多维色谱的资料

多维色谱的资料第1页/共55页多维色谱的历史：色谱作为复杂混合物的分离工具，对化合物的分离分析发挥了很大的作用。目前使用的大多数仪器为一维色谱，使用一根柱子，适合于含几十至几百个物质的样品分析。当样品更复杂时，就要用到多维色谱技术。近年来,随着色谱柱技术的发展,出现了一些对复杂化合物及难分离的样品进行分离时分辨能力特别高的色谱柱。然而,世界上物质种类之多是无法计算的,而样品的复杂性也是难以估量的。例如有人分析烟草烟雾,得到上千个色谱峰,可是经质谱定性表明,平均每个峰又含有二个组分。类似这样的石油化工、环境污染物、体液、食品等复杂样品,用常规的单柱色谱分析,无论怎样增加柱效,也无法得到满意的分离结果。况且许多样品中还会含有沸点相近、极性相近、异构体等难分离物质对,这样就有必要再加上一根或几根并联或串联柱来进行分析。继而就发展出了一种新型的色谱分析方法———多维色谱法！第2页/共55页多维色谱的历史：多维色谱最早起源于平面色谱，在研究纸色谱进行液-液分配，发现可以使用不同的洗脱剂在不同的方向上进行洗脱，因而Kirchner等早在上世纪50年代首先研究了二维薄层色谱，这一工作早于对薄层色谱的基础性研究。有各种色谱-电泳技术的联用，但是最重要的平面电泳分离是二维凝胶电泳，是O’Farrell于1975年报道的，用这种方法，即一个方向使用等电聚焦，另一个方向使用十二烷激硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳，可以从细菌培养液中分离出1000个蛋白质来，到目前二维凝胶电泳仍然用于蛋白质和DNA分离中。在过去20年的发展中，更多地研究适合于自动化和进行定量分析的多柱色谱柱系统，本书主要着重于这一方面，1978年发表的一篇二维GC，近年有了更新，并在1991年Liu和Phillips对全二维GC进行的进一步的开发，Grob开发并推进了HPLC-GC的联用。第3页/共55页多维色谱的历史：

目前较成熟的技术是全二维气相色谱（ComprehensiveTwo-dimensionalGasChromatography，GC´GC），是上世纪90年代初出现的新方法。目前各大仪器公司基本实现了GC´GC仪器的商品化，已经处于实用阶段。目前正在发展中的多维分离技术还有LC´LC，LC´CE，CE´CE，LC´GC等。商品化的多维制备液相色谱仪如Sepbox5000，一次最多可以处理5000mg天然产物提取物，可以在24小时内得到576个馏分，许多馏分含有纯度为90%到99%（ELSD）的单个组分。工业上广泛使用的模拟移动床也是多维分离的典型应用。本质上来说，多维色谱就是简单的一维色谱加复杂的阀切换技术。第4页/共55页

多维色谱简介多维色谱有如下几种组合方式：

（1）同种色谱、不同选择性色谱柱串联：

二维气相色谱（GC-GC）、

二维高效液相色谱（HPLC-HPLC）、

二维超临界流体色谱（SFC-SFC）。

（2）不同类型色谱分离串联：

高效液相-气相二维色谱（HPLC-GC）、

高效液相-超临界流体二维色谱（HPLC-SFC）、

高效液相-毛细管区带电泳二维色谱（HPLC-CZE)。

第5页/共55页多维色谱简介

多维色谱有如下特点：1、利用两个或更多的色谱柱对复杂样品中的待分析组分进行分离；2、在柱之间利用切换阀将经过初次分离的全部或部分组分选择性地转入另一根或多根不同类型的色谱柱中进一步分离；3、与常规的单柱分离相比，更高的选择性、更大的峰容量和更好的分辨率。第6页/共55页多维色谱简介双色谱柱：Giddings指出在整个分离过程中要把所有的化合物完全分离开，如图所示，这里有两支第二维色谱柱，分别取来自第一维色谱柱在△t时段的流出物，在第二维色谱柱中进行再一次分离。第7页/共55页多维色谱简介峰容量：

