培养基的制备和灭菌

培养基的制备和灭菌第一页，共十二页，2022年，8月28日培养基的制备和灭菌实验材料1.成份：牛肉膏、蛋白胨、氯化钠、琼脂2.试剂：1NNaOH溶液、1NHCl溶液3.仪器：pH试纸、三角瓶、试管、烧杯、玻棒、量筒、纱布、漏斗、台秤、吸管、药匙、棉塞、牛皮纸、灭菌锅等第二页，共十二页，2022年，8月28日培养基的制备和灭菌

实验步骤原料称量溶解调节pH（加琼脂熔化）塞棉塞、包装（过滤澄清）

灭菌分装第三页，共十二页，2022年，8月28日培养基的制备和灭菌实验步骤之溶解一般情况下，几种药品可一起到入烧杯内，先加少于计料体积的水进行加热溶解，但如有磷酸盐和钙盐等混合在一起时,易产生磷酸钙和磷酸镁沉淀，所以要分别溶解。加热时要搅拌，完全溶解后补足水分至计料体积。第四页，共十二页，2022年，8月28日培养基的制备和灭菌

实验步骤原料称量溶解调节pH（加琼脂熔化）塞棉塞、包装（过滤澄清）

灭菌分装第五页，共十二页，2022年，8月28日培养基的制备和灭菌实验步骤之分装固体试管斜面分装固体培养基三角烧瓶的分装第六页，共十二页，2022年，8月28日培养基的制备和灭菌

实验步骤原料称量溶解调节pH（加琼脂熔化）塞棉塞、包装（过滤澄清）

灭菌分装第七页，共十二页，2022年，8月28日培养基的制备和灭菌实验步骤之灭菌高压蒸汽灭菌灭菌条件：一般温度为121℃（压力1kg/cm2）下,维持15～30min。高压蒸汽灭菌原理是水的沸点随着压力的增加而升高。当水在灭菌锅中煮沸，产生蒸汽驱逐出锅内的空气后，随蒸汽的增加，锅内蒸汽压力也随之升高，故而水的沸点也就随着上升，从而获得高于100℃的温度，达到灭菌效果。注：使用高压蒸汽灭菌锅进行灭菌时，锅内的冷空气必须排除。第八页，共十二页，2022年，8月28日培养基的制备和灭菌高压蒸汽灭菌步骤1.放灭菌物件，加盖，旋紧螺丝，密闭灭菌锅内；2.加水到要求的刻度范围；3.加热，打开蒸汽阀，排尽锅内冷空气，然后关闭排气阀；4.当蒸汽压力上升到1kg/cm2时，稍微打开排气阀使少量蒸汽排出，减少加热，使锅内压力维持在1kg/cm2；5.维持30分钟后，切断加热源，稍微开大排气阀，缓慢排气，待压力降为零时，开锅稍微冷却后取出灭菌物品。第九页，共十二页，2022年，8月28日培养基的制备和灭菌高压蒸汽灭菌注意事项1.灭菌完毕后，用排气阀排气不能太猛，否则，压力骤降，导致锅内液体剧烈沸腾，打湿棉塞，容易造成染菌；2.容器内培养基液体装量不宜太多，以免液体沸腾打湿棉塞；3.瓶塞塞的不要太紧，不然会影响通气，瓶内空气排不出，达不到灭菌温度。第十页，共十二页，2022年，8月28日培养基的制备和灭菌注意事项1.原料称量中，快接近终点时，用左手轻轻拍打右手手腕，将少量药品振落，以免过量；2.成分中如含有磷酸盐和钙盐应分开溶解，否则会产生沉淀；3.待培养基冷却至室温时调节pH值。调节pH前要先测一下培养基的原始pH，缓慢滴加碱液，尽量避免回调；4.在加热融化琼脂过程中要不断搅拌，以防琼脂沉淀糊底烧焦；5.培养基成分含有淀粉时，应先将淀粉糊化。第十一页，共十二页，2022年，8月28日培养基的制备和灭菌思考题用高压蒸汽灭菌，如何才能达到较好的灭菌效果？在同样的条件下，为什么湿热灭菌的效果好于干热灭菌？高