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PCR技术目录/CONTENTS1PCR技术概念PCR技术的应用3PCR反应结果分析42PCR反应原理什么是PCR技术？PCR反应如何进行？PCR技术有什么优点？01PCR技术概念PCR技术概念聚合酶链式反应（polymerasechainreaeton），是通过模拟体内DNA复制的方式，在体外选择性地将DNA某个特殊区域扩增出来的技术。具体的说就是在体外给予适宜的条件，经过一系列反应过程，实现某一特定DNA序列的体外扩增。PCR技术02PCR反应原理PCR反应原理PCR是在体外模拟自然DNA复制过程的核酸扩增技术，它以待扩增的两条DNA链为模板，利用两个人工合成的寡核苷酸引物介导，分别于靶DNA序列的两端与两条模板链3端互补的特性，经过DNA模板变性、退火、延伸三个步骤的若干次循环就可在短时内把DNA扩增数百万倍，三个步骤的转换都是通过温度的改变来实现的，故又称该循环过程为热循环。PCR反应原理DNA热变性双链DNA的结构是靠氢链来维持的，以加热或碱性作用可以使DNA螺旋的氢键断裂，双链解离，形成单链DNA而游离于反应液中。DNA从自然状态转变为变性状态的过程称为变性。PCR高温变性温度在85-95℃，加热时间为15-60s。PCR反应原理DNA退火解除变性条件之后，变性的单链DNA可以重新复原为双链的自然状态的DNA，其原有物性和活性复原，这个过程称为DNA退火。退火的温度在30-60℃，时间为30-60s。PCR反应原理引物延伸在60-80℃最适温度中，在DNA聚合酶的催化下，四种dNTD（三磷酸脱氧核苷酸）会迅速延着DNA复制的固定起点，以旧链为模板，由3末端向5末端伸延，按照模板链上的序列，合成一条新的DNA链，其序列与模板序列互补，其扩增的长度由引物和延伸的时间来限定。延伸的时间一般为1-10min。PCR反应原理模板DNA经过高温变性、低温退火和中温延伸三个阶段的循环过程被确定为PCR的一个轮次循环，每循环一次，模板DNA的拷贝数加倍，整个PCR过程一般要25-30个轮次循环。扩增的倍数可用公式(1+x)n表示（x为扩增效率，n为循环次数）。03PCR反应结果分析PCR反应结果分析琼脂糖凝胶电泳根据两条引物间的距离，预计PCR产物的长短通过电泳可判断扩增产物的大小。电泳时以适当大小的DNA分子作为分子质量标准，电泳后，用溴化乙锭染色20min，然后用无离子水漂洗两次，每次15min，于UV灯（紫外灯）下观察结果并拍照。PCR反应结果分析限制性内切酶片段分析用限制性内切酶酶解PCR扩增产物，发现有特定的限制性内切酶片段，则说明扩增的PCR产物是特异的，反之表明PCR产物在限制性位点发生了碱基突变。PCR反应结果分析核酸杂交首先将扩增的DNA固定到尼龙膜或硝酸纤维素滤膜上。再用放射性或非放射性标记物标记的探针杂交。阳性表明PCR产物是特异的。05PCR技术的应用PCR技术的应用PCR技术不仅具有简便、快速、敏感性和特异性高的特点，而且结果分析简单，对样品要求不高，无论新鲜组织或陈旧组织、

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