Giddings理论告诉我们：对于分离机理相互正交的二维分离系统(如色谱)，峰的容量应该为两个色谱柱峰容量的乘积。如果一个混合物进行垂直方向独立的两次分离，即在y轴和z轴成直角，那末响应的峰容量为nz和ny，为了满足正交准则，两个方向的分离机制要不同，这样最大的峰容量就是nz和ny的乘积，nz×ny，（见图）,分离能力有显著的提高。第8页/共55页主体：<本章将对其以下四个方面分别进行阐述>

二维气相色谱(GC-GC)（主要指全二维气相色谱）二维液相色谱（2D-LC）高效液相色谱与高效气相色谱联用(LC-GC)多维色谱的应用与进展第9页/共55页（一）二维气相色谱法（GC-GC）概况：多维气相色谱(MDGC)是在气相色谱基础上发展起来的一项技术，它通过在技术上和设备上的改进，为中药成分分析提供了较好的分辨率，通过组合不同的分离模式构建多维系统有效地解决了复杂体系样品的分析问题。目前，MDGC已在中药化学、石油化工、烟草研究等诸多领域有着广泛的应用。20世纪90年代初Liu和PhillipS提出的全二维气相色谱GC-GC方法提供了一种真正的正交分离系统它是将分离机理不同而又互相独立的两支色谱柱以串连的方式结合成二维气相色谱经第1支色谱柱分离后的每一个馏分经调制器聚焦后以脉冲方式进入第2支色谱柱中进行进一步的分离通过温度和极性的改变实现气相色谱分离特性的正交化，GC-GC具有峰容量大、分析速度快、分辨率高、族分离等特点。因而该方法在复杂体系的分析方面具有其它方法无法比拟的优势，越来越受到广大色谱工作者的重视第10页/共55页二维气相色谱法（GC-GC）多维GC/GC-MS色谱仪（岛津中国）主要应用领域：1、复杂基质中特定成分分析石油产品（汽油、轻油、煤油等）香味分析（食品、饮料等）2、光学异构体的分析3、精细化学品、原料中的杂质分析主成分中微量杂质分析•环境样品中有害成分分析特点：

1、采用MultiDeansSwitching技术，第一根色谱柱上的峰的保留时间即使经过多次切割也不会出现漂移2、采用双柱箱系统，第二根色谱柱的温度程序可独立地充分优化，使系统适用性大为增强3、系统采用惰性组件连接，有效抑制组分分解和色谱峰拖尾第11页/共55页二维气相色谱法（GC-GC）原理：试样从进样口导入第一柱，各化合物根据沸点不同进行第一维分离，然后经调制器聚焦以脉冲方式区带转移进入第二柱，第一柱中因沸点相近而未分离的化合物再根据极性大小不同进行第二维分离，检测器检测到的响应信号经数据采集软件处理后得到三维色谱图（或二维轮廓图）两个横坐标分别代表第1柱和第2柱的保留时间纵坐标则表示检测器的信号强度，根据谱图中色谱峰的位置和峰体积得到各组分的定性和定量信息。根据化合物所属类型，GC-GC谱图被明显地分割成不同的区带，每一区带代表特定的族，同一族化合物在其区带内按照沸点大小不同进行分离，如烷烃环烷烃单环芳烃和多环芳烃等分别分布在不同的区带内（即族分离）。第12页/共55页二维气相色谱法（GC-GC）全二维气相色谱仪流程示意图关键部件：调制器

