检测——流式细胞（仪）技术。T细胞花结形成试验（E玫瑰花结形成试验）T细胞转化试验T细胞分化抗原测定*：白细胞分化抗CD）CD3+总T细胞CD3+/CD4+T辅助细胞CD3+CD8+T抑制细胞第三十八页，共111页。（二）肿瘤免疫检测肿瘤标志物（tumormarker,TM）由肿瘤细胞直接产生或非肿瘤细胞经肿瘤细胞诱导后合成的一类物质，包括蛋白质、激素、酶或多胺等，存在于人体组织、细胞、血液或体液中，可以通过是其否存在或含量的高低反映肿瘤的存在和/或生长情况。特定的TM可以提示或确定某一部位肿瘤。定期检查各种TM，有可能早期发现肿瘤。肿瘤若治疗（手术切除、放疗或化疗等）有效，相应的TM会明显减少。有复法或转移后，相应的TM可能再次增加。第三十九页，共111页。肿瘤免疫检测-AFP定义——甲胎蛋白（AFP）是胎儿发育早期，由肝脏和卵黄囊合成的一种血清糖蛋白，胎儿出生后不久即逐渐消失。参考值——血清

25g/L临床意义原发性肝细胞癌，77.1%患者明显升高（300g/L）。但也有18%患者可无AFP升高生殖腺胚胎性肿瘤，如睾丸、奇胎瘤和卵巢肿瘤等，血清AFP升高。病毒性肝炎、肝硬化，可有不同程度的升高，但其水平300g/L。第四十页，共111页。肿瘤免疫检测-CEA定义——癌胚抗原（CEA）是一种结构复杂的可溶性糖蛋白，胚胎期主要存在于胎儿的胃肠道、胰腺和肝脏，出生后组织内含量很低。参考值——血清

5g/L临床意义胃肠道肿瘤，尤其是结肠癌、直肠癌（术后复发）、胃癌、胰腺癌等其他部位肿瘤：乳腺癌、肺癌胃肠道肿瘤术后或化疗的疗效观察第四十一页，共111页。肿瘤免疫检测-CA19-9定义——糖链抗原19-9（CA19-9），又称胃肠癌相关抗原，是一种与胰腺癌、胆囊癌、结肠癌和胃癌相关的肿瘤标志物。正常人体组织中含量很低。参考值——血清

37000U/L临床意义胰腺癌、胆囊癌和胆管壶腹癌，明显升高，尤其胰腺癌，敏感性70%-95%，特异性72-90%。其他消化道肿瘤：胃癌阳性率50%，结肠癌阳性率60%，肝癌51%。消化道炎症，如急性胰腺炎、胆囊炎、肝硬化和肝炎等，也有不同程度升高。第四十二页，共111页。肿瘤免疫检测-CA125定义——癌抗原125（CA125）是很重要的卵巢癌相关抗原，是一种大分子多聚糖蛋白，存在于上皮性卵巢癌组织和患者血清中。参考值——血清

35000U/L临床意义卵巢癌明显升高，手术或化疗有效者很快下降；复发时再度明显升高。其他肿瘤：卵巢癌40%，其他妇科肿瘤43%，胰腺癌50%，胃癌47%，肺癌41.4%。非恶性肿瘤，如子宫内膜异位症、盆腔炎、卵巢囊肿等，也可不同程度升高。第四十三页，共111页。肿瘤免疫检测-CA15-3定义——癌抗原15-3（CA15-3）是一种乳腺癌相关抗原，为大分子糖蛋白。参考值——血清

