实验动物组织

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实验五、动物组织一、目的与内容（一）目的

1．了解动物的四类基本组织的结构特点，理解组织结构与机能的密切关系；2．掌握血液涂片的方法。（二）内容1、上皮组织的观察：单层扁平上皮装片，小肠横切，纤毛上皮装片等；2、肌肉组织的观察：平滑肌装片，骨骼肌横切，心肌切片等；第2页/共30页3、结缔组织的观察：疏松结缔组织装片，腱纵切，透明软骨等，自制人或蛙血液涂片等；4、神经组织的观察：脊髓横切，运动神经元装片等。二、材料与用品

(一)材料蟾蜍，动物各组织的玻片标本[一般用苏木精一曙红(也称伊红)染色，简称H·E染色]。第3页/共30页(二)用品1．器具显微镜，解剖器具，蜡盘，载玻片，盖玻片，烧杯，染色缸，玻片架，蛙钉，采血针、棉花等。2．试剂0．65％生理盐水，甘油，香柏油，甲醇，吉姆萨染液或瑞氏染液，蒸馏水，乙醚、等。第4页/共30页三、操作与观察

（一）血液涂片的制备与观察

(1)人或蛙血涂片标本的制备

第5页/共30页①取血：左手从蛙背面握蛙，右手持注射器从蛙胸部进针刺入蛙心脏采血。滴1滴在洁净载玻片右端，注意血滴不宜过大。（或者从人的左手无名指指端内侧取血。）②涂片：另取边缘光滑的1块载玻片作推片斜置于第1块载玻片上血滴的左缘，成40。左右角度。将推片稍向右移，接触血滴，使血液充满两玻片之间的夹角。再将推片向左方匀速推进，使玻片上留下薄而均匀的血膜。左右摇动涂有血膜的玻片，使之尽快干燥，避免细胞皱缩。第6页/共30页

③染色：晾干后，用瑞特氏染液数滴加于涂片上固定染色1min，在染液的上面再加蒸馏水再染3min,然后在染色玻片的一端用自来水细流缓缓冲去染液（在稀醋酸液中蘸数下），斜立血涂片于玻片架上，晾干后置显微镜下观察。第7页/共30页

注意事项：第一.滴加瑞氏染液的量不宜太少,太少易挥发变干,形成颗粒。1张血片,一般可滴加2～3滴染液。第二.冲洗时应将蒸馏水直接向血膜上倾倒,使液体自血片边缘溢出,沉淀物从液面浮去。切勿先将染液倾去再冲洗,否则沉淀物附着于血膜上不易冲掉。第8页/共30页

蛙血涂片观察：在低倍镜下选择分布均匀的血细胞，换高倍镜观察。蛙红细胞呈椭圆形，中央有一椭圆形细胞核，呈蓝色，细胞质呈红色。此外还可见到白细胞和凝血细胞。人的血涂片观察：红细胞数量最多，小而圆，无细胞核，其中央部分着色较周围淡；慢慢移动标本，可观察到各种白细胞，白细胞数量比红细胞少，但胞体大，细胞核明显，极易与红细胞区别开。血小板为形状不规则的细胞小体，其周围部分为浅蓝色，中央有细小的紫色颗粒，常聚集成群，分布于红细胞之间。高倍镜下一般只能看到成堆的紫色颗粒，在油镜下才能看到颗粒周围的浅蓝色胞质部分。(2)蛙血涂片的观察第9页/共30页分类：单层上皮和复层上皮功能:保护、感觉、分泌和吸收。特征：（1）上皮细胞主要为柱状、扁平状。（2）排列紧密，有单层和多层之分。（3）细胞间紧密连接，间质少。（4）基部分泌一层很薄的基膜。1.上皮组织(二)观察各组织制片第10页/共30页低倍镜观察，可看到许多大小不等的、圆形或椭圆形的红色甲状腺滤泡。高倍镜观察，滤泡壁由1层立方体形上皮细胞构成，核圆形、蓝紫色，位于细胞中央，细胞质粉红色。(1)单层立方上皮(图3—3)(兔甲状腺切片)第11页/共30页(2)单层柱状上皮(图3—4)(猫小肠横切片)