调制器的再聚焦作用，初始谱带明显减小，组分的分辨率和灵敏度大大提高。第13页/共55页二维气相色谱法（GC-GC）分析方法： （1）分离及定性

GC-GC

具有高峰容量、高灵敏度、高分辨率、族分离和分析速度快等特点，在对组分复杂试样的分析方面具有独特的作用。根据分析目的不同，有两种分离类型常常被用于组分的定性（族分离和目标化合物分离）。族分离要求具有相同特性如分子结构形状及与固定相的相互作用等的一组化合物与其它化合物组彼此分离；目标化合物分离则需要将感兴趣的组分与其它组分及基体进行有效分离。GC>GC定性的可靠性比一维色谱强得多，但是其定性方法与一维色谱相比并没有本质的不同，既可以根据各化合物或各化合物组在二维坐标中的保留时间并借助于参考标样来定性，也可以通过与高速质谱的联用来定性。第14页/共55页二维气相色谱法（GC-GC）关键操作单元：1、阀切换或气动切换（通过调制器的阀调制器和热调制器）；2、中心切割；单一中心切割多中心切割3、放空；4、反吹。第15页/共55页二维气相色谱法（GC-GC）（2）定量：对某一化合物定量时可以先计算其总峰高、总峰面积或峰体积；然后通过归一化法、外标法或内标标准曲线法来进行定量。与一维色谱定量不同，GC-GC第一柱流出的每一个峰被切割成几个碎片峰，对某组分定量时是将其所有的碎片峰加在一起进行积分。如果要进行族分析，则要精确地界定三维谱图中目标化合物所处的区域，将目标区域选定在一个多面体中。第16页/共55页二维气相色谱法（GC-GC）（示例一）原油中分离二甲基萘的二维GC色谱图

上面是一维柱的色谱；下面的图是二维色谱柱分离中心切割柱的色谱图。示例：第17页/共55页二维气相色谱法（GC-GC）(示例二左图)分析汽油的GCxGC二维GC图（示例三右图）环境样本中多氯联苯的分析第18页/共55页二维气相色谱法（GC-GC）（示例四）全二维GC分离烃类化合物第19页/共55页二维气相色谱法（GC-GC）小结：过去20多年里主要有三个领域应用二维气相色谱：石油、燃料、工业原料、和燃烧分析、香料、调料、和食品、环境污染物的分析。二维气相色谱会发挥其特殊的优点，大量用于燃料和环境分析领域的样品多涉及脂肪族和芳香族化合物的分析，这类样品常常很难用质谱进行分析，而对异够体的分离常常是需要利用色谱来解决。与此类似情况，有机卤代物和香料/调料的分析常常需要对手性异构体进行定量分析，这些化合物和脂肪族异构体一样，产生高度近似的质谱图，在这种情况下只能使用高分离度的色谱解决问题。第20页/共55页（二）二维液相色谱法（2D-LC）概况：二维液相色谱（2D一LC)于1978年由Emi和Frei首次使用,之后Jorgenson等于1990年实现了蛋白质的全二维液相色谱分离,第一次展现了多维液相色谱分离的巨大优势。近年来(2D一LC)方法发展迅速,己成为复杂样品分离分析的强有力工具,在蛋白质组学研究中得到了广泛的应用，二维液相色谱技术具有峰容量大、分辨率高和分离能力强等优点。但由于其运行时间长,限制了它在常规实验室的应用。目前己发展了多种方法,用于提高第二维分析的速度,如高温液相色谱、整体柱和超高压色谱，技术日趋成熟。第21页/共55页二维液相色谱法（2D-LC）Ultra-PlusII液相色谱仪/纳升及多维色谱系统（北京）技术参数：1.流量范围：≥0.01µl/min2.最大压力：10000psi主要特点：1.专利的泵驱动系统，最小步进1.5nl2.灵活的配置，可扩充为八通道色谱系统3.独道的多维LC-CE-CEC系统4.质谱仪器的理想进样系统第22页/共55页二维液相色谱法（2D-LC）

原理：

二维液相色谱是将两种分离机理不同而又相互独立的液相分离模式串联起来构成的分离系统。第一维使用一根色谱柱,也可以是多根分离模式相同的色谱柱串联;第二维使用一根色谱柱,也可以是多根相同或不同的色谱柱并联。样品经过第一维的色谱柱进入接口中,通过浓缩、捕集或切割后被转移进入第二维色谱柱及检测器中。根据不同的分离目的,正相色谱(NPLC)、反相色谱(RPLC)、离子交换色谱(IEC)、体积排阻色谱(SEC)、亲和色谱(AC)等分离模式皆可以组合。组合两种不同的分离模式构建二维液相色谱系统。第23页/共55页二维液相色谱法（2D-LC）2D-LC仪器的组成及联用模式下LC和检测器的类型：

