空气中细菌的测定

空气中细菌的测定《公共场所卫生检验方法第3部分：空气微生物》（GB/T18204.3-2013）一、自然沉降法（一）目的和意义掌握自然沉降法的原理和采样方法熟悉本次实习的操作步骤及注意事项了解室内空气微生物测定的意义（二）原理将营养琼脂平板暴露在空气中，微生物根据重力作用自然沉降到平板上，经实验室培养后得到菌落数，再按公式推算出每立方米空气中的菌落数。（三）仪器高压蒸气灭菌器电热恒温干燥箱恒温培养箱玻璃平皿或一次性灭菌平皿，9cm高压蒸气灭菌器电热恒温干燥箱恒温培养箱玻璃平皿（四）试剂营养琼脂培养基培养基成分：蛋白胨10g

牛肉膏5g

氯化钠5g琼脂20g蒸馏水1000ml制法：将蛋白胨、牛肉膏、氯化钠溶于蒸馏水，调节PH7.2~7.6。加入琼脂，经121℃（103kPa）高压蒸气灭菌20min。然后倾注适量（15~20ml）4于已灭菌处理的培养皿内，制成营养琼脂平板备用。若当天不用，应置4℃冰箱内保存。（五）操作方法布点要求室内面积不足50m2的设置3个采样点，

50m2以上的设置5个采样点。采样点按均匀布点原则布置，室内3个采样点的设置在室内对角线四等分的3个等分点上，5个采样点的按梅花布点。采样点距离地面高度1.2~1.5m，距离墙壁不小于1m。采样点应避开通风口、通风道等。采样选择好采样点后，将营养琼脂平板水平放于采样点位置，并将皿盖揭开，使平皿内营养琼脂培养基表面暴露于空气中5min。盖上皿盖，将平板倒置，于恒温培养箱中，37

℃培养24h后计数菌落数。

二、撞击法（一）目的和意义掌握撞击法测定空气微生物的采样方法熟悉本次实习的操作步骤及注意事项了解撞击式空气微生物采样器的工作原理（二）原理

撞击法是采用撞击式空气微生物采样器，使空气通过狭缝或小孔产生高速气流，从而将悬浮在空气中的微生物采集到营养琼脂平板上，经实验室培养后得到菌落数的测定方法。在计算每立方米空气中所含的细菌菌落数的采样测定方法。（三）仪器高压蒸气灭菌器恒温培养箱玻璃平皿或一次性灭菌平皿，9cm六级筛孔撞击式空气微生物采样器（四）试剂营养琼脂培养基（五）操作方法布点要求采样点选择根据采样点面积及环境状况，选择有代表性的位置设置采样点。室内面积不足50m2的设置1个采样点，

50~200m2的设置2个采样点，200m2以上的设置3~5个采样点。采样点按均匀布点原则布置，室内1个采样点的设置在中央，

2个采样点的设置在室内对称点上，3个采样点的设置在室内对角线四等分的3个等分点上，5个采样点的按梅花布点，其他的按均匀布点原则布置。采样点距离地面高度1.2~1.5m，距离墙壁不小于1m。采样点应避开通风口、通风道等。采样器准备仪器的清洁消毒：根据采样点的洁净要求，对仪器表面进行不同程度的清洁或消毒处理。采样装置的清洁灭菌：取下采样装置上的盖子和端盖，用酒精棉球火焰灭菌约1min，然后将其移回采样装置上，冷却。采样

按仪器说明书操作，将采样时间的旋钮调到选定的采样时间档上。选择直流或交流电源，打开电源开关，设定好采样时间。将采样的平皿盖略松开，打开已冷却的端盖，将无菌采样平皿置于采样装置座的平皿托架上，旋紧端盖。按下计时开关，仪器便开始采样和计时，调节流量（28.3L/min），采样5~15min。设定的采样时间归零后，仪器自动关机，采样结束。旋开端盖，立即将平皿盖盖上，将平皿倒置于储存盒内。同一点应重复采样3次，按上述各步骤进行。细菌培养将采过样的平皿倒置，于恒温培养箱中，37℃培养24h后计数菌落数。

菌落计数计数培养后每皿所生长的菌落数，并求出同一点重复采样的平均菌落数。空气中细菌总数的计算根据平皿菌落计数结果，用下列公式换算成每立方米空气中的菌落数，以CFU/m3表示：空气中菌落数（CFU/m3）=1000N/Q×t式中：N——采样点直接计数的平均菌落数；Q——采样流量（L/min）；t——采样时间（min）；一个区域空气中细菌总数的测定结果按该区域全部采样点中细菌总数测定值中的最大值给出。注意事项撞击式空气卫生物采样器由于采样效率高，方法简便，是目前国际上应用最广泛的一种采