初始污染菌检测

初始污染菌检测2023/3/141第一页，共十五页，2022年，8月28日参考标准《中华人民共和国药典》2005版附录微生物限度检查法ISO11737-1:2006Sterilizationofmedicaldevices–Microbiologicalmethods–Part1:DeterminationofapopulationofmicroorganismsonproductsGB/T19973.1/ISO11737-1:1995医疗器械的灭菌微生物方法第一部分：产品上微生物总数的估计GB15980-1995一次性使用医疗用品卫生标准2023/3/142第二页，共十五页，2022年，8月28日检测环境及检验量应在环境洁净度10000级下的局部洁净度100级的单向空气区域内进行一般供试品的检验量为3~10个独立包装的同批次供试品。（见ISO11737-1:2006A8.1）2023/3/143第三页，共十五页，2022年，8月28日实验材料及设备营养琼脂培养基、pH7.0氯化钠-蛋白胨缓冲液滤器、微孔滤膜（孔径0.45微米，直径50mm）、量筒、剪刀、镊子、培养皿过滤装置、电子天平、压力蒸汽灭菌器、生化培养箱等2023/3/144第四页，共十五页，2022年，8月28日主要步骤采样供试液制备培养菌落计数2023/3/145第五页，共十五页，2022年，8月28日供试液的制备用？ml氯化钠-蛋白胨缓冲液浸提？小时（包括最内层包装的内壁）-所需供试液的用量和浸提时间需验证处理方法：振动、冲洗、擦拭法、袋蠕动、超声、涡旋混合、搅拌2023/3/146第六页，共十五页，2022年，8月28日举例—振动小型医疗器械可以投入无菌的自封袋中，加入缓冲液充分振动。另外，用缓冲液冲洗内包装袋的内壁。并与产品缓冲液相混。2023/3/147第七页，共十五页，2022年，8月28日梯度稀释1ml1ml1ml1ml1ml1ml1ml1ml供试液9mlNacl9mlNacl1:10 1:100 1:1000 2023/3/148第八页，共十五页，2022年，8月28日转至培养基膜过滤法—适用于微生物浓度较低的悬液平板倾注—适用于微生物浓度较高的悬液平板涂布—适用于微生物浓度较高的悬液螺旋涂布2023/3/149第九页，共十五页，2022年，8月28日薄膜过滤法2023/3/1410第十页，共十五页，2022年，8月28日培养药典中的培养条件：细菌30-35℃48h霉菌、酵母菌23-28℃72h必要时，可适当延长培养时间至5-7天2023/3/1411第十一页，共十五页，2022年，8月28日菌落计数计数方法：将平板置菌落计数器或从平板的背面直接以肉眼用标记笔点计，以投射光衬以暗色背景，仔细观察，计数。必要时可以借助于放大镜、菌落计数器。菌落特征：

⑴形态特征：常为白色、灰白色或灰色，亦有淡褐色、淡黄色（如果培养基中加入0.1%TTC(氯化三苯基四氮唑试剂)，菌落为红色）⑵边缘整齐或不整齐，表面有光滑、粗糙，皱褶、突起或扁平。⑶大小差异很大。2023/3/1412第十二页，共十五页，2022年，8月28日计数方法的验证—回收率验证试验至少应进行3次独立的平行试验，并分别计算各试验菌每次试验的回收率。A试验组供试液+试验菌（50~100cfu）B菌液组试验菌（50~100cfu）C供试品对照组D缓冲液对照组缓冲液+试验菌（50~100cfu）(A-C)/B>70%D/B>70%2023/3/1413第十三页，共十五页，2022年，8月28日菌落计数报告规则—平板法选取细菌、酵母菌平均菌落数在30～300之间、霉菌平均菌落数在30~100之间的稀释级作为报告菌落数的依据。1）如只有1个稀释级平均菌落数符合上述规定，则将稀释级的菌落数乘以稀释倍数报告。2）如有两个相邻稀释级的平均菌落数在30～300之间，则先计算两稀释级菌落数的比值。高稀释级的平均平板菌落数×稀释倍数比值=————————————————————低稀释级的平均平板菌落数×稀释倍数当比值≤2时，则以2个稀释级的平均菌落数均值报告；当比值>2但不超过5时，则以低稀释级的平均菌落数乘以稀释倍数报告；当比值大于5，或高稀释级的菌落数大于或等于低稀释级的菌落数等异常情况时，应查明原因再进行检查，必要时，应进行方法的重新验证。3）如各稀释级平均菌落数均在300以上，则按最高平均菌落数乘以稀释倍数报告；如各稀释级平均菌落数均在30以下，则按最低平均菌落数乘以稀释倍数报告。4）如各稀释级的平板均无菌落生长，或仅最低稀释级的平板有菌落生长，但平均菌落数小于1时，以＜1乘以最低稀释倍数的值报告菌数2023/3/1414第十四页，共十五页，2022年，8月28日菌落计数报告规则—