分析化学-UV-60课件

§2.1Introductionofspectroscopicanalysis

电磁辐射（光）与被测物质间的相互作用

电辐射的基本性质波粒二象性

E=hv=hc/l(h=6.6256×10-34Js)

(leV=1.602×10-19J,

表示一个电子通过一个伏特电压降所获得的能量)

光谱区域电磁波谱(electromagnetricspectrum):电磁辐射按波长顺序排列可分为几个区域，如无线电波、微波、紫外-可见等Chapter2UV-Visabsorptionspectroscopy电磁辐射与物质相互作用的方式:

发射、吸收、反射、折射、散射、干涉、衍射、偏振等光学分析法:光谱法和非光谱法两大类。光谱法:

基于物质与辐射能作用时，测量由物质内部发生量子化的能级之间的跃迁而产生的发射、吸收或散射辐射的波长和强度进行分析的方法光谱法可分为原子光谱法和分子光谱法:原子光谱法是由原子外层或内层电子能级的变化产生的，它的表现形式为线光谱.

有原子发射光谱法（AES,atomicemissionspectrometry）

原子吸收光谱法（AAS,atomicabsorptionspectrometry）

原子荧光光谱法（AFS,atomicfluorescencespectrometry）

X射线荧光光谱法（XFS,X-rayfluorescencespectrometry）分子光谱是由分子中电子能级、振动和转动能级的变化产生的，表现形式为带光谱.

有紫外-可见分光光度法（UV-Vis）

红外光谱法（IR,infraredspectrometry）

分子荧光光谱法（MFS,molecularfluorescencespectrometry）

分子磷光光谱法（MPS,molecularphosphorescencespectrometry)

§2.2Principlesofmolecularabsorptionspectroscopy

分子吸收现象

CuSO4溶液为蓝色，KMnO4呈紫红色物质的分子对白色光具有选择性的吸收,

其颜色为透过光的颜色CuSO4溶液吸收黄色光,其溶液呈现出蓝色；KMnO4分子强烈地吸收黄绿色光，溶液呈紫红色互补色光：如果两种颜色的光按适当的强度比例混合后组成白光Lambert-Beer’sLaw当一束平行的单色光通过吸光物质后，光的吸收程度与吸光物质微粒的数目（溶液的浓度）成正比，与溶液液层厚度成正比

A=-logI0/I=ebc

cistheconcentrationofthecompoundinsolution,molL-1

bisthepathlengthofthesample,cme

isthemolarabsorptivity,cm-1mol-1L

摩尔吸光系数:物质的性质、入射光波长，温度有关

重要的参数，常被用作为定量分析方法的灵敏度

Whydomoleculesabsorblight?任何物质的分子都处于运动状态，分子内部的运动有三种形式：电子绕分子轨道高速旋转原子在平衡位置附近的振动分子绕着其重心的转动因此，分子的能量由分子的电子能量、分子的振动能量及分子的转动能量所组成

E分子=E电子+E振动+E转动分子中价电子能级间的能级差一般在1～20eV，恰好是可见光和紫外光的能量分子中原子的振动能级差为0.05～leV，相当于红外光的能量转动能级差更小，一般在10-4～0.05eV，相当于远红外光及微波的能量分子内部各种能级的能量改变都是量子化的各能级差的大小与分子的内部结构有关M（groundstate）+hv

→

M（excitedstate）

测出的入射光谱和被吸收后的透过光谱，其差谱为该分子吸收光的光谱，即分子吸收光谱紫外-可见吸收光谱:分子吸收光谱(Molecularabsorptionspectroscopy)

电子光谱(electronicabsorptionspectroscopy)

分子中的价电子的跃迁而产生的

物质对光的选择性吸收的规律对化学家来说非常有用:能通过测定吸收光谱，推测物质的内部结构信息，从而进行结构分析。Why?不同物质由于结构上的差异导致其能级差不同，跃迁所需的能量也不同，对光的吸收不同，出现的吸收光谱的形状就不同。-胡罗卜素咖啡因阿斯匹林丙酮几种有机化合物的分子吸收光谱图有机化合物的紫外-可见吸收光谱的产生