25000U/L。临床意义乳腺癌患者升高。是原发性乳腺癌的辅助诊断指标，也是手术后随访和监控肿瘤复法、转移的指标。其他恶性肿瘤：肺癌、肾癌、结肠癌、胰腺癌、卵巢癌和原发性肝癌，也有不同程度的阳性率。肝脏、胃肠道、肺、乳腺、卵巢等非恶性肿瘤疾病，阳性率低于10%。第四十四页，共111页。肿瘤免疫检测-PSA定义——前列腺特异性抗原（PSA）是一种由前列腺上皮细胞分泌的蛋白酶。目前临床可以检测血清总PSA（T-PSA）和游离PSA（F-PSA）。参考值——T-PSA4.0g/L，F-PSA0.8g/L，F-PSA/T-PSA0.25临床意义前列腺癌患者血清PSA升高，其浓度和阳性率随病程的进展而增高。前列腺肥大、前列腺炎、肾脏和泌尿生殖系统疾病，也可轻度升高。F-PSA/T-PSA比值临床意义更大。比值0.1提示前列腺癌，0.25提示可能是前列腺增生。第四十五页，共111页。（三）感染免疫检测-细菌血清抗链球菌溶血素“O”试验溶血素“O”是A群溶血性链球菌产生的具有溶血活性的代谢产物，相应的抗体称作抗链球菌溶血素“O”。参考值：乳胶凝集法（LAT）阴性临床意义：阳性-近期A群溶血性链球菌感染（活动性风湿热、风湿性心肌炎、急性肾小球肾炎、急性上呼吸道感染、皮肤软组织感染等。第四十六页，共111页。感染免疫检测-细菌伤寒和副伤寒沙门菌免疫测定伤寒沙门菌感染后菌体“O”和鞭毛“H”抗原可刺激机体产生相应抗体。甲、乙、丙型副伤寒沙门菌也可产生相应的“O”“H”抗体。肥达反应（Widalreaction,WR）。参考值：伤寒H1∶160,O1∶80；副伤寒1∶80临床意义：单份血清O1∶80，H∶160；或动态观察升高4倍以上。①O、H均升高，伤寒；②O不高、H升高，预防接种；③O升高、H不高，感染早期。第四十七页，共111页。感染免疫检测-病毒乙型肝炎病毒抗原抗体表面抗原（HBsAg）及其抗体（抗-HBs）,e抗原（HBeAg）及其抗体（抗-HBe），核心抗原（HBcAg）及其抗体（抗HBc）。HBsAg：急慢性乙肝或携带者抗-HBs：保护性抗体，病毒已清除，或疫苗接种后HBeAg：HBV复制状态及血清有传染性指标抗-HBe：非保护性抗体，提示预后良好。抗HBc：IgM型抗体。急性感染指标。第四十八页，共111页。感染免疫检测-病毒甲型肝炎病毒抗原抗体抗原检测（ELISA）：微量板包被抗-HAV，加入待检样本，再加入酶标记的抗-HAV，显色，测定OD值。待检样本OD值-空白OD值/阴性对照OD值0.21为阳性。抗体检测：检测抗-HAVIgM和总抗-HAV。

ELISA法或化学发光法。第四十九页，共111页。（四）自身免疫检测机体的免疫系统对自身组织成分产生免疫应答，产生相应的自身抗体，并引起组织损伤，形成自身免疫性疾病。类风湿因子抗核抗体抗组织细胞抗体其他自身抗体第五十页，共111页。六、微生物检查第五十一页，共111页。及时采集无菌操作立即送检定量或半定量培养药敏试验分级报告和限时报告（一）标本采集与处理原则第五十二页，共111页。2.标本采集方法血液标本上呼吸道标本尿标本粪便标本第五十三页，共111页。1血液标本1）送检指征①症状指征发热：高热（39C以上），伴有明显的毒血症状，以间歇迟张热多见。皮疹：革兰阴性菌—瘀点伤寒—玫瑰疹斑疹伤寒—暗红色斑丘疹肝脾肿大：革兰阴性菌败血症关节疼痛：革兰阳性菌神志昏迷或休克：革兰阴性菌毒血症状第五十四页，共111页。②疾病指征化脓性病灶或损伤粘膜损伤性疾病肝脏疾病糖尿病血液疾病及恶性肿瘤呼吸道感染或呼吸衰竭：吸入或血源长期输液或导管介入疾病血液透析患者血液标本第五十五页，共111页。血液标本①采血时间与次数

