微生物结核分枝杆菌

分枝杆菌属2023/3/8结核分枝杆菌1

李红玉分枝杆菌(Mycobacterium)

一般特性

一类直或微弯曲的杆菌，有分枝生长趋势，

可呈丝状或菌丝样生长。细胞壁含大量脂质（分枝菌酸）。耐酸，抗酸染色阳性。

无鞭毛、无芽胞，不产生毒素和侵袭酶类，

引起疾病呈慢性并伴有肉芽肿。自然界分布广且多为致病菌。对氧和营养要求高，生长慢。2023/3/82结核分枝杆菌分枝杆菌(Mycobacterium)

放线菌目，分枝杆菌科，分枝杆菌属有150多种，包括寄生菌、腐生菌、中间型。

国际分枝杆菌分类研究组（IWGMT)分三类：

缓慢生长菌、快速生长、不生长Runyon按细菌产色素和生长速度：Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ群

2023/3/83结核分枝杆菌结核分枝杆菌一、分类结核分枝杆菌，简称结核杆菌（TB，tuberclebacilli

）包括人结核分枝杆菌（M.tuberculosis）牛分枝杆(M.bovis)

非洲分枝杆菌(M.africanum)坎纳分枝杆菌(M.canettii)

田鼠分枝杆菌(M.microti)2023/3/84结核分枝杆菌结核分枝杆菌二、生物学特性

1、形态及染色:TB菌细长略弯曲，有时可见分枝，呈单、成堆或成束排列，无鞭毛、无芽胞，有荚膜。可出现多性，在陈旧的病灶和培养物中，形态常不典型，可呈颗粒状，串球状，短棒状，长丝形等。

TB菌革兰染色阳性萋～尼氏抗酸性染色法染色，菌体染成红色荧光染料金胺O染色，在荧光下菌体呈橘黄色。2023/3/8结核分枝杆菌52023/3/8结核分枝杆菌6抗酸性染色2023/3/87结核分枝杆菌荧光染料金胺O染色结核分枝杆菌二、生物学特性

2、培养特性营养要求高，生长缓慢，酸性环境初次培养常用罗氏（Lowenstein-Jensen）培养基，10－30天可见菌落生长菌落呈颗粒、结节或菜花状，乳白色或米黄色，不透明液体培养基中细菌浮于液面

有毒株可呈索状生长（吐温干扰）2023/3/8结核分枝杆菌83、生化反应：本菌生化不活泼

糖类发酵试验（－）触酶试验（+）热触酶试验（－）烟酸和硝酸盐试验（+）耐噻吩－2－羧酸酰肼（牛型则相反）中性红试验（+）：有毒株。2023/3/89结核分枝杆菌结核分枝杆菌与非结核分枝杆菌鉴别试验结核分枝杆菌变异性

TB菌易发生形态、菌落、最适生长温度、毒力和耐药性的变异。毒力变异：牛型结核杆菌经13年230代培养，制成卡介苗（减毒活菌苗），广泛用于预防接种。L型变异：结核杆菌经青霉素、环丝氨酸、溶菌酶、异烟肼作用变成L型结核菌。耐药性变异：MDRTB2023/3/810结核分枝杆菌生物学特性－

抵抗力耐干燥：粘附在尘埃上保持传染性8－10天，在干燥的痰液中可存活6－8个月。耐酸碱：3％盐酸、6％硫酸、4％氢氧化钠作用30分钟不受影响（酸碱中和处理严重污染的标本材，杀死杂菌和消化粘稠物质，提高检出率）耐一般消毒剂：对1：13000的孔雀绿有抵抗力耐一般的抗菌素：对青霉素等抗菌素耐药2023/3/811结核分枝杆菌四耐生物学特性

－抵抗力怕湿热：液体中62－63℃15-30分钟或煮沸

怕紫外线：直接日光照射2-3小时即被杀灭怕酒精、石炭酸、来苏儿怕抗痨药2023/3/812结核分枝杆菌四怕三、临床意义

TB菌引起结核病。对人类致病的有人型分枝杆菌牛型结核杆菌非洲分枝杆菌

2023/3/813结核分枝杆菌结核分枝杆菌发病率最高结核分枝杆菌所致疾病最常见肺结核（pulmonarytuberculosis).

