微生物检验第二十章真菌学

临床真菌学ClinicalMycology

侯珏临床微免教研室

1、掌握真菌的形态特征

2、掌握真菌的培养特性

3、掌握浅部真菌感染标本的直接检查法

4、掌握念珠菌、隐球菌的临床意义及微生物学检查

5、了解真菌的分类、致病性

6、了解医学上有关的真菌性疾病与病原性真菌目的与要求

20章真菌学概述真菌概述原核细胞型微生物与真核细胞型微生物的比较原核细胞型微生物真核细胞型微生物细胞核结构核膜无有核仁无有分裂方式二分裂为主有丝分裂，减数分裂细胞质结构质膜缺乏固醇常有固醇内膜较简单，有中介体复杂，有内质网和高尔基体核糖体70S80S呼吸系统质膜或中介体线粒体真菌（Fungus）概念是一类有典型的细胞核和完整细胞器，不含叶绿素，不分根、茎、叶的真核细胞型微生物

第一节真菌的生物学地位与分类生物学地位：真菌界分类：真菌界(KingdomFungi)接合菌门子囊菌门担子菌门壶菌门

真菌界壶菌门（Chytridiomycota）无中隔丝状或单细胞，大多数生于水中，少数两栖(土壤)和陆生，无性繁殖产生有鞭毛的游动孢子;有性繁殖产生卵孢子。能寄生于植物。接合菌门（Zygomycota）多数腐生，少数为寄生，多为无隔菌丝。无性繁殖产生孢子囊孢子;有性繁殖产生接合孢子。极少数偶致动物疾病。子囊菌门（ycota）：腐生或寄生。寄生于植物上可引起多种植物病害，少数寄生人、动物体上。类群较大，多数为有隔菌丝，少数为单细胞。无性繁殖为出芽或形成分生孢子，有性繁殖形成子囊孢子。担子菌门（Basidiomycota）为大型腐生真菌，由有隔菌丝组成各种子实体，多数不存在无性繁殖，有性繁殖产生担孢子1、接合菌门

2、担子菌门担子菌最大特点是形成担子（basidium)担孢子(basidiospore)3、子囊菌门共同特征：有性生殖的孢子都长在子囊中称作子囊孢子

第二节真菌的基本特性

形态与结构培养特性一、真菌的形态与结构结构：比细菌复杂主：几丁质(Chitin)（多聚N－乙酰葡萄糖组成）其他：葡聚糖，甘露聚糖及蛋白质细胞壁缺乏肽聚糖细胞膜含固醇细胞内有较为典型的核结构和细胞器

大小：比细菌大几倍～几十倍形态特点

1、单细胞真菌:圆形或卵圆形酵母型真菌类酵母型（有假菌丝）真菌2、多细胞真菌:又称丝状菌或霉菌组成：菌丝孢子多细胞真菌形态

---菌丝、孢子孢子菌丝（1）菌丝（

hypha）由真菌的孢子长出芽管，逐渐延长呈丝状，称菌丝，菌丝又可长出许多分支，交结成团称菌丝体菌丝按结构可分为:无隔菌丝；有隔菌丝菌丝体按功能可分为营养菌丝—伸入到培养基内，吸收营养气生菌丝—露出培养基表面，生殖菌丝（可产生孢子)菌丝按结构可分为：有隔菌丝与无隔菌丝

有隔菌丝：大部分真菌的菌丝在一定间距见有横隔，称隔膜。将菌丝分成一连串的细胞。

无隔菌丝：

菌丝中无横隔将其分段，整条菌丝就是一个细胞。在一个细胞内含有许多核，是一种多核单细胞真菌菌丝的形态菌丝形态：有助于鉴别真菌

（2）孢子（spore）真菌的繁殖器官，一条菌丝上可长出多个孢子，孢子又可发芽伸出芽管，发育成菌丝体。

孢子种类:

根据形态分生孢子:大分生孢子；小分生孢子;叶状孢子:芽生孢子；厚膜孢子；关节孢子;孢子囊孢子孢子形态可作为真菌鉴定的依据

①分生孢子（condium）由生殖菌丝末端细胞分裂或收缩形成，也可在菌丝侧面出芽形成，有两种：大分生孢子（macrocondium）：多细胞组成，梭状、棍棒状小分生孢子（microcondium）：单细胞组成真菌无性孢子形态芽生孢子厚膜孢子关节孢子小分生孢子大分生孢子1叶状孢子2分生孢子②叶状孢子（thallospore）由菌丝细胞直接形成：芽生孢子——出芽形成；厚膜孢子——胞浆浓缩，胞壁增厚而成；关节孢子——由菌丝分化成长方形的几个节段，胞壁稍厚芽生孢子关节孢子厚膜孢子③孢子囊孢子（sporangiospore）：菌丝末端膨大成囊状，内含许多孢子。有性孢子和无性孢子：

有性孢子——由同一菌体或不同菌体上的两个细胞融合而成。

无性孢子——由菌丝上的细胞分化生成，并不发生细胞融合，包括：分生孢子、叶状孢子和孢子囊孢子。真菌的有性孢子（根霉菌的接合孢子）是由两个同型但性别不同的配子囊相结合,经过质配和核配后形成(2N).

真菌孢子和细菌芽胞的区别真菌孢子细菌芽胞抵抗力不强，60℃-70℃短时间杀死强，煮沸短时间不死数目一条菌丝可产生多个孢子一个细菌体只形成一个芽胞作用为繁殖方式之一不是繁殖方式形成位置可在细胞内外形成只在细菌细胞内形成形状形态、色泽多样圆形或椭圆形

几个概念假菌丝Pseudohyphae:酵母菌芽殖时长大的子细胞与母细胞不立即分离，期间仅以狭小的面积相连，这种藕节状的细胞串称假菌丝。真菌丝hyphae

：真菌的孢子长出芽管，逐渐延长，细胞相连，其间隔面积与细胞直径一致，则这种竹节状的细胞串称真菌丝。二相性真菌（dimorphicfungi

）：有些真菌在体内或含有动物蛋白的培养基上，37℃培养时呈酵母菌，在普通培养基25℃培养时呈丝状菌，这种因环境条件的改变，而发生两种形态互变，称为真菌的二相性。霉菌：凡是生长在固体培养基上而长成绒毛状或棉絮状的菌丝体的真菌，统称为霉菌。是丝状真菌的俗称37℃室温二相性真菌1.培养特性：

营养要求不高沙氏培养基(Sabourand

，SDA）：应用最广泛的真菌基础分离培养基

4％葡萄糖，1％蛋白胨，pH4.0～6.0

生长速度:较慢温度：浅部病原菌：22～28℃，1～4W

深部病原菌：37℃，3～4DpH：4.0～6.0

需要一定湿度

二、真菌的培养2.培养基常用真菌培养基及用途培养基用途沙保培养基真菌的常规培养

放线菌酮－氯霉素琼脂同上

玉米粉琼脂观察白假丝酵母菌的厚膜孢子马铃薯葡萄糖琼脂观察真菌菌落色素，用于鉴别尿素琼脂用生化反应鉴别真菌（红色癣菌和石膏样癣菌）心脑浸液葡萄糖血琼脂深部真菌培养（二相性真菌）使用培养基应根据标本来源培养目的作选择

3.培养方法

（1）平皿培养

（2）试管培养：多用于菌种传代接种与保存

（3）玻片培养(小培养

)