抗菌药物治疗前

发热初期或高峰期；

连续2～3次。②采血部位：肘静脉采集方法：注射器抽取采血量：成人5～10ml，儿童1～5ml

2）标本采集第五十六页，共111页。血液标本

3）标本运送与处理

床边接种血培养瓶。立即送检。不能及时送检者，置室温（22C左右）保存。第五十七页，共111页。2上呼吸道标本

1）送检指征①症状指征咳嗽：痉挛性、持续性—日咳咳痰：铁锈色痰—大叶性肺炎黄粘痰—细菌感染咯血：痰中带血或泡沫血痰呼吸困难：肺源性，常拌胸痛发热：稽留热—大叶性肺炎长期低热—肺结核

第五十八页，共111页。肺炎支气管炎气管炎肺脓肿肺结核白喉百日咳上呼吸道标本②疾病指征第五十九页，共111页。①采集时间痰：晨痰支扩或有空洞者作体位引流

抗生素治疗前咽拭子：晨起后、进食前抗生素治疗前上呼吸道标本2）标本采集第六十页，共111页。痰液标本自然咳痰法—晨起后清水反复漱口后无痰或痰少者可雾化吸入支气管镜采集法—气管穿刺或直接肺穿刺—厌氧菌培养咽拭子晨起后清水漱口，无菌棉拭子涂抹咽后壁上呼吸道标本②采集方法第六十一页，共111页。上呼吸道标本3）标本运送与处理标本采集后置无菌容器内及时送检。不能及时送检者，置冰箱（4C左右）保存。第六十二页，共111页。

1）送检指征①症状指征尿路刺激症状：尿频、尿急、尿痛肾区疼痛、扣击痛②疾病指征肾盂肾炎膀胱炎3尿标本第六十三页，共111页。尿标本2）标本采集中段尿：尿道口清洗、消毒后，取中段尿标本。两侧肾盂尿：单侧肾脏感染膀胱穿刺：厌氧菌培养第六十四页，共111页。尿标本

3）标本运送与处理标本采集后置无菌容器内及时送检。不能及时送检者，置冰箱（4C左右）保存。第六十五页，共111页。4脑脊液标本1）送检指征①症状指征全身症状：发热，往往为高热颅压增高：头痛、呕吐（喷射性）、颈项强直、反射增强。②疾病指征化脓性脑膜炎结核性脑膜炎第六十六页，共111页。脑脊液标本2）标本采集及时采集（抗生素用药前），腰穿，取脑脊液ml3）标本运送与处理标本采集后置无菌容器内及时送检。不能及时送检者，置室温（22C左

右）保存。第六十七页，共111页。自然排便：采集脓、血或粘冻成分松检。直肠试子：排便困难或婴儿5粪便标本第六十八页，共111页。1）不染色标本直接镜检不染色标本的直接镜检主要用于观察细菌的动力及运动状况。有鞭毛的细菌在显微镜下运动活泼，如霍乱弧菌的米泔样粪便标本的直接镜检。湿片法或悬滴法。（二）病原学检查—镜检第六十九页，共111页。

镜检2）革兰染色镜检方法：结晶紫初染碘液媒染乙醇脱色石碳酸复红复染。结果：革兰阳性－紫色；革兰阴性－红色意义：①有无细菌及大致的量；②染色性（G+、G-），经验用药；③形态（球菌、杆菌），鉴定；④特殊诊断（尿道分泌物——淋病奈瑟菌，脑脊液——脑膜炎奈瑟菌）。第七十页，共111页。镜检3）抗酸染色镜检