1、2D-LC仪器的组成2D-LC联用装置主要由溶剂泵、进样阀、LC柱、接口装置、检测器、控制机数据处理系统组成。（其中尤其重要的就是接口装置的技术）

2、2D-LC检测器的类型LC有多种分离模式，在实际中SEC-SPLC、IEC-HPLC、AC-HPLC等是目前比较常见的联用模式。在该2D系统中，流动相具有相容性，易混合，使得联用更容易。目前绝大多数的2D-LC的第二维是由RPLC来完成的，RPLC高效分离、无盐而且便于后续处理的诸多的优点使之被选用于最后一维的分离。与此同时，2D-LC与质谱串联（2D-LC-MS或2D-LC-MS-MS）以及与UV检测和荧光检测的联用都能有很好的分离分析效果。第24页/共55页二维液相色谱法（2D-LC）二维液相色谱接口技术

将经过第一维分离的样品组分有效地转移到第二维中,是在线二维液相色谱设计的核心。根据一维洗脱产物的转移方式可分为直接转移(directlycoupled-column)和间接转移(column-switching)。直接转移模式通用性差,选择性和峰容量不高,其应用仅限于强阳离子交换色谱(SCX)和反相液相色谱(RPLC)联用。二维液相色谱更多的是采用间接转移模式。间接转移模式二维液相色谱是通过一个特殊接口将第一维色谱柱和第二维色谱柱连接,接口收集第一维的洗脱产物,并将其转移到第二维。同直接转移模式二维液相色谱相比,间接转移模式二维液相色谱的通用性强,使用灵活,是二维液相色谱的主流技术。接口是二维液相色谱系统的核心,接口的设计直接决定了二维液相色谱系统的实际分离能力。第25页/共55页二维液相色谱法（2D-LC）二维液相色谱切换（接口）技术目前,已经发展出了多种间接接口,每种接口都有各自的优点,可根据不同的需要来选择合适的接口。具体有以下5种：（1）样品环接口(loopinterface)；（2）捕集柱接口(packedloopinterface)；（3）平行柱接口；（4）停流接口(stop-flowinterface)；（5）真空辅助溶剂蒸发接口。

第26页/共55页二维液相色谱法（2D-LC）样品环接口-二维液相色谱系统示意图捕集柱接口-二维液相色谱系统示意图第27页/共55页二维液相色谱法（2D-LC）停流接口-二维液相色谱连接示意图平行柱接口-二维液相色谱系统示意图第28页/共55页二维液相色谱法（2D-LC）真空辅助溶剂蒸发接口-二维液相色谱连接示意图第29页/共55页二维液相色谱法（2D-LC）小结：2D-LC的优缺点及选择：