真实了解真菌的菌丝与孢子的生长关系，可直接在玻片上培养后观察，此称真菌的小培养

真菌培养是目前鉴定真菌的唯一方法培养真菌的温度为28℃，深部真菌为37℃4.菌落特征沙保弱培养基上，3种类型的菌落：酵母型菌落

(yeasttypecolony)：菌落柔软、光滑、湿润。镜下可见单细胞性的芽生孢子，无菌丝。新生隐球菌菌落类酵母型菌落（酵母样菌落）(yeast-liketypecolony)：和酵母型菌落相似，镜下可见假菌丝。白色念珠菌菌落丝状型菌落(filamentoustypecolony)：由多细胞菌丝体组成的絮状菌落，丝状真菌或霉菌菌落。(菌落较大)丝状菌落：多细胞真菌菌丝体,菌落呈棉絮状、绒毛状，并产生不同的色素菌落的正背两面可显不同的颜色丝状菌落假丝酵母菌菌落假菌丝伸入培养基，形成表面似酵母型菌落培养基内有假菌丝的类酵母型菌落三、真菌的致病性（一）病原性真菌感染（二）条件致病性真菌感染（三）真菌变态反应性疾病（四）真菌性中毒（五）真菌与肿瘤

1.病原性真菌感染：主要是外源性感染浅部真菌：有亲嗜表皮角质特性，侵犯皮肤、指甲及须发等组织深部真菌：可侵犯皮下，内脏及脑膜等处，引起慢性肉芽肿及坏死。球孢子菌、皮炎芽生菌、组织胞浆菌

2.条件致病性真菌感染

主要是内源性感染（如白色念珠菌），与机体抵抗力，免疫力降低及菌落失调有关

3．真菌变态反应性疾病

由真菌性过敏原（如孢子抗原）引起过敏症，如哮喘，变态反应性肺泡炎和癣菌疹等。4．真菌毒素中毒症：

侵犯害肝、肾、脑、中枢神经系统及造血组织。如黄曲霉毒素、某些镰刀菌素素5、真菌毒素与肿瘤

如：黄曲霉素诱发肝癌第21章引起皮肤和软组织感染的真菌浅部感染真菌表面感染真菌皮肤癣感染真菌皮下组织感染真菌浅部真菌：引起皮肤和软组织感染的真菌共同特点：亲角质蛋白侵犯人和动物的皮肤、毛发、甲板皮肤癣真菌（Dermatophyte

）一、微生物学特性及致病性

又称皮肤丝状菌

侵犯人和动物的皮肤、毛发、指（趾）甲，引起的感染统称为皮肤癣菌病（dermatophytosis），简称癣（tinea）人类最多见的真菌病皮肤癣菌分为3个属：皮肤丝状菌毛癣菌属小孢子菌属表皮癣菌属

体癣

股癣

黑点癣白癣皮肤癣菌的特征属名种数（致病）

侵犯部位形态特征皮肤指甲毛发大分生孢子小分生孢子菌丝毛癣菌属14+++细长、棒形、壁薄，少见或无梨形、棒形，较多见螺旋状、鹿角状、结节状、球拍状、破梳状，单纯细菌丝小孢子癣菌属8+-+纺锤形，壁较厚，较多见棒形，卵圆形，较少见球拍状及破梳状菌丝表皮癣菌属1++－梨形、壁较薄，多见无单纯菌丝毛癣菌属小孢子菌属表皮癣菌属

二、微生物学检查：

(一)临床标本的收集

1．皮损的活动边缘

2．感染甲的甲下厚而脆的角化物尽可能接近健甲与病甲交界处的活动损害部位取材

3．变色处或皮面上断裂处的毛发

体癣皮屑可见关节孢子(二)直接镜检：KOH湿片检查取标本置于玻片上加一滴10%KOH溶液，盖上盖玻片（使角质软化）在火焰上方微加热，然后稍加按压镜检，先低倍，后高倍（找菌丝、孢子）病发镜检可见发内菌丝