通过呼吸道、消化道和破损的皮肤粘膜进入机体，侵犯多种组织器官，引起相应器官。可分原发感染和继发感染。2023/3/814结核分枝杆菌结核分枝杆菌免疫性

TB菌的感染率很高，发病率却较低，这表明人体感染结核杆菌可获得一定的抗结核免疫力，这种免疫称为有菌免疫或传染性免疫。

2023/3/815结核分枝杆菌原发性感染：

初次感染在肺内形成病灶结核病的流行情况2023/3/8结核分枝杆菌16

全球结核病疫情现状感染人数约为20亿。发病890万例，发病率为141/10万，其中390万为涂阳病人（43%报告到WHO）。结核病发病率每年增加1%，估计患病人数为1550万例（患病率为246/10万，）其中包括HIV+TB38万例，死于结核病为180万例，结核死亡率为29/10万，其中包括HIV+TB27万例。现状

由于HIV/AIDS流行、人口流动、耐药结核菌的增加，结核菌发病率开始上升。现全球有20亿结核菌感染者，每年新增病例850万，死亡达300人。1993年WHO宣布结核病紧急状态，这在WHO历史上尚属首次。

1994年出台抗结核耐药全球计划（90多个国家）。我国是结核病负担最重的国家之一，仅次于印度，居第二位。5.5亿人感染结核菌，500万结核病患者，其中开放性肺结核病人150万。结核病是传染性疾病中第一号杀手。

2023/3/817结核分枝杆菌我国结核病的疫情现状

我国是结核病负担最重的国家之一，仅次于印度，居第二位。5.5亿人感染结核菌，500万结核病患者，其中开放性肺结核病人150万。结核病是传染性疾病中第一号杀手。

2001-2008年全国共登记活动性肺结核病人642万，其中传染性肺结核病人330万发病为当选全球第二全国传染病发病和死亡第一广州地区：农村地区疫情明显高于城镇男性患病率197.4/10万，女性110.3/10万性别比1.8：12023/3/818结核分枝杆菌耐结核病的流行情况耐多药结核(multi-drugresistance,MDR-TB):

结核分枝菌至少对异烟肼，利福平同时耐药严重耐多药结核(Extensivelydrug-resistance,XDR-TB):

对异烟肼，利福平耐药，同时对任何氟喹诺酮类药物耐药，以及至少对1种二线抗结核注射剂（卷曲霉素、卡那霉素、阿米卡星）耐药XDR-TB已被认为是对公共卫生和结核病控制的严重威胁

2023/3/819结核分枝杆菌结核病耐药情况WHO/UATLD中国初治：至少对1种抗活10.2%16.0%

结核药物耐药MDR-TB

1.15%7.6%复治：至少对1种抗18.4%30.0%

结核药物耐药

MDR-TB7.0%17.1%

WHO和美国CDC的一项研究表明:16个国家2000-2004年间收集的17690例菌株中，20%为MDR-TB。2023/3/820结核分枝杆菌脂质：索状因子

磷脂蜡质D

硫酸脑苷脂蛋白质荚膜（多糖）2023/3/821结核分枝杆菌致病因素致病因素脂质索状因子（cordfactor）：是分枝菌酸与海藻糖结合的一种糖脂。使结核分枝杆菌在液体培养基相互粘连平行排列呈索状，破坏线粒体膜，影响细胞呼吸，抑制白细胞游走和引起慢性肉芽肿。2023/3/822结核分枝杆菌致病因素

脂质磷脂：促进单核细胞增生，引起结核结节、干酪样坏死蜡质D：是一种肽糖脂与分枝菌酸的复合物，作为佐剂，激发机体产生迟发性变态反应硫酸脑苷脂：抑制吞噬细胞中吞噬体与溶酶体的融合，使结核杆菌在吞噬细胞中长期存在2023/3/823结核分枝杆菌

蛋白质结核菌素：诱发机体产生抗体，但无保护作用，与蜡质D一起注入体内引起变态反应。分枝杆菌生长素（mycobic-tin）：

将环境中的铁转运到菌体内与宿主机体竞争铁。

荚膜

主要为多糖（致病作用不清），少量脂质和蛋白质。粘附和入侵分解物质提供营养防止有害物质入侵2023/3/824结核分枝杆菌四、微生物学检验临床标本涂片检查分离培养核酸检测抗体检测直接涂片集菌涂片处理标本或无污染标本染色液体培养基固体培养基动物试验

（罗氏或米氏）抗酸..金胺为O..