由于物质对可见-紫外光的吸收一般都涉及到价电子的激发，将吸收峰的波长与所研究物质中存在的键型建立起相应的对应关系，找到规律，就可利用吸收光谱来达到鉴定分子中官能团的目的（定性分析），也可用它来定量测定含有吸收官能团的化合物（定量分析）各种跃迁所需要的能量不同，因而吸收波长范围也不相同。Electronictransitions有机化合物的价电子包括成键s电子，成键p电子和非键n电子如

CH3-CH=CH2，CH3-CH2-ÖH分子的空轨道包括反键p*轨道和反键s*轨道，因此可能产生的跃迁有eforn→

p*transitions:10–100Lmol-1cm-1p→p*transitions:1000and10,000Lmol-1cm-1大气的氧吸收根据分子吸收光谱可以判断物质能否用紫外-可见分光光度法进行定量测定如

RCHNH2COOH

不宜用分子吸收光谱法测定类胡萝卜素血红素金属配合物的紫外-可见吸收光谱金属配合物的颜色一般不同于游离金属离子和配位体本身的颜色金属配合物生色机理的主要类型：⑴配位体微扰的金属离子d-d电子跃迁和f-f

电子跃迁

摩尔吸收系数ε很小，对定量分析意义不大。⑵金属离子微扰的配位体内电子跃迁

金属离子的微扰，将引起配位体吸收波长和强度的变化。变化与成键性质有关，若静电引力结合，变化一般很小。若共价键和配位键结合，则变化非常明显。⑶电荷转移在分光光度法中具有重要意义电荷转移吸收光谱的特点之一：电荷转移跃迁在跃迁选律上属于允许跃迁，其摩尔吸光系数一般都较大(104左右)，适宜于痕量金属的检出和测定。之二：电荷转移跃迁在紫外区或可见光呈现荷移光谱，荷移光谱的最大吸收波长及吸收强度与电荷转移的难易程度有关。

例：Fe3＋与SCN－形成血红色配合物，在490nm处有强吸收峰

§2.3Instrumentation

部件及性能任何一种光学分析测试仪器，都由5个部分组成，只是依据分析原理不同其排列方式有所不同单色器

作用是将光源发生的连续光谱分解为单色光为什么要将连续光谱分解成单色光以后，再进行样品的分析测定呢？两个理由

①定量方面比尔定律只有当入射光为单色光时才成立②定性方面一个物质若含有生色基团，它就会产生紫外和可见吸收，反过来根据紫外-可见吸收光谱便可判断某些官能团的存在，即进行官能团的鉴别，但整张紫外-可见吸收光谱的获得是建立在测定出物质对不同波长光（单色光）吸收的基础上的单色器:

色散元件,入射狭缝、出射狭缝和准直透镜色散元件:棱镜和光栅

棱镜的分辩能力R与其底边的长度（b）成正比

：

R=bdn/dl故要提高棱镜的分辩能力唯一的办法:采用大棱镜现代光学仪器一般采用光栅作为色散元件光栅的分辩能力与其刻痕条数有关制作方法：在真空中将金属铝蒸发镀在玻璃平面上，再用金刚石在铝层上压出许多等间隔、等宽度的平行刻纹而成。刻纹光栅制作麻烦，价格高现在使用复制光栅:将可塑性材料浇铸在原始光栅上，将其剥离后再固定在刚性支架上即成。光栅分光的优点：适用波长范围宽，色散均匀，分辩率高，仪器可小型化

吸收池(比色皿)

