绿原酸提取工艺研究,兽医硕士论文

绿原酸提取工艺研究,兽医硕士论文本篇论文目录导航：【第1部分】【第2部分】【第3部分】【第4部分】【第5部分】【第6部分】【第7部分】绿原酸提取工艺研究【第8部分】【第9部分】2.3绿原酸提取工艺研究2.3.1试验材料见附录表2.36，2.37。2.3.2试验方式方法2.3.2.1超声提取法工艺流程称取杜仲叶粉末若干份，每份0.5g，于20mL试管中，参加一定量30%乙醇溶液调节pH值室温避光浸泡1.5h，放入超声波洗涤器中在一定功率下超声提取一定时间后过滤、滤液离心，定容到10mL，取上清液250L，加水定容到10mL。4℃避光保存备用。2.3.2.2超声提取法单因素与正交试验设计上述提取流程中，在pH=4，40KHz功率下，提取时间60min，液固比为20的基础条件下，分别改变这四个因素进行单因素试验。详细因素水平如表2.13。正交试验因素水平设计，见表2.14。2.3.2.3微波提取法工艺流程称取杜仲叶粉末若干份，每份0.5g，于20mL试管中，参加一定量30%乙醇溶液调节pH值室温避光浸泡1.5h，放入微波炉中在一定火力下辐射一定时间后，参加30%乙醇溶液定容到10mL，过滤、滤液离心，冷却后再定容到10mL，取上清液250L，加水定溶至10mL。4℃避光保存备用。2.3.2.4微波提取法单因素与正交试验设计上述提取工艺流程中，在pH=4，微波火力为中火，微波辐射时间90s，液固比为20的基础条件下，分别改变这四个因素进行单因素试验，因素水平如表2.15。正交试验因素水平设计见表2.16。2.3.2.5酶法提取工艺流程称取杜仲叶粉末若干份，每份0.5g，于20mL试管中，参加一定量体积分数30%的乙醇溶液调节pH值，室温避光浸泡1.5h，参加一定量40℃活化10min的酶液，40℃水浴酶解反响一定时间后过滤、滤液离心。冷却后定容到10mL，取上清液250L，加水定容至10mL。4℃避光保存备用。2.3.2.6酶法提取单因素与正交试验设计上述提取工艺流程中，在pH=5，酶用量0.4%，酶解反响时间1h，液固比20的基础条件下，分别改变这四个因素进行单因素试验，详细因素水平如表2.17。正交试验因素水平设计见表2.18。2.3.2.7热浸提取法工艺流程称取杜仲叶粉末若干份，每份0.5g，于20mL试管中，参加一定量体积分数的30%乙醇溶液，调节pH值，室温避光浸泡1.5h，置于一定温度水浴锅中提取一定时间后过滤、滤液离心。冷却后定容到10mL，取上清液250L，加水定容至10mL。4℃避光保存备用。2.3.2.8热浸提取法单因素与正交试验设计根据上述提取工艺流程，在pH=4，提取温度70℃，提取时间0.5h，液固比为20的基础条件下。分别改变这四个因素，进行单因素试验，详细因素水平如表2.19。正交试验见表2.20。2.3.2.9四种工艺绿原酸提取液色谱图比拟通过对四种工艺最佳条件下绿原酸得率及提取液色谱图分析，确定绿原酸提取的最适工艺。2.3.3结果与分析2.3.3.1超声提取法单因素试验结果由图2.7可知，当溶剂PH值不断增大时，绿原酸得率呈先增大后减小趋势，PH=4时绿原酸得率最大为0.9008%。由图2.8可知，当超声频率不断增大时，绿原酸得率呈先增大后减小趋势，40KHz时时绿原酸得率最大为0.9020%。图2.9可知，绿原酸得率随超声处理时间延长，表现先增大后缓慢下降的趋势，在超声80min时绿原酸得率最大，为0.9013%。由图2.10可知，绿原酸得率随液料比的增大表现出先逐步上升后缓慢下降的趋势，当液料比为16时绿原酸得率最大，为0.9170%。2.3.3.2超声提取法正交试验结果由上表可知，超声功率40KHz，超声时间80min，料液体积质量比14，此时绿原酸得率最高为0.9032%。正交试验结果表示清楚，绿原酸超声提取试验中，各因素对绿原酸得率影响从大到小顺序为：超声功率(A)＞时间(B)＞液料比(C)，即超声功率对绿原酸得率影响最大。2.3.3.3微波提取法单因素试验结果由图2.11可知，随着微波火力的加大，绿原酸得率呈现先增大后减小趋势，中火时绿原酸得率最大为0.9174%。图2.12可知，当微波辐射时间不断延长，绿原酸得率表现先缓慢增大后快速下降的趋势，在辐射时间为90S时绿原酸得率最大，为0.9288%。由图2.13可知，绿原酸得率随液料比的增大表现出逐步上升的趋势，当液料比为16时上升趋势变得缓慢，此时绿原酸得率为0.9170%。2.3.3.4微波提取法正交试验结果由上表可知，微波火力为中火，辐射时间60s，液料体积质量比18，此时绿原酸得率最高为0.9313%。