亚甲基四氢叶酸还原酶基因多态性与低诞生体重关系

亚甲基四氢叶酸还原酶基因多态性与低诞生体重关系吴涤李静杨艳芳 关明杰 王琨秦荣【摘要】目的探讨亚甲基四氢叶酸还原酶(MTHFR)基因多态性与新生儿低诞生体重的关系。方式采纳病例对照研究方式，搜集108例正常体重儿和57例低诞生体重儿和母亲的流行病学资料及母亲的静脉血标本，用PCRRFLP方式分析母亲MTHFR基因型，采纳Iogistic回归法分析母亲MTHFR基因型与新生儿诞生体重的关系。结果调整要紧混杂因素后，未发觉MTHFRCT/TT基因型与低诞生体重之间存在统计学关联(OR=，95%CI：～)。结论母亲MTHFR基因多态性与低诞生体重不存在统计学关联。【关键词】 亚甲基四氢叶酸还原酶 ;多态性;基因;低诞生体重【Abstract】ObjectiveToinvestigatetheassociationbetweengeneticpolymorophismsofthemethylenetetrahydrofolatereductasegene(MTHFR)inmotherandlowbirthweightintheAcasecontroldesignwasused.Fiftysevennewbornswithlowbirthweightwererecruitedasthecasegroups,and108newbornwithnormalbirthweightasthecontrol group.Aface to facequestionnaire wasadministeredtocollectdemographicandrelevantinformation.Bloodsampleswerecollectedfrommothersofbothgroups.PCRRFLPmethodwasappliedtoexamineMTHFRpolymorphisms.LogisticregressionwasusedtoanalyzetheassociationbetweengeneticpolymorphismsofMTHFRgeneinthemotherandlowbirthweightinthenewborn,whilecontrollingforpotentialconfoundingfactors.ResultsAfteradjustmentforthemainconfoundingfactors,nostatisticalassociationwasnotfoundbetweenMTHFRCT/TTgenotypeandlowbirthweight(OR=,95%CI:.ConclusionNostatisticalassociationbetweengeneticpolymorphismsofMTHFRgeneandlowbirthweightwasnotedinthispopulation.【Keywords】MethylenetetrahydrofolatePolymorphism;Gene;Lowbirthweight