足癣鳞屑镜检可见鳞屑细胞间有菌丝

fungushyphaeonthehair

直接镜检：菌鞘(三)分离培养与鉴定

1．标本处理：杀死细菌

2．接种到沙氏琼脂基上

3．7～l0天生长菌菌落，2～3周或更长鉴定菌种

4．必要时作特殊培养或小培养来帮助菌种鉴定

5．特异的繁殖结构、如大分生孢子、小分生孢子、螺旋菌丝和鹿角菌丝有助于菌种的鉴定22章引起侵袭性感染的真菌概述

深部感染真菌：侵入人体内脏和深部组织以及引起全身感染的真菌深部感染真菌致病性真菌：球孢子菌皮炎芽生菌组织胞浆菌条件致病性真菌念珠菌、新生隐球菌、曲霉菌、毛霉菌白念珠菌热带念珠菌克柔念珠菌季也蒙念珠菌都柏林念珠菌类星形念珠菌近平滑念珠菌葡萄牙念珠菌光滑念珠菌克菲念珠菌维斯念珠菌第一节念珠菌属（Candida）一、生物学分类：半知菌亚门，半知菌纲，隐球菌目念珠菌属150多个种，11种对人有致病性：条件致病：皮肤粘膜感染鹅口疮，阴道炎内脏感染：肺炎、关节炎、膀胱炎，肾盂肾炎中枢神经感染：脑膜（脑）炎、脑脓肿二、致病性正常菌群（体表、口腔、上呼吸道、肠道与阴道粘膜）三、微生物学检查

1.取标本镜检：根据不同疾病采取不同标本

标本（痰、脓、脑脊液等）Gram染色

镜检（G+）（孢子、假菌丝）

假丝酵母菌PseudohyphaeofCandidaalbicansinbrain.PASstainGram-stainofvaginalsmearshowingCandidaalbicansandepithelialcellsSkinsmear2.分离培养鉴定

标本→沙保培养基→观察菌落形态、假菌丝普通琼脂、血琼脂与沙保培养基需氧，室温或37℃甚至42℃生长良好菌落灰白色或奶油色，表面光滑，带有浓厚的酵母气味出芽方式繁殖，有大量向下生长的假菌丝，呈类酵母型菌落CHROMagar念珠菌显色培养基白色念珠菌典型特征为蓝绿色热带念珠菌显蓝灰色或铁蓝色光滑念珠菌显紫色克柔假丝酵母显粉色其它念珠菌显白色细菌被抑制。

3、鉴定

(1)芽管形成试验:

白色念珠菌产生芽管，其他念珠菌不产生芽管人血清或羊血清中，37℃、1.5～4h,芽生孢子及芽管形成

(2)厚膜孢子形成试验:

厚膜孢子：菌丝顶端或中间细胞膨大，细胞壁变厚，细胞质浓缩，形成的孢子标本玉米粉琼脂培养基25℃，24～48h

（菌丝顶端、侧缘或中间）

观察厚膜孢子假菌丝和厚膜孢子可帮助诊断

玉米吐温80(亚甲蓝染色)（3）生化反应

1）糖发酵试验

37℃，观察糖发酵情况2）糖同化试验（carbonassimilationtest）

主用于酵母菌的鉴定A.菌液制备：菌悬液(1ml无菌生理盐水+一接种环的新培养菌）B.浇制平板：基础培养基（45℃）+菌悬液混匀，凝固C.点样：培养皿底部做上糖名称标记，按标记加糖少许(约米粒大)，

24h后无变化可重复加糖D.观察：葡萄糖作对照

25-28℃，1-2天凡能同化者在所加糖的周围形成生长圈酵母菌对各种糖的利用，因种类不同而异这是酵母菌分类鉴定的一个重要依据

3）利用硝酸钾试验（-）尿素酶（-）

TZC试验：将待测菌接种于含0.005％氯化三苯四氮唑的葡萄糖蛋白胨琼脂上，经22～25℃，24～48h培养，白色念珠菌不变色或仅淡红色，其他念珠菌或酵母菌呈红色或深红色

麦葡半乳肌蔗乳糖(醇)同化试验（4）其它核酸检测血清学检测动物试验协助诊断：(1,3)-β-D-葡聚糖（BDG）