方法：石碳酸复红初染盐酸乙醇脱色呂氏美兰复染。

结果：抗酸菌－红色；其他细菌、细胞－红色

意义：检查抗酸菌（主要分枝杆菌）。

第七十一页，共111页。镜检4）其它特殊染色镜检荚膜染色；鞭毛染色；异染颗粒染色第七十二页，共111页。检验方法—分离培养1）细菌体外培养的条件营养—蛋白质、糖类、无机盐、水温度—病原菌35C，腐生菌22C气体—O2，CO2，N2，H2渗透压—其它—生长因子（V、X因子等）第七十三页，共111页。分离培养2）培养基选择增菌培养基：肉汤、碱性蛋白胨水基础培养基：营养琼脂、M-H琼脂选择培养基：麦康凯琼脂、SS琼脂鉴别培养基：胆汁七叶苷琼脂厌氧培养基：厌氧血平板第七十四页，共111页。3）接种方法肉汤增菌：血液、脑脊液等蛋白胨水增菌：粪便（弧菌）平板划线接种：其他标本（四区划线法）分离培养第七十五页，共111页。分离培养3）初代培养初代培养最好含5～10％CO2

（尤其是嗜血该菌、奈瑟菌等）35～37C，培养18～24h（分枝杆菌2～4w）第七十六页，共111页。分离培养

4）分离纯化初代培养分不出单个菌落时应重新分区划线接种。第七十七页，共111页。1）生化鉴定不同种属的细菌因代谢酶的不同，在生长过程中需要的生化底物不同，产生的代谢产物也不同。糖的利用：单糖（葡、乳、麦、甘）、多糖蛋白质利用和分解：赖、鸟、精氨酸盐类利用与分解：NaCl、枸橼酸盐等气体产生：N2，NO，CO2、CO等。检验方法—鉴定第七十八页，共111页。鉴定

2）血清学反应观察待检菌株与已知抗体的凝集反应，鉴定各种细菌，并分型。（如沙门菌、志贺菌、致病大肠埃希菌、霍乱弧菌等抗血清。）第七十九页，共111页。鉴定

3）分子生物学鉴定根据病原菌、病毒或其它病原微生物核酸的特异性基因片断，合成并标记引物，直接用基因探针或经PCR或RT-PCR扩增后检测、分析。第八十页，共111页。鉴定

4）自动或半自动微生物分析仪（采用细菌的生化特征或免疫学特征）

VITEK-AMSMicroScanPhonex第八十一页，共111页。（三）体外药敏试验定义：体外药敏试验（antimicrobialsusceptibilitytestinginvitro），即用体外试验的方法，检测待检菌对某种抗菌药物的敏感程度，指导临床合理选用敏感的抗菌药物，迅速控制和治疗该细菌引起感染。方法：抑菌试验杀菌试验联合药敏试验耐药酶检测第八十二页，共111页。目的与指征临床分离菌株必须进行常规药敏试验以提供临床选择药物时参考。临床因治疗的反应差而考虑更换抗菌药物时，应对拟选药物进行药敏试验。了解所在医院或地区常见病原菌耐药性的变迁情况。评价新抗菌药物的抗菌谱和抗菌活性等药效学特性。对细菌耐药谱进行分析和分型有助于某些菌种的鉴定，并作为医院感染流行病学调查的手段之一。第八十三页，共111页。药敏试验的意义指导临床合理选择敏感的抗菌药物，及时控制细菌感染。减少不必要的抗菌药物的使用，降低治疗费用，也降低对病人机体的损害。减少耐药菌株的产生。辅助鉴定细菌。第八十四页，共111页。定义：用于测定抗菌药物体外抑制细菌生长大效力的试验。实验方法：主要有进行定性测定的纸片扩散法（diskdiffusiontest），定量测定的稀释法（dilutiontest）和E试验法（Etest）。抑菌试验第八十五页，共111页。