reductase;低诞生体重作为早产、宫内发育迟缓、或二者兼有的表现结果，是新生儿死亡的要紧因素之一 ,中国低诞生体重儿发生率为活产婴儿的 %[1]。低诞生体重的发生存在专门大的个体不同，但人们对致使这些不同的因素却知之甚少。许多环境因素被证明与低诞生体重有关，但这些环境因素仅能说明极小的一部份不同。大量证听说明 ,低诞生体重的发生是由遗传和环境因素一起作用的结果。 有研究报导,先本性蛋氨酸 同型半胱氨酸(methionine homocysteine，MetHcy)代谢异样引发的血管病变可致使胎儿宫内发育迟缓 [2]。亚甲基四氢叶酸还原酶(methylenetetrahydrofolatereductase,MTHFR)为同型半胱氨酸(homocysteine,Hcy)代谢途径的关键酶，MTHFR基因突变可使酶活性下降，造成血中Hcy增高。本研究通过检测母亲MTHFR基因多态性，探讨该基因突变与新生儿诞生体重的关系，为低诞生体重发生机制研究提供科学依据。对象与方式一、对象2003～2006年在包钢集团第三职工医院住院临盆的108例正常体重儿(正常组)和57例低诞生体重儿(低诞生体重组)及其母亲。低诞生体重儿的入选标准：(1)孕周>28周，体重<2500g;(2)正常临盆，剔除意外情形引发的早产儿;(3)剔除双胎或多胎、先天畸形儿。正常体重儿入选标准：选择同一医院诞生的孕周≥ 28周、体重≥2500g、诞生时刻相差 <7d 、单胎正常活产婴儿;2组剔除怀胎期有归并症及并发症妊妇和新生儿。二、方式问卷调查：项目课题组成员依照文献检索结果，考虑阻碍诞生体重的相关因素设计调查问卷。采纳统一问卷调查表，由经培训的调查员对每一个妊妇进行面对面询问调查，取得详细社会人口学资料，同时询问母亲怀孕期间情绪、紧张程度、多梦、失眠状况、家人关照程度及怀孕期间天天利用运算机时刻、看电视时刻等自我感觉和行为因素。依照产房病例记录新生儿诞生孕周、诞生体重。母亲体重和血压为孕前健康体检时所检测结果。血样搜集及DNA提取：用EDTA抗凝管经无菌操作取母亲外周血2ml,4 ℃保留,24h 内按标准法[3] 提取基因组DNA。3.基因型检测:(1)MTHFR(C677T)。聚合酶链式反映(polymerasechainreaction,PCR)扩增引物5’CAAAGGCCACCCCGAAGC3’5’AGGACGGTGCGGTGAGAGTG3’(引物由上海生物工程公司合成)。μlPCR反映体系中含有10×Buffer(Mg2+15mmol/L)μl,dNTP(mmol/L)μl,上游引物(5μmol/L)μl,下游引物(5μmol/L)μl,基因组DNAμl,TaqDNA聚合酶(2MU/L)μl,灭菌双蒸水μl。反映条件为94℃、5min，94℃、45s，62℃、40s，72℃、45s，扩增35个循环，最后72℃延伸7min。PCR扩增产物245bpDNA片段。(2)限制性内切酶消化。PCR扩增产物10μl,酶切缓冲液2μl,无菌去离子水7.5μl,HinfI限制性内切酶5U,37℃水浴酶切6h,2%琼脂糖凝胶电泳,溴化乙锭染色(TaqDNA聚合酶、dNTPMixture、Marker、购自大连TaKaRa宝生物公司，琼脂糖等试剂购自上海生物工程公司 )。CC基因型显示245bp片段;CT基因型显示245bp、175bp、70bp3条片段;TT基因型显示175bp和70bp2条片段。统计学处置：用SPSS统计软件进行统计分析。计数资料采纳χ2查验，计量资料采纳t查验。依照等位基因的频率，用χ2查验对MTHFR基因型散布进行遗传平稳查验。用多因素Iogistic回归分析母亲MTHFR基因型与新生儿诞生体重的关系，并调整身高、体重、文化程度、健康状况、收缩压、舒张压、临盆孕周、情绪、失眠、多梦、紧张、利用运算机时刻、看电视时刻及家人关照程度14个对诞生体重可能产生阻碍的因素。结果一、2组母亲及新生儿生理因素比较低诞生体重组母亲收缩压、舒张压、心率、第一次月经年龄(简称月经首龄)高于正常组，睡眠时刻擅长正常组，临盆孕周和新生儿体重低于正常组，不同均有统计学意义(P<，见表1。表12组母亲及新生儿生理因素比较二、2组母亲社会和行为因素比较低诞生体重组初中以下文化程度比例高于正常组，天天看电视时刻少于1h者高于正常组，心情愉快的比例低于正常组，有时失眠的比例高于正常组，不同有统计学意义(P<。三、母亲MTHFR基因多态性与低诞生体重关系MTHFR基因型散布，108例正常体重组母亲中，MTHFR基因CC型为%(52/108)，CT/TT型为%(56/108)，57例低诞生体重儿母亲中，MTHFR基因

CC型为

%(26/57)

，CT/TT型为

%(31/57)

，2

组组成比不同无统计学意义(χ2=,P>,组母亲社会和行为因素比较 [

符合Hardy例(%)]

