涎腺腺样囊性癌细胞ACC-3细胞株ALDH1~+细胞的生物学功能的研究与探讨

涎腺腺样囊性癌细胞ACC-3细胞株ALDH1~+细胞的生物学功能的研究与探讨涎腺腺样囊性癌细胞ACC-3细胞株ALDH1~+细胞的生物学功能的研究与探讨

摘要：涎腺腺样囊性癌是头颈部最常见的一种恶性肿瘤，其预后较差。本研究旨在探讨涎腺腺样囊性癌细胞ACC-3细胞株ALDH1~+细胞的生物学功能。通过对细胞增殖、侵袭、迁移、耐药性、干性等生物学功能的研究，鉴定出ALDH1~+细胞具有更强的增殖、侵袭、迁移能力和良好的耐药性，同时具有一定的干性。研究结果表明，ALDH1~+细胞可能是涎腺腺样囊性癌的干细胞，与该癌症的发生、发展、耐药性等密切相关。本研究可为涎腺腺样囊性癌的临床治疗提供新的思路和方法。

关键词：涎腺腺样囊性癌，ACC-3细胞株，ALDH1~+细胞，生物学功能，干细胞

Abstract:Adenoidcysticcarcinomaofsalivaryglandisthemostcommonmalignanttumorinheadandneck,withpoorprognosis.TheaimofthisstudyistoexplorethebiologicalfunctionofALDH1~+cellsinACC-3cellsofadenoidcysticcarcinomaofsalivarygland.Bystudyingthebiologicalfunctionsofcellproliferation,invasion,migration,drugresistance,andstemness,ALDH1~+cellswerefoundtohavestrongerabilitiesofproliferation,invasion,migration,andbetterdrugresistance,aswellasacertaindegreeofstemness.TheresultsofthisstudyindicatethatALDH1~+cellsmaybethestemcellsofadenoidcysticcarcinomaofsalivarygland,whicharecloselyrelatedtotheoccurrence,developmentanddrugresistanceofthiscancer.Thisstudyprovidesnewideasandmethodsfortheclinicaltreatmentofadenoidcysticcarcinomaofsalivarygland.

Keywords:Adenoidcysticcarcinomaofsalivarygland,ACC-3cellline,ALDH1~+cells,biologicalfunctions,stemcells

一、引言

涎腺腺样囊性癌是一种慢性进展性肿瘤，常常对化疗和放疗不敏感。大多数患者的肿瘤会复发甚至转移，对其预后带来严峻挑战。干细胞在癌症中的作用一直备受关注。干细胞能够自我更新，并且具有形成多种细胞类型的潜力。越来越多的研究表明，癌症干细胞可能是导致肿瘤复发和治疗失败的关键因素。ALDH1是一种仅在干细胞中表达的酶，是识别和分离出癌症干细胞的标志之一。本研究旨在探讨涎腺腺样囊性癌细胞ACC-3细胞株ALDH1~+细胞的生物学功能，探索其在该癌症发生、发展和预后中的作用。

二、材料与方法

1.细胞培养

选取涎腺腺样囊性癌细胞株ACC-3，以DMEM培养基为基础，加入10%胎牛血清（FBS）。细胞以37°C和5%CO2的条件下培养。

2.流式细胞术分离ALDH1~+细胞

采用ALDEFLUOR试剂盒检测ALDH酶的活性，并使用流式细胞术分离ALDH1~+细胞。

3.MTT实验

采用MTT法检测细胞增殖活性，测定细胞增殖曲线。MTT法的步骤如下：取1×104个细胞/wells放入96孔板中，于24h后注入不同浓度的化合物溶液，24h后将MTT染色溶液加入孔中，于1h后除去溶液并加入相应的溶解液，用ELISA读板器测定吸光度。

4.Scratch实验

采用刮痕实验检测细胞的迁移能力，将细胞培养在6孔板上，通过手动添加200ul精确吸管对细胞层进行刮痕处理。

5.Transwell实验

Transwell小室仪是通用的检测细胞侵袭力的仪器，使用前将系统消毒，加入需要检测的细胞，将上皿放置数字转动装置中，经过一段时间后，将上皿的上面两层材料取出，分别离心5min，弃上清液，加入100μLMTT液，孵育4h，取出上层材料在石墨仪上测定OD值。

6.Westernblotting分析

采用Westernblotting方法检测干细胞标志物Oct4、SOX2和Nanog在不同细胞中的表达水平。

7.Q-PCR分析

采用Q-PCR方法检测干细胞标志物Oct4、SOX2和Nanog在不同细胞中的表达水平。

8.球体形成实验

采用球体形成实验检测细胞的干性。将细胞以一定浓度种植于含有培养因子的培养基中，7-10天后，球体数量计算。

三、结果

1.ALDH1~+细胞在ACC-3细胞中比例较低，但具有较强的增殖能力

通过流式细胞术分离ALDH1~+萎缩，结果发现，在ACC-3细胞中，ALDH1~+细胞的比例较低。ALDH1~+细胞的增殖能力强于ALDH1~-细胞。

2.ALDH1~+细胞的迁移和侵袭力显著强于ALDH1~-细胞

刮伤实验和Transwell小室实验的结果表明，ALDH1~+细胞的迁移速度明显快于ALDH1~-细胞；ALDH1~+细胞的侵袭能力也明显强于ALDH1~-细胞。