优点：（1）集样品的净化与浓缩及分离测定于一体，能起到样品预处理的作用，分析柱受到的污染少，而且大大减少了溶剂用量，避免大量样品的手工前处理工作，可以直接进样分析，加快了分析速度。（2）进样量大，灵敏度高，适合做大量样品的痕量分析。（3）联用降低了样品损失和遭受污染的风险，消除了水蒸气及光照的负面影响，提高方法的可靠性和重要性。（4）能从复杂的多种组分中排除干扰物质，有选择性的针对感兴趣组分进行分析。（5）容易实现自动化。缺点：由于2D-LC联用系统的复杂性增加，转化阀、环线及检测器造成的死体积增加了峰展宽的风险性，而且方法的建立比较繁琐，尽管联用在实际分析中比较简便而且节约时间，但是方法的建立过程比较好耗时。因此，如果单一色谱能够解决的问题，没有必要选择2D-LC处理。第30页/共55页（三）高效液相色谱与高效气相色谱联用(LC一GC)概况：在某些特殊情况下，把高效液相色谱和高效气相色谱结合在一起（HPLC-HRGC）就会体现出高选择性的HPLC和高效、高灵敏度HRGC的完美匹配，会得到比较高的峰容量。进行在线连接有许多好处：需要的样品两少；样品不会被污染；无须把样品蒸发或稀释；样品的前或后处理可以完全自动化。在线连接的缺点是：系统操作困难；初始设备费用高；接口比较复杂。LC-GC在线连接的主要问题是要解决大量的液体从LC转移到GC中，GC和LC之间的物理状态不同。研究了许多不同的方法，把大量溶剂从LC转移到GC色谱柱中，这些方法中要解决如何把溶剂除去的技术，而使被分析组分形成一个窄的谱带进入GC色谱柱进行分离。第31页/共55页高效液相色谱与高效气相色谱联用(LC一GC)赛默飞世尔科技公司(ThermoFisherScientific)（美国）LC-GC核心：接口转移技术。（即蒸发HPLC流出物的方法，让大量LC流出物转移到气相色谱仪中）第32页/共55页高效液相色谱与高效气相色谱联用(LC一GC)转移技术：直接接口模式：保留间隙转移；定量管型（与洗脱液同时蒸发）接口。用逆流溶剂蒸发方式直接进样用逆流溶剂和共溶剂蒸发方式直接进样间接接口模式：固相萃取（SPE）；液-液萃取（LLE）；开管毛细管色谱柱捕集(OTT)。第33页/共55页高效液相色谱与高效气相色谱联用(LC一GC)直接接口模式：1、保留间隙技术保留间隙方法是分析含有高挥发性样品定性和定量分析的最好的途径，这一方法的主要特点是在LC流出物沸点温度（适合的出口压力)以下把它转移到GC中，如图，这样使样品的蒸汽压低于进口载气的压力，并有如下两种结果：•由于溶剂效应挥发性组分又重新浓缩，这是溶剂捕集；•高沸点组分由于谱带在空间分散而展宽。

由于在分析时有利于大多数挥发性组分的保留，因此主要分析挥发性强的化合物。柱头进样接口的示意图第34页/共55页高效液相色谱与高效气相色谱联用(LC一GC)直接接口模式：2、定量管型（与洗脱液同时蒸发）接口使用与洗脱液同时蒸发技术，由于这一技术简单并可转移大量溶剂，在这种情况下把溶剂引入未涂固定相的进样口（进样口的温度等于或高于溶剂的沸点）。按这种方式液体的转移速度相应于溶剂蒸发的速度，要进行分析的样品保留在连接在切换阀上的定量管中（如图），样品可以被载气输送到气相色谱仪中，不必用LC。而早先排出的蒸汽是在几米长的去活预柱和一小段(3–4m)主要保留柱之后。当溶剂蒸发过程中切换阀是打开的，以便减少溶剂进入到检测器的量，同时也加快了溶剂蒸发的速度。这一技术的主要优点是使用比较短的保留间隙柱（3m左右)就够了，蒸发速度要比转移温度低于溶剂沸点时快的多，而且要求溶剂湿润保留间隙管不那么重要。第35页/共55页高效液相色谱与高效气相色谱联用(LC一GC)共洗脱液蒸发技术的缺点：

是挥发性化合物会有一定的损失，解决这一问题的方法是进行与洗脱液同时蒸发时，使用所谓“共溶剂捕集”技术，实际上是往主要溶剂中加少量高沸点共溶剂，这样一来在样品浓缩时共溶剂就会以液态形式留在后面，其中一部分随主要溶剂一起蒸发，这一共溶剂的存在形成一个液膜壁垒，就像在保留间隙管一样，这一液膜从后向前进行蒸发，挥发性组分靠此溶剂捕集效应得以保留，当共溶剂完全蒸发时它就释放出来。定量管（与洗脱液同时蒸发）接口的示意图第36页/共55页高效液相色谱与高效气相色谱联用(LC一GC)在线SPE-GC示意图包括三个切换阀（V1-V3），两个泵（一个溶剂输送单元（SDU）泵和一个注射泵），一个装有溶剂蒸汽出口（SVE）的GC系统，一个MS仪器检测器，一个保留间隙柱，一个保留预柱，和一个分析柱。间接接口模式：1、固相萃取（SPE）第37页/共55页高效液相色谱与高效气相色谱联用(LC一GC)间接接口模式：2、液-液萃取（LLE）第38页/共55页高效液相色谱与高效气相色谱联用(LC一GC)在线萃取-气相色谱设备示意图V1和V2,阀;P1和P2,注射泵;L,样品环;CCflow,逆流流动;CT,冷阱.间接接口模式：3、开管毛细管色谱柱捕集(OTT)第39页/共55页高效液相色谱与高效气相色谱联用(LC一GC)

