实验金黄色葡萄球菌分离和鉴定

时间：二O二一年七月二十九日实验题目金黄色葡萄球菌的分离和判定之邯郸勺丸创作时间：二O二一年七月二十九日一、实验目的金黄色葡萄球菌在自然界中无处不在,空气、水、尘埃及人和动物的排泄物中都可找到.因此,食品受其污染的时机好多.最近几年来,美国疾病控制中心陈说,由金黄色葡萄球菌惹起的传染占第二位,仅次于大肠杆菌.金黄色葡萄球菌肠毒素是个世界性卫生难题,在美国由金黄色葡萄球菌肠毒素惹起的食品中毒,占整个细菌性食品中毒的33%,加拿大则更多,占到45%,我国每年产生的此类中毒事件也非常多.为控制金黄色葡萄球菌的对人的危害,我们要分离出它们并研究.二、实验原理典型的金黄色葡萄球菌为球型,直径0.8um左右,显微镜下摆列成葡萄串状.金黄色葡萄球菌无芽胞、鞭毛,大部分无荚膜,革兰氏染色阳性.金黄色葡萄球菌营养要求不高,在一般培育基上生长良好,需氧或兼性厌氧,最适生长温度37°C,最适生长pH7.4,乏味环境下可存活数周.平板上菌落厚、有光彩、圆形突出,直径1—2mm.血平板菌落四周形成透明的溶血环.金黄色葡萄球菌有高度的耐盐性,可在10—15%NaCl肉汤中生长.可分化葡萄糖、麦芽糖、乳糖、蔗糖,产酸不产气.甲基红反应阳性,V—P反应弱阳性.很多菌株可分化精氨酸,水解尿素,复原硝酸盐,液化明胶.金黄色葡萄球菌具时间：二O二一年七月二十九日时间：二O二一年七月二十九日有较强的抵挡力,对磺胺类药物敏理性低,但对青霉素、红霉素等高度敏感.对碱性染料敏感,十万分之一的龙胆紫液即可克制其生长.三、实验资料和设施培育基牛肉膏蛋白胨培育基（13%NaCl）：牛肉膏5g,蛋白胨10g,氯化钠130g,琼脂15g,蒸馏水1000ml,121℃灭菌20min后倒平板.肉汤培育基：酵母膏5g,蛋白胨10g,氯化钠10g,蒸馏水1000ml,121℃灭菌20min.甲苯胺兰-DNA平板试剂磺胺类药物、革兰氏染液仪器和设施显微镜、超净任务台、水浴锅、培育皿、锥形瓶、移液器、灭菌锅、培育箱、试管、载玻片、接菌环.四、实验方法金黄色葡萄球菌的分离：1.称取5g土样,在无菌条件下放入灭菌的锥形瓶中,加入50ml蒸馏水,再加入200ul磺胺类药物,振荡10min,使土样充分混匀.利用金黄色葡萄球菌对磺胺类药物敏理性低的特征,杀死其余细菌.从上述锥形瓶中取5ml上清液放入一只洁净的试管中,30℃,200rpm,24h.取培育好的菌液,按梯度稀释法稀释土壤悬液,挨次制备成时间：二O二一年七月二十九日时间：二O二一年七月二十九日100、1000、10000、100000倍悬液后,鉴别取200ul涂布于牛肉膏蛋白胨培育基平板上,置于37℃培育箱中培育24h.利用高盐培育基克制其余细菌的生长,进而分离金黄色葡萄球菌.金黄色葡萄球菌的判定：菌落形态：菌落较小,较湿,较透明,边缘齐整,隆起.染色不雅察：从平板上挑取可疑性菌落进行革兰氏染色,金黄色葡萄球菌为革兰氏阳性,显微镜下呈葡萄状摆列、无芽孢、荚膜,直径0.5—1um.血浆凝结酶试验：汲取0.5mL兔血浆与0.5mL金黄色葡萄球菌试液浸液肉汤24小时培育物充分混匀,置36±1°C培育,每隔半小时不雅察一次,连续不雅察6小时,出现凝结,马上小试管倾斜或倒置时,内容物不流动,判为阳性.同时做阴阳性比较.4.耐热核酸酶试验：将24小时肉汤培育物沸水浴办理15min,用接种环划线刺种于甲苯胺兰-DNA