3.ALDH1~+细胞具有更强的抗药性

MTT法的实验结果显示，ALDH1~+细胞对药物的耐药性受到多种化疗药物干扰，但比ALDH1~-细胞更具耐药性。

4.ALDH1~+细胞表达干细胞标志物Oct4、SOX2和Nanog，表现出干细胞特性

Westernblot和Q-PCR的结果表明，ALDH1~+细胞表达干细胞标志物Oct4、SOX2和Nanog较高，表现出干细胞特性。同时，球体形成实验显示，ALDH1~+细胞有更强的干性。

四、讨论

本研究通过流式细胞术分离ALDH1~+细胞，对比分析了ALDH1~+细胞和ALDH1~-细胞的生物学特性，发现ALDH1~+细胞具有更强的增殖、侵袭、迁移能力和良好的耐药性，同时表现出一定的干性。这些结果表明，ALDH1~+细胞可能是涎腺腺样囊性癌的干细胞，与该癌症的发生、发展、耐药性等密切相关。

ALDH1在癌症干细胞中具有重要作用，因此其可能成为癌症的治疗靶点。通过分离和检测ALDH1~+细胞，可以更加准确地识别涎腺腺样囊性癌干细胞，并对其进行治疗。同时，针对ALDH1酶的药物也可能成为治疗该癌症的新策略。

本研究也有一定的局限性。首先，我们只是选择了ACC-3细胞株进行了实验，因此需要更多涎腺腺样囊性癌的细胞株来做进一步的研究。其次，我们未能探讨ALDH1~+细胞的分子机制和作用机理，需要更深入的研究。

五、结论

本研究表明，ALDH1~+细胞可能是涎腺腺样囊性癌的干细胞，并具有更强的增殖、迁移、侵袭能力和良好的药物耐受性。这一结论将为涎腺腺样囊性癌的临床治疗提供新的思路和方法，也为癌症干细胞的研究提供了新的可能需要引起注意的是，由于涎腺腺样囊性癌的病因、发展和治疗机制仍然不清楚，因此对于该癌症的干细胞和治疗靶点的研究还需要进一步的深入。此外，研究中所使用的ALDH1作为标记物也存在一定的局限性，因为该酶并非所有癌症干细胞都会表达。因此，在后续的研究中应该探寻其他途径来鉴定涎腺腺样囊性癌的干细胞，并进一步分析其生物学特性及作用机制。

总的来说，本研究的发现为涎腺腺样囊性癌的治疗提供了新的思路和方法，也为癌症干细胞的研究提供了新的可能。希望通过后续的研究，能够深入探究涎腺腺样囊性癌的病因和治疗机制，并为癌症的早期诊断和治疗带来实际的帮助此外，值得注意的是，当涎腺腺样囊性癌已经发生转移时，采用单一化疗和放疗已经难以取得理想的治疗效果。因此，尽早发现癌症并进行彻底的切除是治疗涎腺腺样囊性癌最有效的方法之一。但是，由于该癌症具有侵袭性和淋巴转移性较强的特点，手术治疗的难度也较大。因此，在治疗方案的制定中应该综合考虑患者的个体差异和病情的严重程度，以达到最优的治疗效果。

此外，随着分子医学技术的发展，越来越多的生物标志物被发现与癌症的发生和发展相关。因此，探究涎腺腺样囊性癌的特异性生物标志物，对于早期诊断、治疗效果评价和预后判断都有重要意义。例如，目前已有研究表明，运动相关蛋白（Myosinlightchainkinase，MLCK）可能是涎腺腺样囊性癌的特异性生物标志物，进一步研究其作用机制和应用前景，将有助于更精确地诊断、治疗和监测该癌症。

综上所述，涎腺腺样囊性癌作为一种罕见的癌症类型，在病因、发展和治疗机制方面仍存在诸多未知领域。针对该癌症的干细胞和特异性生物标志物的研究，将有助于揭示其发生和发展的机制，为治疗和预后判断提供科学依据。同时，在制定治疗方案时，也应该根据病情的不同，综合考虑多种治疗手段，以实现更好的治疗效果此外，在患者的康复期间，营养支持也是非常重要的环节。由于癌症治疗常常会影响患者的食欲和身体机能，因此需要专业的营养师进行营养方案的制定，保证患者摄入足够的营养物质，维持身体的免疫力和健康状态。

此外，必须不断加强公众对涎腺腺样囊性癌的认识和了解。目前，该癌症的发病率并不高，但是它的侵袭性和淋巴转移性较强，易于被忽视和误诊。因此，关于涎腺腺样囊性癌的症状、治疗方法和预防措施等信息需要广泛宣传到公众，提高人们对该癌症的认识和警惕性，有助于早期发现和治疗该疾病。

最后，强调科学家们在涎腺腺样囊性癌研究领域的重要性。虽然该疾病的发病率较低，但是它的侵袭性和淋巴转移性较强，有着较高的临床危害性。因此，需要科学家们的不懈努力和积极