基因毒性杂质

基因毒性杂质（GenotoxicImpurity)基因毒性杂质第1页欧盟公布药品评定十大缺点中，Top4为基因毒性杂质。要求对杂质潜在基因毒性杂质进行详细讨论，并作为总体杂质讨论一部分。常见基因毒性物质：苯并芘、黄曲霉素、亚硝胺化疗药品不良反应是由化疗药品对正常细胞基因毒性所致，如顺铂、卡铂、氟尿嘧啶等氨基糖甙类抗生素：大剂量、长久使用会引发耳毒性；尤其敏感患者，仅使用一次或短期使用，就出现了听力受损。研究表明，这些患者一个基因上有一点（mtl555G）与他人不一样，这使他们对氨基糖甙类药品耳毒性易感性大大增加。基因毒性杂质第2页目录基因毒性杂质定义及风险可接收风险摄入量（TTC阈值）EMA对基因毒性杂质指导要求判断是否为基因毒性杂质决议树Q&A基因毒性杂质第3页参考法规EMA：年率先颁布《基因毒性杂质程度指南》，于年1月1日证实实施。该指南为限制活性物质中基因毒性杂质提供了处理问题框架和详细做法ICH：年，Q3A(R2)step4vision“新原料药中杂质”FDA：年12月，Guidanceforindustry-GenotoxicandcarcinogenicimpuritiesinDrugsubstancesandproducts:Recommendedapproaches.介绍了欧盟和ICH控制方法。原料药和制剂中基因毒性杂质生成预防方法；上市申请和临床研究申请可接收程度。基因毒性杂质第4页定义基因毒性杂质：是指能直接或间接损伤细胞DNA，产生致突变和致癌作用物质。惯用缩写

1、PGLs(potentiallygenotoxicimpurities有潜在基因毒性杂质)2、GTLs(genotoxicimpurities基因毒性杂质)风险：（体内）基因毒性物质在任何摄入量水平上对DNA都有潜在破坏性，这种破坏可能造成肿瘤产生。但不能说“不存在显著阀值，或是任何摄入水平都含有致癌风险”。新药合成、原料纯化、储存运输（与包装物接触）等过程都可能产生基因毒性杂质基因毒性杂质第5页可接收风险摄入量对于那些能够与DNA进行反应化合物，因为在较低剂量时机体本身保护机制能够有效运行，按照摄入量由高到低所造成影响进行线性推断是很困难。当前，对于一个给定诱变剂，极难从试验方面证实它基因毒性存在一个阈值。尤其是对于一些化合物，它们可与非DNA靶点进行反应，或一些潜在突变剂，在与关键靶点结合之前就失去了毒性。因为缺乏支持基因毒性阈值存在有力证据，而使得我们极难界定一个安全服用量。基因毒性杂质第6页可接收风险摄入量是否能够做个这么试验：剂量从低到高，对基因毒性杂质影响性进行线性推断？引入一个新观点：确定一个可接收其风险摄入量生物系统纠错功效使试验不具备可行性。基因毒性杂质第7页TTC可接收其风险摄入量普通被定义为ThresholdofToxicologicalConcern(TTC)。详细含义为：1.5μg/天TTC值。相当于人天天摄入1.5μg基因毒性杂质，被认为对于大多数药品来说是能够接收风险（使人一生致癌风险小于100000分之一，现实生活中人一生得癌症概率四分之一）。按照这个阈值，能够依据预期每日摄入量计算出活性药品中可接收杂质水平。TTC是一个风险管理工具，它使用是概率方法。所以TTC不能被了解为绝对无风险保障。基因毒性杂质第8页TTC意思是：假如有一个基因毒性杂质，而且我们对它毒性大小不了解，假如它每日摄入量低于TTC值，那么，该基因毒性杂质致癌风险将不会高于100000分之一概率。一些特定情况，TTC值高于1.5μg/day也是能够接收。比如药品短期接触，即治疗一些申明预期在5年以下一些严重疾病，或者这种杂质是一个已知物质，人类在其它方式上对它摄入量会更高（比如在食品上）。这个需要依据实际情况再进行推算。基因毒性杂质第9页EMA对基因毒性杂质分类EMA对基因毒性杂质指导标准适合用于上市申请和临床研究。一、有足够试验数据阈值对于有足够（试验性）数据来支持阈值界定基因毒性杂质：可参考“Q3CNoteforguidanceonimpurities:ResidualSolvents”中2级溶剂要求，计算出了一个“允许日摄入量（PDE—permitteddailyexposure）”基因毒性杂质第10页基因毒性杂质第11页二、无足够试验依据阈值没有足够（试验性）证据来支持阈值界定基因毒性杂质可接收剂量评价应该包含药学和毒理学评价。普通来说，假如不可能防止毒性，那么药学评价办法应该以尽可能低控制水平为指导。基因毒性杂质第12页药学研究应依据现有处方和生产技术，提供生产方法合理性。申请人应该指明包括到全部含有基因毒性或有致癌性化学物质，如所用试剂、中间体、副产品等。实际生产中应尽可能防止使用该类物质。基因毒性杂质第13页假如在合成路线、起始物料方面没有更加好选择，则需要提供一个正当理由。即物质中能引发基因毒性和致癌性结构部分在化学合成路线上是不可防止。加入基因毒性杂质被认为是不可防止，那么应该采取技术伎俩尽可能降低基因毒性杂质在产品中含量，使其符合安全需要或使其降低到一个合理水平。对于活性中间体、反应物、以及其它化合物化学稳定性都应进行评定。应该有合理分析方法去检测和量化这些杂质残留量。基因毒性杂质第14页毒理学研究为一个不存在阀值基因毒性致癌物定义一个安全摄入量水平（零风险观点）是不可能，而且从活性药品成份中完全除去基因毒性杂质经常是极难做到。这么就要求我们建立一个可接收风险水平，比如对一个低于可忽略风险每日摄入量进行评价。不过这些方法都需要有足够长久致癌性研究数据。基因毒性杂质第15页TTC用于计算未做研究化学物质接触量，这些化学物质不会有显著致癌性或者其它毒性。TTC理论不能够应用于那些毒性数据（长久研究）充分致癌物质，也不能够做高风险毒性物质风险评价。基因毒性杂质第16页用药时间与毒性杂质程度基因毒性杂质第17页含有多个基因毒性杂质评定EMA：结构不一样，单个杂质程度应小于1.5ug/day.