Weinberg

平稳。表

22四、母亲MTHFR基因多态性与低诞生体重关系单因素分析，57例低诞生体重儿母亲与 108例正常体重组母亲MTHFR基因第677位点CT/TT基因型与CC基因型相较，未发觉MTHFR基因CT/TT基因型与新生儿低诞生体重发生危险之间存在统计学关联(P=，OR=，95%CI：～;将单因素分析有统计学意义的变量进入多因素Logistic回归模型中，以诞生体重作为因变量，MTHFR(C677T)CT/TT基因型作为自变量，调整母切身高、体重、文化程度、健康状况、收缩压、舒张压、临盆孕周、情绪、失眠、多梦、紧张、利用运算机时刻、看电视时刻及家人关照程度14个变量后，未发觉MTHFR基因CT/TT基因型与新生儿低诞生体重发生危险之间存在统计学关联(P=，OR=，95%CI：～。讨论临盆代表胎儿在宫内生长发育的终点，它受母亲、胎盘、胎儿和一系列生物和环境因素的阻碍。以往对低诞生体重的遗传阻碍因素研究相对较少。有证听说明，诞生体重受遗传和环境因素的阻碍。在同胞之间诞生体重的相关系数为至(中位数约为[4]。有人观看到低诞生体重存在着代与代之间的遗传，说明遗传因素在低诞生体重的发生中起必然作用。 MTHFR基因定位于染色体上[5]，可将体内5,10亚甲基四氢叶酸还原为5甲基四氢叶酸,成为体内叶酸的要紧活性形式。目前以为MTHFR基因第4外显子的C677T碱基突变最为常见,该位点突变使高度保守的丙氨酸转变成缬氨酸,使MTHFR活性降低50%,并产生不可耐热性,从而引发Hcy在血浆中的蓄积致使高Hcy血症[6]。Cris等[7]研究显示，在8～9孕周,当Hcy为15μmol/L时,自然流产的发生率增加7倍;Hcy为10μmol/L时,胎死宫内的危险性增加2倍。高Hcy致使绒毛膜血管形成缺点,致使流产容易发生。怀胎期高Hcy可增加母亲血栓形成的危险性,引发胎盘血栓栓塞,从而引发流产。高Hcy使细胞处于高氧化应激状态从而具有胚胎毒性作用,致使胚胎发育异样或迟缓，引发新生儿诞生体重减轻。陈大方等[8]研究结果显示，婴儿MTHFRCT和TT基因型不但增加早产发生的危险性,而且能够增加低诞生体重发生的危险。但母亲MTHFR基因对早产和低诞生体重的阻碍均没有统计学意义。本研究所得结果与之一致。钟秋安等[9]研究取得相同结果，显示母亲MTHFR基因突变型、对低诞生体重阻碍无统计学意义(P>,但MTHFR基因突变型与CBS基因突变型对低诞生体重的阻碍存在交互作用。其能增加子代低诞生体重发生的危险。尽管高Hcy血症亦会在胎儿血液循环中有所表现,从而能引发胎儿心血管发育异样、神经管发育异样、早产等结果,这可能会致使胎儿诞生体重的降低。但本研究结果未显示MTHFR基因多态性与诞生体重之间的统计学关联，可能与本研究搜集的样本数量小而致使查验把握度不足有关，进而阻碍分析结果。同时因本研究搜集样本数量有限，在分析MTHFR基因型时将杂合突变CT基因型与纯合突变TT基因型归并进行。尔后将进一步扩大样本量，探讨二者之间的关系及基因与环境的交互作用对诞生体重的阻碍。为低诞生体重的病理发生机制提供科学依据。【参考文献】1林良明，刘玉琳，张新利，等 .中国低诞生体重儿抽样调查结果[J]. 中华预防医学杂志，2002，36(3)：149 153.何平,孟会,张建平.MTHFR基因C677T位点多态性与胎儿生长受限的相关性[J]. 中国妇幼保健，2007，22(35)：5032 5034.3J.萨姆布鲁克，.佛里奇，T.曼尼阿蒂斯. 分子克隆实验指南[M].第2版. 北京：科技出版社，1992.465 467.4WangXB，ZuckermanB，CoffmanGA,etal. Aggregationoflowbirth weightamongwhitesandblacksintheUnitedStates[J].NewEngJMed,1995,333:1744 1749.5Fodinger M,HorlWH,SunderG.Molecular biol ogyof5,10methylenetet rahydrofolate reductase[J] .J Nephrol,2