小结：HPLC-GC的二维色谱是进行样品富集和样品净化很好的在线分析方法，近年有很多作者对这一技术做了综述报告，对各种LC-GC转移方法进行了阐述。对正相洗脱物主要的转移方法是使用定量环型接口同向流动蒸发的方法。这一方法的主要缺点是溶质和溶剂一起蒸发，因而使易挥发组分会损失一些。要分析易于挥发的化合物从LC转移到GC的最好方法是保留间隙管。由于上面所结实的溶剂效应，这一技术可以分析紧跟在溶剂后面的被分析化合物，这一方法恩人主要缺点是能转移的容量很有限，因为未涂渍毛细管其容量比较小，比较大的馏份可以使用部分共同蒸发技术进行转移，这样仍可保留保留间隙管技术的优点。分析这类含水样品使用间接进样(LLE,SPE和OTT)是较好的选择。第40页/共55页（四）多维色谱应用多维色谱作为一种分离技术与方法过去20多年里其理论日趋成熟，其发展速度越来越快，应用领域也越来越广泛。随着科技的发展，色谱分离方法在石油化工行业、生物、医药、食品、卫生、商品检测、法医检测、未知物质的剖析分析得到了广泛的应用，并为这些学科的发展做出了巨大的贡献。本章将从以下三个方面的应用更别进行阐述：（1）多维色谱在生物制药研究中的应用；（2）多维色谱-质谱技术在蛋白质组学中的研究和应用；（3）多维色谱在石油化工中的应用。第41页/共55页多维色谱的应用（1）多维色谱在生物制药研究中的应用摘要：在复杂生物体系和制药工业中，有大量需要定性和定量的目标分析物，如缩氨酸、药物、代谢物、生物标记物、杂质、降解产物等。它们存在于各种不同的基体及化学反应过程中，包括合成反应、生物流、微生物代谢过程等。高效、多维生物分析技术正以整体化和自动化的方式应用于解决制药工业和生物技术中棘手的分离难题，以实现复杂基体中目标物质的高效分析。通过对全二维气相色谱(GC×GC)、全二维液相色谱(HPLC×HPLC)、多维毛细管电泳等多维分离技术在生物制药研究中的应用，以及在全二维气相色谱应用于中药及固相萃取一液相色谱联用分析系统等方面的工作研究。由所综述的生物制药研究得出结论：多维分离方法以其高分辨、快速、自动化等特点已经在生物制药领域显示出它的巨大优势，并将发挥更大的作用。第42页/共55页多维色谱的应用以全二维气相色谱(GC×GC）在生物制药研究中为例：由于中药的特征是复方，因此其化学成分十分复杂，建立GC×GC的技术平台十分必要。其中调制器是GC×GC的核心。针对调制器的发展趋势，研制了一个基于CO2的单喷冷阱调制器，可对C6以上组分进行有效调制。在此基础上，开展了对中药挥发油组分全分析和中药质量控制的GC×GC研究，过去采用GC-MS研究连翘挥发油，鉴定的组分在100种之内。而我们使用GC×GC—MS，通过优化色谱条件，鉴定出匹配度大于800的组分有220种。其中，烃类43种，醇类46种，酸和酯类29种，醚类13种，醛类19种，酮类41种，杂原子类29种。共有66种物质的相对含量(体积分数)大于0．02％。，此外用GC×GC对卷烟烟气中酸性、碱性及中性成分进行了系统分析，取得了近4000个化合物的信息。全二维气相色谱已经用于药物分析中对杂质的控制，检出限可达10～100μg/L，因此可以说，GC×GC—MS在中药挥发油成分分析领域已显示出巨大的优势。第43页/共55页多维色谱的应用（2）二维色谱-质谱技术在蛋白质组学中的研究和应用摘要：在蛋白质组学研究中，目前采用的技术主要有二维凝胶电泳(2D—PAGE)一质谱MS)方法和多维色谱(LC)一质谱方法。随着全自动割胶、酶解、点样仪的出现，2D技术自动化程度相对提高，整个分析时间也有所缩短。二维凝胶电泳(2-DE)是能将数千种蛋白质同时分离与展示的分离技术。2-DE是由O’Farrell和Klose于1975年分别提出的。在2-DE中，蛋白质首先根据等电点的不同在一向等电聚焦电泳中分离，接着被转移到二向SDS．聚丙烯胺凝胶上，再根据相对分子质量大小不同被分离。近年来多维色谱-质谱技术的发展，弥补以二维凝胶电泳一质谱为基础的蛋白质组技术方法的不足。这一技术将分离机理不同的色谱模式(如离子交换一反相色谱、亲和色谱一反相色谱)结合在一起，实现高通量、高效率的多维分离，并进行质谱检测，将获得的数据进行数据库搜索，可以大规模的鉴定蛋白质。第44页/共55页多维色谱的应用以多维色谱--质谱分析肝癌患者血浆中的低丰度差异蛋白为例：人血液含有来源于几乎所有细胞、组织、器官的蛋白,可以直接反映机体的病理、生理状况,是发现与各种疾病相关生物标志物的最有价值样本之一。本研究采用多维色谱串联质谱分析技术,以肝癌（HCC）患者血浆为研究对象,选用免疫亲和色谱去除血浆中6种主要高丰度蛋白、离线RP-HPLC预分级血浆低丰度蛋白并收集差异表达蛋白组，通过富集、分离酶解肽混合物，线性离子阱质谱途径在线鉴定差异蛋白。下图是免疫亲和色谱去除人血浆高丰度蛋白。其会掩盖很多中、低丰度蛋白的特性并干扰低丰度蛋白检测第45页/共55页多维色谱的应用以多维色谱--质谱分析肝癌患者血浆中的低丰度差异蛋白为例：血浆低丰度蛋白质组的反相色谱分级以及多维色谱-质谱/质谱分离与分析