作用：用来盛放样品要求：透明性操作要求：位置、清洁、免受玷污和磨损可见光区：玻璃吸收池，价廉紫外光区：石英吸收池检测系统

作用：将光信号转变为易于测量的电流信号种类：原则对光响应要快、灵敏响应的波长范围宽线性响应不易疲劳读数指示器作用：信号的放大和读出方式：记录仪、数字显示器

光电倍增管分光光度计的类型最适和环境和过程监测，不太稳定的样品分析

§2.4定量分析

定量分析基础如何进行误差来源减少误差的方法紫外可见分光光度法:测定低含量和痕量组分的一种常见方法单组分的测定多组分的同时测定分析依据—比尔定律比尔定律

A=ebc标准工作曲线法：配标液：c1、c2、c3……cn，在选定的最大吸收波长和最佳操作条件下，测吸光度A1、A2、A3、……An

作A～c

图,得一直线再在完全相同的条件下，测试样液的A，再从标准曲线上查到相应的浓度如：抗菌素cefazolin药片中西发单灵含量的测定西发单灵对照品（标样）

实际样品多为多组分体系:若各种吸光物质之间没有相互作用，且服从比尔定律，那么在某个波长下总的吸光度应等于各组分吸光度之和，即

吸光度A的性质—加合性A=A1+A2+…+An

=e1bc1+e2bc2+…+enbcn

A=-lgT=lgI0–lgI要准确测出入射光强和透射光强非常困难如黄光通过透明比色皿因反射约损失8.5%

如何测定吸光度A在实际测量中，采用同一比色皿或等同的比色皿中放入纯溶剂与被分析溶液的透射强度进行比较：

A=lg(I溶剂/I溶液）≒lgI0/I双光束分光光度计：参比光路（R）——纯溶剂测定光路——被测溶液A=A溶液-A参比单光束分光光度计光催化剂UV-Vis反射曲线以MgO为空白以BaSO4为空白误差来源偏离比尔定律、仪器本身的测量误差偏离比耳定律的原因比尔定律本身的局限性比尔定律只适用于稀溶液:

假设吸光粒子之间无相互作用非单色入射光引起的偏离比尔定律仅在入射光为单色光时才成立单色器很难将光源的连续光色散成其正的单色光而是复合光，光通量为0.01～5nm由于被测物质在溶液中发生缔合、离解、互变异构，生成逐级配合物等化学原因造成溶液的化学偏离任何一台光度计都有一定的仪器测量误差，来源于：①入射光源不稳定②吸收池③检测器误差的总和表现为透光度读数误差ΔT，从而导致ΔC被测试样浓度的相对误差：微分②③d(lgT)

=0.434dT/T=-ebdcA=-lgT=ebc,lgT=-ebc①仪器测量误差及测量条件的选择当A=0.434时Dc/c有最小值，误差最小问题：如何减少因读数而造成的测量误差呢？①稀释②改变比色皿的b③仪器制造商△T④选择合适的参比溶液例：分析高浓度组分时，可用一种比待测样品溶液浓度稍低的溶液为参比，调其透光率为100%，再测样品溶液的吸光度差示吸光度差示分光光度法：测定各种试样中的高含量金属元素和有机物质如Hiskey等用该法测定溶解在苯中的蒽：

用0.03mg/mL蒽标液作参比，359nm处长蒽的线性范围为0.03～0.4mg/mL差示分光光度法的定量依据§2.5显色反应与显色条件的选择

直接测定：在紫外-可见光区有强烈吸收的有机化合物（生物大分子和含有共轭Л电子的有机化合物）不吸收紫外—可见光的无机阳离子：Na+、K+、Ca2+、Mg2+等摩尔吸光系数非常小金属阳离子：Fe2+、Co2+、Ni2+等如何利用紫外-可见吸光光度法来测定这些无机阳离子的含量呢？显色反应

M(无色)

+R(有色)

→

MR显色剂（配合剂）较高的灵敏度，保证低含量时仍能被测出

ε↑，显色反应灵敏度↑选择性强R不与其他共存离子发生反应有色结合物的组成恒定、稳定R与MR色差明显显色条件易于控制:显色剂浓度、温度、pH显色反应的要求§2.6具体应用示例

无机阴、阳离子的测定利用高灵敏、高选择性的有机显色剂，与被测无机离子发生配合或氧化还原反应，可测定周期表中绝大多数元素

有机化合物的定量分析

直接法含有双键或芳环的有机化合物

间接法被测组分不吸光或ε很小或共存组分对测定有严重干扰时，可通过适当的化学反应，改变被测组分的生色团，测定产物的A来计算待测组分的含量（1）氧化反应常用于药物分析中在5molL-1H2SO4介质中，用0.1mlL-1K2Cr2O7氧化联苯羟胺为二苯酮，其lmax为257nm（2）缩合反应①如微量氨基酸的测定氨基酸的吸收波长在280nm左右，且ε较小,低含量的氨基酸很难用直接法准确测定。可用茚三酮与各种氨基酸反应，生成无色还原型茚三酮，过量的茚三酮又与还原型茚三酮和氨缩合生成紫蓝色产物，称为Ruhemann紫，lmax=570nm，利用此反应可测微量的氨基酸广泛应用于蛋白质序列结构分析中②食品中糖的测定各种糖与蒽酮在H2SO4介质中反应，生成的蓝绿色化