37℃，涂片镜检仪器培养

＜7天生长＞7天生长快速生长菌慢生长菌菌种鉴定抗酸染色菌落特点鉴定试验药敏试验2023/3/825结核分枝杆菌微生物学检查是结核的确诊试验。生化反应不发酵糖类，产生触酶人型结核分枝杆菌：合成烟酸还原硝酸盐耐受噻吩-2-羧酸酰肼中性红试验阳性（人、牛型有毒株）2023/3/826结核分枝杆菌2023/3/827结核分枝杆菌2023/3/828结核分枝杆菌罗氏培养基荧光金胺染色抗酸染色2023/3/829结核分枝杆菌菜花状菌落形态2023/3/8结核分枝杆菌30标本采集感染部位不同，取不同的标本，宜用能抑制污染菌的方法常见标本：痰、尿、胸腹水等检查方法1.显微镜检查

1）直接涂片：用萋－尼氏法染色，若镜检找到抗酸性杆菌，通常应报告：“查到抗酸性杆菌”，需进一步分离培养鉴定。

2）浓缩集菌涂片：如标本中菌量少，杂菌和杂质多时，用离心沉淀法将菌浓缩聚集，再取沉淀物涂片作抗酸染色检查

2023/3/831结核分枝杆菌分离培养

TB菌接种前处理－液化和处杂培养基选择仪器培养鉴定1.染色性2.菌落特征3.生长速度4.色素产生5.生化试验2023/3/832结核分枝杆菌免疫学检测

1.结核菌素试验：迟发型超敏反应。

2.全血干扰素测定

3.抗原、抗体检测检测PPDIgG辅助诊断。目前血清抗阿拉伯糖甘露糖脂IgG抗体是一种新的较好的诊断结核病的指标。活动性结核标志物（ATM）检测。核酸检测

快速诊断－－PCR-RFLP、PCR-SSCP、PCR-核酸探针、PCR-核酸测序、多重PCR、双重复插入序列PCR等。色谱分析技术测分枝菌酸2023/3/833结核分枝杆菌非结核分枝杆菌（150多种）

指结核分枝杆菌复合群和麻风分枝杆菌以外的分枝杆菌，由于在染色反应上具有抗酸性双称为非典型分枝杆菌。

1、光产色分枝杆菌（RunyonⅠ群）

2、暗产色分枝杆菌（RunyonⅡ群）

3、不产色分枝杆菌（RunyonⅢ群）

4、迅速生长分枝杆菌（RunyonⅣ群）2023/3/834结核分枝杆菌选择性培养基：含对硝基苯甲酸的PNB培养基含氯化羟胺HA培养基非结核分枝杆菌生长麻风分枝杆菌(M.leprae)麻风病的病原体，为抗酸杆菌，但较结核分枝杆菌短、粗，呈束状或团状排列。麻风细胞三种病型：瘤型、结核样型、界线类综合征2023/3/836结核分枝杆菌2023/3/837结核分枝杆菌抗酸染色2023/3/838结核分枝杆菌诺卡菌(Nocardia)

属放线菌科共9种:

星形诺卡菌(N.asteroides)

短链诺卡菌(N.brevicatena)

鼻疽诺卡菌(N.farcinica)

肉色诺卡菌(N.carnea)

巴西诺卡菌(N.bradiliensis)

越橘诺卡菌(N.vaccinii)

豚鼠耳炎诺卡菌(N.otitidiscaviarun)

南非诺卡菌(N.transvalensis)

苦味诺卡菌(N.amarae)2023/3/839结核分枝杆菌微生物学特性：1.革兰阳性杆菌，着色不均匀,

形态与放线菌属相似

2.部分诺卡菌具有弱抗酸性，抗酸染色可阴可阳,用1%盐酸乙醇延长脱色时间即可变为抗酸阴性，据此可与结核分枝杆菌相鉴别

3.专性需氧菌

4.营养要求不高，在普通平板上或沙氏培养基上37℃可缓慢生长,一周左右长出可见菌落，菌落表面有皱折,颗粒状,产生不同的色素.2023/3/841结核分枝杆菌2023/3/842结核分枝杆菌腐物寄生菌，广泛存在于土壤中，引起外源性感染

常见的致病性诺卡菌星形诺卡菌巴西诺卡菌星形诺卡菌主要引起免疫力低下者的化脓性感染

1.