结构相同，总基因杂质程度定为1.5ug/day.FDA（和EMA类似）：单个杂质造成癌症风险机率应该小于100000分之一；有相同作用机制结构相同杂质，其含量总和应该参考TTC值进行评定。基因毒性杂质第18页判断是否为基因毒性杂质经过Carcinogenicpotencydatabase(CPDB)数据库查询，数据库中现有1574种致癌物质列表。链接/chemnameindex.html，还可查询到关于基因毒性方面研究出版物。基因毒性杂质第19页基因毒性杂质第20页基因毒性杂质第21页判断是否为基因毒性杂质可经过文件、计算机毒理学进行评价；常经过MDL-QSAR,MC4PC,DerekforWindows软件来评价是否含有structuralalert，FDA、EMEA等官方机构也采取这类软件用来判断。基因毒性杂质第22页DerekforWindows数据库：能够预算某个化学药品对人类（或其它哺乳动物）是否含有毒性，在世界范围内已被许多制药企业，化学企业和学术研究机构所采取。可提供以下4种信息。在没有试验数据情况下，提供某个化学药品潜在毒性信息；建立最值得关注潜在有毒物质；提供降低药品毒性化学修饰方法提供毒性预测依据

基因毒性杂质第23页基因毒性杂质磺酸盐风险评定EMEA/44714/临床研究发觉甲磺酸酯DNA烷基化作用会造成诱变效应，其中甲磺酸甲酯和甲磺酸乙酯已经有这方面报导，所以有理由怀疑其它低分子量磺酸（如对甲苯磺酸）烷基酯可能也存在着类似毒性影响。尽管无数据表明这些酯对人毒性影响，然后依然有上述基因毒性物质以杂质形式存在于含磺酸酯类药品活性成份药品中潜在风险。基因毒性杂质第24页甲磺酸烷基酯，如甲磺酸甲酯（MMS）和甲磺酸乙酯（EMS），是甲磺酸与甲醇，乙醇，或其它低级醇形成酯。尤其是在以甲磺酸盐或甲磺酸酯形式存在药品活性成份中或其合成过程中用到了甲磺酸药品活性成份中，甲磺酸烷基酯会被视为潜在杂质。在以羟乙基磺酸盐，苯磺酸盐和对甲苯磺酸盐形式存在药品活性成份中也会发觉类似磺酸烷基酯或芳基酯污染。需说明出现这些污染风险。基因毒性杂质第25页

药品活性成份生产是否包括到在甲磺酸（或羟乙基磺酸，苯磺酸，对甲苯磺酸）或对应酰氯存在情况下，使用了低级脂肪酯，如甲醇，乙醇，正丙醇或异丙醇情况？假如是这种情况话，甲磺酸烷基酯或类似苯磺酯烷基酯和对甲苯磺酸烷基酯形成可能性是否已被降至最低？是否存在有效精制步骤？

设备（尤其是接触到磺酸试剂设备）清洗程序是否包括到低级脂肪醇使用？

是否有适宜质量标准和已验证分析方法能够证实药品活性成份中磺酸烷酯或磺酸芳基酯杂质处于TTC以下？基因毒性杂质第26页是否检验了起始物料，如甲磺酸盐（苯磺酸盐，对甲苯磺酸盐，羟乙基磺酸），中烷基磺酸酯或芳基磺酸酯杂质（如甲磺酸中EMS和MMS）及对应酰氯？是否有这些杂质适宜标准和验证过方法？当被磺酸酯或相关物质所污染了磺酸作为起始物料用于药品活性成份时，是否能确保药品活性成份中潜在基因毒性杂质不超出其TTC值？应该要考虑各种烷基或芳基取代磺酸酯杂质累加风险。基因毒性杂质第27页