前6泳道是高丰度蛋，7、8泳道是我们所要的低丰度蛋白。第46页/共55页多维色谱的应用以多维色谱--质谱分析肝癌患者血浆中的低丰度差异蛋白为例：第47页/共55页多维色谱的应用（3）多维色谱在石油化工中的应用摘要：在石油化工生产中，各原料的组成及各种性能的分析评价以及快速准确地分析出中间控制物料对操作条件的优化起着非常重要的作用。在石化行业中原料的分析评价，中间控制物料的准确分析多数是由色谱分析决定，常规的色谱分析已经基本能够完成这些分析，但对于一些复杂的石油化工物料，常规的色谱分析已无法快速、准确地完成，但使用多维色谱技术却能够做到，因此多维多谱在石化应用中具有极其重要的应用价值，大力推广这项技术也是非常必要的。

第48页/共55页多维色谱的应用1、以多维色谱法测定含烯汽油馏分的组成实验为例：多维色谱仪测定了汽油样品的烯烃组成，研究了影响测定的因素，结果表明，烯烃吸附阱温度和样品的轻烯烃含量是影响测定结果的主要因素。烯烃的穿透性随碳数的降低和烯烃阱温度的升高而增加。烯烃阱温度为160℃时，未观察到C8以上烯烃吸附效率降低。对C5烯烃，吸附阱温度高于130℃即可观察到明显穿透。烯烃阱吸附温度低于130℃,C11烷烃吸附明显,影响测定结果。国内催化裂化全馏分汽油样品的C5及C6,烯烃含量较高且终馏点为200℃,必须采用二段分析模式测定烯烃组成，测定结果与荧光色层法比较一致。第49页/共55页多维色谱的应用2、多维气相色谱一质谱法高灵敏度测定汽油中的含氧化合物:多维气相色谱--质谱联用仪用于检测汽油中13种氧化物的方法。该方法可以对汽油中的氧化物进行准确的定性定量分析。汽油中各种氧化物标准样品图第50页/共55页（五）多维色谱分离技术新进展（1）集成在微流控芯片上的二维液相色谱-毛细管电泳