肺部感染：

引起肺炎、肺脓肿，慢性者类似肺结核或肺真菌病

2.中枢神经系统感染：

通过血行播散，引起脑膜炎与脑脓肿

3.皮肤创伤感染：

侵入皮下组织引起慢性化脓性肉芽肿与瘘管形成

4.亦可引起足分枝菌病巴西诺卡菌可侵入皮下组织引起慢性化脓性肉芽肿，表现为肿胀、脓肿及多发性瘘管。感染好发于腿部和足，称足分枝菌病

2023/3/846结核分枝杆菌KOH涂片见边缘有大量菌丝的颗粒革兰染色2023/3/847结核分枝杆菌诺卡菌感染所致的皮肤瘘管微生物学检查法1.肉眼观察：在脓液、痰等标本中黄色或黑色

颗粒状的诺卡菌菌落

2.显微镜检查：将标本制成涂片或压片，革兰

染色，显微镜下观察革兰阳性分枝菌丝

3.分离培养与鉴定：将标本接种于沙保培养基及血平板上，在30℃、37℃或45℃条件下分离

培养，可疑菌落作涂片染色镜检预防：诺卡菌的感染无特异性预防方法治疗：

对脓肿和瘘管等手术清创

使用抗生素或磺胺类药物治疗，一般治疗时间不少于6周放线菌(Actinomyces)

原核细胞型微生物丝状、呈分支状生长广泛分布于自然界种类繁多，有53个属

绝大多数不致病是抗生素的主要产生菌绝大多数抗生素由放线菌产生用来生产纤维素、酶、维生素具有固氮作用，用于生产生物菌肥少数寄生型放线菌可引起动植物病害有些放线菌能破坏棉毛织品和纸张

2023/3/852结核分枝杆菌放线菌(Actinomyces)放线菌是一类主要呈菌丝状生长和经孢子繁殖的陆生性较强的原核微生物，革兰染色阳性，无动力是介于细菌和真菌之间的单细胞微生物，大部分腐生菌，少数为寄生菌。其菌落中的菌丝常从一个中心向四周辐射生长并由此得名。2023/3/853结核分枝杆菌引起人放线菌病的放线菌共5种:衣氏放线菌(A.israelii)内氏放线菌(A.naeslundii)粘液放线菌(A.viscous)龋齿放线菌(A.odontolyticus))丙酸蛛网放线菌(A.rachniapropionica)2023/3/854结核分枝杆菌

放线菌正常寄居在口腔、上呼吸道、胃肠道和泌尿生殖道等与外界相通的体腔中，为人体的正常菌群。当机体抵抗力下降，口腔卫生不良、拔牙或口腔粘膜受损时，可致内源性感染，引起放线菌病。

放线菌病的主要特征

放线菌病是一种软组织的化脓性炎症多呈慢性肉芽肿，常伴有多发性瘘管形

成，脓液中可见特征性的硫磺样颗粒

可引起不同器官和组织感染临床类型:

面颈部放线菌病：

大多近期有口腔炎、拔牙史或下颌骨骨折史临床表现为后颈面部肿胀，不断产生新结节、多发性脓肿和瘘管形成

脑膜炎和脑脓肿

肺部感染：症状和体征酷似肺结核

腹部感染：

常能触及腹部包块与腹壁粘连，出现便血和排便困难，常疑为结肠癌

盆腔感染：多继发于腹部感染

原发性皮肤放线菌病：

常由外伤或昆虫叮咬所致，先出现皮下结节，然后结节软化、破溃形成窦道或瘘管

龋齿和牙周炎：与内氏和粘液放线菌感染有关微生物学特性：

革兰阳性，丝状，常形成分枝状无隔菌丝无芽胞、无荚膜、无鞭毛厌氧或微需氧，在血平板上呈灰白色或黄色粗糙不均一的菌落.在脓标本中可见硫磺样颗粒(镜下菊花状).培养较困难，初次分离加5%CO2可促进其生长生长缓慢，4～6天长出灰白色、粗糙的微小菌落(在形态上具有分枝杆菌菌丝，菌落形态与霉菌相似，以孢子进行繁殖）

病灶组织和瘘管的脓汁中，肉眼可见硫磺样颗粒硫磺样颗粒压片，在镜下可见放射状排列的菌丝，形似菊花状硫磺样颗粒的镜下形态2023/3/861结核分枝杆菌2023/3/862结核分枝杆菌2023/3/863结核分枝杆菌微生物学检查法肉眼观察：在脓液、痰液和组织切片中寻找硫磺样颗粒显微镜