如在药品活性成份生产最终一步合成步骤用到了磺酸衍生物，应将其纳入风险分析。

是否对回收溶剂中磺酸酯类杂质富集和残留进行了控制？

是否能排除以甲磺酸盐，羟乙基磺酸盐，对甲苯磺酸盐或苯磺酸盐形式存在药品活性成份，或其相关制剂，在储存过程中形成烷基或芳基磺酸酯？

是否能排除以甲磺酸盐，羟乙基磺酸盐，对甲苯磺酸盐或苯磺酸盐形式存在药品活性成份在制成最终制剂过程中形成烷基或芳基磺酸酯，如在制粒过程中使用了醇？是否有足够灵敏方法能够检测到制剂中（处于TTC水平）这些杂质？基因毒性杂质第28页基因毒性杂质卤代烃风险评定有数据表明氯乙烷、氯甲烷为基因毒性杂质，所以有理由怀疑其它低分子卤代烃类也有类似作用。在生产中应该对其进行对应控制。基因毒性杂质第29页在氨基物盐酸盐使用醇类溶剂精制时候，基本都会产生卤代烃。产生条件和温度、水分、浓度、时间等相关系。对于控制低级卤代烃方法能够参考控制甲磺酸酯相关提议。基因毒性杂质第30页判断是否为基因毒性杂质高基因毒性致癌物：N-nitroso(亚硝基)azoxy(氧化偶氮基)aflatoxin-likecompound(黄曲霉素类)它们不能用TTC值方法来进行评价。对这些种类物质进行风险评价需要特殊compound-specific毒性数据。可能在低于TTC值会有很强毒性。基因毒性杂质第31页序号基因毒性杂质名称杂质程度产品名称1保护基溴化物15ppm氯沙坦钾2邻氨基甲苯7.5ppm托拉塞米3间氨基甲苯7.5ppm托拉塞米4对氨基甲苯7.5ppm托拉塞米5邻硝基甲苯7.5ppm托拉塞米6叠氮酸10ppm坎地沙坦酯7叠氮酸10ppm缬沙坦8溴代异丙烷15ppm氯吡格雷氢溴酸盐9联苯溴化物3.4ppm缬沙坦10联苯溴化物四氮唑4ppm缬沙坦115-氰基苯酞25ppm西酞普兰氢溴酸盐125-氨基苯酞25ppm西酞普兰氢溴酸盐13硝基化合物25ppm西酞普兰氢溴酸盐14氨基化合物25ppm西酞普兰氢溴酸盐15硫脲30ppm盐酸吡格列酮16对氟硝基苯30ppm盐酸吡格列酮17硝基吡格30ppm盐酸吡格列酮基因毒性杂质第32页18酞嗪二酮0.04%RP-氯沙坦钾19联苯溴化物10ppmRP-氯沙坦钾20二甲海因0.05%RP-氯沙坦钾21保护基二溴物15ppmRP-氯沙坦钾22氯沙坦钾二氯物15ppmRP-氯沙坦钾23二溴二甲海因15ppm氯沙坦钾保护基溴化物24联苯溴化物10ppm氯沙坦钾25联苯溴化物四氮唑12ppm氯沙坦钾26游离肼10ppmRP-氯沙坦钾27叠氮酸15ppm氯沙坦钾28四丁基溴化铵25ppm盐酸帕罗西汀29叠氮酸10ppm厄贝沙坦30对甲苯磺酸异丙酯8ppm氯沙坦钾31溴离子229ppm艾他培南32对甲苯磺酸乙酯25ppm西酞普兰33氟苯15ppm西酞普兰34氯丙胺盐酸盐120ppm西酞普兰35对氟溴苯50ppm西酞普兰36甲磺酸乙酯75ppmS-西酞普兰基因毒性杂质第33页38N-甲基吡咯烷酮53ppm厄贝沙坦39N，N-二甲基苯胺2ppm奎硫平40对甲苯磺酸乙酯37.5ppm奎那普利41对甲苯磺酸乙酯150ppm雷米普利42对甲苯磺酸乙酯37.5ppm依那普利43异亚丙基丙酮100ppm罗匹尼罗44间氯苯胺15ppm氢氯噻嗪45甲磺酸甲酯2ppm依普洛沙坦甲磺酸盐46甲磺酸乙酯2ppm依普洛沙坦甲磺酸盐473-硝基-2-叔丁氧甲酰氨基苯甲酸乙酯47ppm坎地沙坦酯482-氰基-4-溴甲基联苯47ppm坎地沙坦酯492-[[(2-氰基联苯基)-4-基]甲基]氧基-3-硝基苯甲酸乙酯47ppm坎地沙坦酯503-硝基邻苯二甲酸47ppm坎地沙坦酯51邻苯二胺盐酸盐5ppm替米沙坦52邻氨硝基苯5ppm替米沙坦53邻氟苯胺5ppm替米沙坦54氯沙坦钾二氯代物15ppmRP-氯沙坦钾55保护基溴化物15ppmRP-氯沙坦钾基因毒性杂质第34页致癌警示结构基因毒性杂质第35页经过日服剂量和可控制杂质浓度来计算是否超出TTC值基因毒性杂质第36页基因毒性杂质第37页基因毒性杂质第38页Q&A假