低倍镜观察，可见黏膜面形成许多指状突起，突向管腔，突起表面覆有1层柱状上皮。

单层柱状上皮

(胃、肠黏膜)第12页/共30页高倍镜观察，可见上皮细胞为柱状，核长椭圆形、蓝紫色，靠近细胞的基底部。把虹彩光圈缩小，减少光量，可见细胞的游离面有1层较亮的粉红色膜状结构，称为纹状缘。在柱状细胞之间散在有杯状细胞，此细胞上端膨大、下端细小，核呈三角形或半圆形，位于细胞基底部。在杯状细胞上端的细胞质内积有大量不着色的黏液，在切片上呈卵形空泡状结构，细胞游离面无纹状缘。第13页/共30页(3)假复层纤毛柱状上皮（兔气管横切片)气管壁内表面即黏膜层由假复层纤毛柱状上皮组成。肉眼辨别切片中朝向气管腔的黏膜层，并置于视野中央。第14页/共30页低倍镜观察，管壁黏膜表面着色较深的一厚层即假复层纤毛柱状上皮。细胞排列紧密，细胞界限不清晰，细胞核位置高低不等。高倍镜观察，该上皮由4种细胞成。锥形细胞：基部宽，顶部窄，不能达到上皮游离面，细胞排列在个上皮的下部。梭形细胞：两端尖细，中间略宽，细胞核排列于整个上皮的中部。柱状细胞：胞体达上皮游离面，细胞游离面较宽，基部较细，细胞游离面有纤毛，细胞核排列于整个上皮的上部。杯状细胞：夹于柱状细胞之间，游离面无纤毛，细胞核也排列在上皮的上部。

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(4)复层扁平上皮(图3—6)(猫食管横切片)

复层扁平上皮位于食管壁内表面。低倍镜观察，此上皮由许多层细胞组成，上皮的基底面呈波浪形。第16页/共30页高倍镜观察，可见与基膜相连的是1层排列整齐的矮柱状细胞，细胞核椭圆形。中层为几层多角形细胞，排列不整齐，核扁平。接近上皮表面的细胞变为扁平状，核着色淡，甚至模糊不清。第17页/共30页2．肌组织

骨骼肌心肌平滑肌第18页/共30页(1)心肌(图3—9)(狗心肌切片)第19页/共30页先低倍镜后高倍镜观察，在纵切面上，心肌纤维彼此以分支相连，核卵圆形，位于肌纤维中央。缩小虹彩光圈，使光线暗些，可看到心肌纤维的横纹，但不及骨骼肌的明显。在心肌纤维及其分支上，可见到染色较深的梯形横线，即闰盘。在横切面上，心肌纤维为不规则横线，由于切片的关系，有的有核，有的无核。心肌与骨骼肌不同：（1）心肌纤维具有分支，各纤维以分支相连成网；（2）一个椭圆形细胞核位于纤维的中央；（3）心肌也有横纹，但不如骨骼肌的明显和规则。第20页/共30页先低倍镜后高倍镜观察蛙的平滑肌分离装片，可见分离的平滑肌纤维呈长梭形，核长椭圆形，位于细胞中部，在常规染色标本上肌原纤维分辨不清楚。先低倍镜后高倍镜观察猫的小肠横切片，可见小肠壁平滑肌横切面呈大小不等、不规则的红色圆点，有的中央有染成蓝紫色圆形的核，有的见不到核。(2)平滑肌(图3—10)(蛙的平滑肌分离装片，猫的小肠横切片)第21页/共30页第22页/共30页3.神经组织

(1)多极神经元(兔脊髓横切片)

肉眼观察观脊髓横切片中央为蝴蝶状的灰质的其中心有一孔为中央管，灰质较狭的一端为背角，较宽的为腹角。包围在灰质周围染色较淡的部分是白质。低倍镜观察，将脊髓灰质腹角移至视野中央，观察神经元。在腹角内有许多较大的多突起细胞即脊髓腹角运动神经元，为多极神经元。神经元胞体上的突起包括树突和轴突，但二者不易区分，一般可根据轴突基部的轴丘处染色较浅(无尼氏体)来识别轴突。选择1个胞体较大、突起较多、核较清晰的神经元移至视野中央进一步观察。第23页/共30页(2)运动终板(兔肋间肌撕片装片)低倍镜观察，可见骨骼肌平行排列成束，呈蓝紫色或紫红色，肌原纤维的横纹明显。传出神经纤维染成黑色，形似树枝，分布到骨骼肌纤维上，当它们接近肌纤维时，其末端再行分支成爪形小球，附着于肌纤维表面。高倍镜观察，神经纤维终末的爪状分支端膨大，在与肌纤维附着处形成椭圆形板状隆起，即为运动终板。骨骼肌轴突第24页/共30页4．结缔组织(1)血液①人血涂片标本(瑞氏染色)的观察(图3—11)。第25页/共30页(2)疏松结缔组织(图3—12)(小白鼠皮下疏松结缔组织平铺片，H·E染色)

由排列疏松的纤维与分散在纤维间的多种细胞构成的，纤维和细胞埋在基质中，充满在器官内部的间隙中。细胞种类多，间质也多。第26页/共30页(4)致密结缔组织(图3—14)(猫的尾腱纵切片)

先低倍镜后高倍镜观察。胶原纤维束粗而直，彼此平行排列。腱细胞在纤维束间排列成单行，切面上呈梭形。核椭圆形或杆状，蓝紫色，2个邻近细胞的核常常靠近。细胞质不易显示。。第27页/共30页(5)透明软骨(图3—15)(猫的气管横切片)

高倍镜观察，软骨细胞存在的地方称陷窝。在制片过程中有的软骨细胞脱落，则软骨陷窝呈现为白色空腔；有部分软骨细胞有所收缩，其周围的白色间隙也是陷窝的一部分。陷窝周围的基质着色略深，称软骨囊第28页/共30页(6)骨组织