1.纸片扩散法

临床常用的是纸片琼脂扩散法（discagardiffusionmethod），即Kirby-Bauer（K-B）纸片琼脂扩散法。第八十六页，共111页。

将含有定量抗菌药物的纸片贴在已接种待检菌的琼脂平板上，纸片中所含的药物吸收琼脂中的水分溶解后不断向纸片周围区域扩散形成递减的梯度浓度，在纸片周围抑菌浓度范围内待检菌的生长被抑制，形成透明的抑菌圈，抑菌圈大小与该药对待检菌的最低抑菌浓度（MIC）呈负相关关系。

（1）原理

第八十七页，共111页。1）抗菌药物纸片

直径6.35mm，吸水量为20l。2）培养基水解酪蛋白（M-H）琼脂。3）操作方法转种肉汤，制备菌液（0.5麦氏单位）；接种平板，贴药敏纸片；孵育（35℃，18～24h）。（2）方法

第八十八页，共111页。敏感（susceptible）表示待检菌能被测定药物常规剂量给药后在体内达到的血药浓度所抑制或杀灭。中度敏感（intermediate）

指待检菌可被测定药物大剂量给药后在体内能达到的浓度所抑制，或在测定药物浓集部位的体液中，如尿中被抑制。耐药（resistant）

表示待检菌不能被体内感染部位可能达到的抗菌药物浓度所抑制。（3）结果判读第八十九页，共111页。第九十页，共111页。

稀释法是定量测定抗菌药物抑制细菌生长作用大体外方法，分为肉汤稀释法和琼脂稀释法。稀释法所测得的某种抗菌药物能抑制待检菌肉眼可见生长的最低浓度称为最低（最小）抑菌浓度（minimalinhibitoryconcentration，MIC）。稀释法—肉汤稀释法第九十一页，共111页。肉汤稀释法抗菌药物的配制与稀释用蒸馏水或0.1mol/L磷酸盐缓冲液（pH6）稀释抗菌药物。待检菌和质控菌的准备同K-B法。接种、孵育最终接种浓度为5105CFU/ml。

结果判读肉眼可见生长的最低药物浓度为MIC。质控控制第九十二页，共111页。用无菌96孔聚苯乙烯U型微量板代替试管，其他方法同肉汤稀释法。微量肉汤稀释法第九十三页，共111页。琼脂稀释法本法的优点是可以同时做多株菌株的MIC测定，结果重复性优于肉汤稀释法，且易于发现污染或耐药突变菌株。第九十四页，共111页。琼脂稀释法含药琼脂的制备取稀释后的抗菌药物2ml，分别加入18ml消毒后、冷却至50℃左右的琼脂中。接种定点接种1～2l菌液。孵育35℃18～24h。结果判读菌落生长完全被抑制的最低药物浓度为该药对待检菌的MIC。第九十五页，共111页。

3.E试验-原理

E试验结合了稀释法和扩散法的原理和特点，操作简便同扩散法，但可以同稀释法一样直接定量检测药物对待检菌的MIC。同纸片扩散法的主要区别在于E试验所用的是一条宽5mm、长50mm，内含干化、稳定、浓度由高至低呈指数梯度分布的一种抗菌药物的商品化塑料试条。第九十六页，共111页。操作过程培养基、菌液准备和接种均同K-B法，贴E试验试条（90mm平皿可贴1～2根，140mm平皿可贴6根）。结果判读孵育后围绕试条可形成一个椭圆形的抑菌圈，抑菌圈与试条的横向相交处的读数即为抗菌药物对待检菌的MIC。E试验-方法第九十七页，共111页。（六）特殊药敏试验第九十八页，共111页。1.-内酰胺酶检测目的：

-内酰胺酶（-lactamase）能灭活-内酰胺类抗生素，导致细菌对该类抗生素耐药。临床意义：流感嗜血杆菌、淋病奈瑟菌和卡他莫拉汗菌对青霉素、氨苄西林耐药；葡萄球菌和肠球菌对青霉