正交试验结果表示清楚各因素对绿原酸得率影响从大到小顺序为：微波火力(A)＞辐射时间(C)＞液料比(B)，即微波火力对绿原酸得率影响最大。2.3.3.5酶法提取单因素试验结果由图2.14可知，随着pH增大，绿原酸得率呈先增大后减小趋势，pH=5时绿原酸得率最大为0.9471%。图2.15可知，随酶用量增加绿原酸得率先增大，在酶用量0.4%以后绿原酸得率变化幅度微小，酶用量0.4%时绿原酸得率为0.9435%。由图2.16可知，绿原酸得率随酶解时延长表现先增大，后趋于平稳状态，酶解时间1.5h时绿原酸得率最大，为0.9358%。由图2.17可知，绿原酸得率随液料比的增大呈现先增大后缓慢降低的状态，液料比为16时绿原酸得率最大，为0.9374%。由图2.18结果，能够看出，当酶促反响处于不断升温时，绿原酸产率呈现先增大后降低的趋势，酶解温度为40℃时绿原酸得率最大，为0.9276%。2.3.3.6酶法提取正交试验结果由上表可知，酶解pH=4.5，酶解温度40℃，酶用量0.35%，此时绿原酸得率最高为0.9508%。正交试验结果表示清楚，酶解各因素对绿原酸得率影响从大到小的顺序为：酶解pH(A)＞反响温度(B)＞酶用量(C)，即酶解pH值对绿原酸得率影响最大。2.3.3.7热浸法提取单因素试验结果由图2.19可知，随着浸出环境不断升温，绿原酸得率呈先增大后减小趋势，70℃时得率最大为0.9618%。由图2.20可知，70℃水浴浸提半小时绿原酸得率最大，为0.9630%，而后逐步减小。由图2.21可知，绿原酸得率随液料比的增大，先增大后趋于稳定，液固比16时绿原酸得率最大，为0.9618%。2.3.3.8热浸法正交试验结果由上表分析可得，热浸温度为70℃、热浸时间0.5h、液料体积质量比18，此时绿原酸得率最高为0.9654%。正交试验结果表示清楚，热浸提取各因素对提取结果影响从大到小顺序为：液料比(C)＞热浸温度(A)＞热浸时间(B)。2.3.3.9四种工艺绿原酸提取液色谱图比拟由前面各工艺提取结果可知，杜仲叶绿原酸不同提取工艺最佳条件下，绿原酸得率从高到低依次为：热浸提取0.9654%＞酶法提取0.9508%＞微波提取0.9313%＞超声提取0.9032%。对应色谱图如下：从色谱图比照分析可知，四种提取方式方法的色谱峰出峰时间、顺序、整体峰形基本一致，且在300nm检测绿原酸峰面积所占总峰面积比例基本一致分别为82.755%、81.722%、82.574%、83.202%，结合四种不同提取方式方法，绿原酸提取液的定量结果及色谱图分析，得出杜仲叶绿原酸提取的最适工艺为热浸提取。2.3.4讨论2.3.4.1超声提取技术试验超声发生装置为超声清洗仪，操作简单，利用超声空化作用对植物细胞进行破碎，促进绿原酸更好的扩散到提取溶剂中，超声提取法由于不需加热便可到达破碎植物细胞的目的，因而对于植物热敏性成分的提取不失为一种理想的方式方法；超声提取也存在弊端，试验发现超声法提取植物有效成分，原料投入量较少，合适实验室应用，若应用到工业化生产中，生产原料投料量将受限制；当超声频率低于40KHz时，噪声明显，因而超声提取若用于工业化生产还可能造成声波污染。2.3.4.2微波提取技术试验中使用的微波发生装置为家用微波炉，单因素试验可知液料比一定的情况下，中高火时随着辐射时间的延长，绿原酸得率先升高后下降。这可能由于绿原酸存在不稳定的构造有关，假如加以持续较高的温度，这种构造会分解，最终造成，绿原酸产率下降。除此之外，由于微波具有选择性加热而且升温速度很快的的特点，所以对于不同组织加热要控制好微波辐射时间。对于一些易破碎的目的组织，需处理的时间较短，此时溶剂还没有开场升温，这样不但提高了中药提取效率还节省了溶剂；而对于较难处理的目的组织，需要加热较长时间，此时溶剂也开场升温且速度很快，造成溶剂损失。2.3.4.3酶法提取技术根据植物细胞壁组成特点〔主要成分为纤维素〕，及其对中药有效成分提取的影响〔细胞内药效成分溶出的障碍〕，又结合了酶具有专一性的特点，试验选用纤维素酶水解杜仲叶细胞壁。试验中酶解反响条件温和，酶解试验在恒温水浴锅中即可进行，对设备要求不高，甚至有些酶解反响在室温即可进行，大大节约了药效成分提取的仪器成本；除此之外，酶具有高效性特点，很少量的酶就能够到达很好的酶解效果。但是，酶法提取容易使酶在药材提取液中残留，给产品的后期处理带来困难。因而，假如解决酶后期去除的问题，酶法提取中药有效成分，有着广阔的应用前景。2.3.4.4热浸提取技术分析此方式方法提取设备简单，只需恒温水浴锅即可。与超声提取及微波提取相比，热浸提取能够大量投料；与酶法提取相比不需要外加催化剂，简化了后续除杂工作。综合考虑，适于工业生产推广。2.3.4.5四种工艺绿原酸提取液色谱图分析四种提取方式方法的色