其他革兰阴性杆菌

其他革兰阴性杆菌第1页/共48页第一节嗜血杆菌属（Haemophilus）嗜血杆菌属是一群没有动力、不形成芽胞、菌体呈球杆状的革兰阴性小杆菌，生长需求较高，在人工培养时需新鲜血液才能生长，故称嗜血杆菌。第2页/共48页一、分类流感嗜血杆菌（H.influenzae）副流感嗜血杆菌（H.parainfluenzae）溶血嗜血杆菌(H.haemolyticus)副溶血嗜血杆菌（H.parahaemolyticus）杜克嗜血杆菌（H.ducreyi）埃及嗜血杆菌（H.aegyptius）嗜沫嗜血杆菌（H.aphrophilus）副嗜沫嗜血杆菌(H.paraphrophilus)迟缓嗜血杆菌（H.segnis）第3页/共48页二、临床意义菌种常栖部位及所致疾病流感嗜血杆菌

原发化脓性感染及继发性感染，包括脑膜炎、鼻咽炎、关节炎、心包炎、鼻窦炎及中耳炎等。副流感嗜血杆菌口腔及阴道正常菌群，偶尔可引起心内膜炎、尿道炎。溶血嗜血杆菌鼻咽部正常菌群，常引起儿童上呼吸道感染。副溶血嗜血杆菌口腔、咽部正常菌群，偶可引起咽炎、化脓性口腔炎和心内膜炎杜克雷嗜血杆菌软下疳，为性传播病菌。常引起外阴脓疱、溃疡、淋巴结肿大。埃及嗜血杆菌急性亚急性结膜炎、儿童巴西紫癜热嗜沫嗜血杆菌咽部正常菌群、牙菌斑中常见菌、偶致心内膜炎和脑脓肿副嗜沫嗜血杆菌咽部及阴道正常菌群，偶可引起亚急性细菌性心内膜炎、败血症、甲沟炎、、脑脓肿、脑膜炎。

几种主要嗜血杆菌常栖部位及所致疾病第4页/共48页三、微生物学检验生物学特性临床标本采集抗原检测及核酸检测分离培养鉴定第5页/共48页

（一）生物学特性

1.形态染色G-小杆菌，呈多形性：球杆、长杆、丝状无芽胞、无鞭毛、多数有菌毛，毒力株有荚膜第6页/共48页2.培养特性营养要求高需要X、V因子生长温度为35℃最佳培养基：巧克力琼脂第7页/共48页菌落特征：巧克力琼脂培养基小、无色透明菌落流感嗜血杆菌巧克力琼脂养基菌落第8页/共48页（二）临床检验程序1.标本采集在疾病早期采取标本，立即送检。在取标本时以肉汤湿润，防止干燥。对心内膜炎、患者取血液标本。痰液标本应洗涤、消化，再接种。不能立即送检应室温保存，不要冷藏。第9页/共48页DNA探针杂交（快速检测）

嗜血杆菌的检验程序血液脑脊液脓汁痰

分离培养(巧克力琼脂)

涂片、镜检荚膜肿胀试验（初步报告）标记抗体检测抗原涂片、荚膜肿胀试验（初步报告）菌落形态、卫星现象、血清学现象报告结果增菌培养第10页/共48页2.分离培养血液、骨髓：增菌后接种巧克力色血琼脂平板有杂菌标本接种选择培养基：巧克力琼脂中加入抗生素(万古霉素、杆菌肽、氯林可霉素)第11页/共48页3.鉴定菌落形态、涂片染色特点血平板卫星试验Ⅹ、Ⅴ因子需求试验第12页/共48页卫星现象

当流感嗜血杆菌与金黄色葡萄球菌在血平板上共同培养时，由于金黄色葡萄球菌能合成较多的Ⅴ因子，并弥散到培养基中，可促进流感嗜血杆菌生长，故在葡萄球菌周围生长的菌落较大，越远越小。卫星现象(satellitephenomenon)第13页/共48页嗜血杆菌因子β溶血发酵XV葡萄糖蔗糖乳糖甘露醇木糖触酶CO2生长ONPG流感嗜血杆菌++-+---D+--副流感嗜血杆菌-+-++-+-DDD溶血嗜血杆菌++++---D+--副溶血嗜血杆菌-++++---+--注：D为不同结果嗜血杆菌属中种的特征第14页/共48页第二节鲍特菌属（Bordetella）第15页/共48页

一、分类百日咳鲍特菌(B.pertussis)副百日咳鲍特菌（B.parapertussis）支气管鲍特菌(B.branchiseptica)鸟鲍特菌(B.avium)欣氏鲍特菌(B.hinzii)霍氏鲍特菌(B.holmesii)第16页/共48页二、临床意义是百日咳的致病菌一年四季均可发病，冬春季多发，小儿多于成人传播途径：飞沫传染源：患者潜伏期：1~2周致病因素：百日咳毒素(PT)、丝状血细胞凝集素(FHA)

腺嘌呤环酶毒素(ACT)、气管细胞毒素、皮肤坏死毒素第17页/共48页临床表现卡他期：1~2周，明显卡他症状，传染性强，感染标本培养阳性率高痉挛期：1~4周，阵发性剧烈咳嗽，直至咳出粘稠的痰液或呕吐为止恢复期：1~2周，阵咳减轻，渐趋停止第18页/共48页三、微生物学检验生物学特性标本直接检查分离鉴定与培养第19页/共48页（一）生物学特性1.形态染色革兰阴性短小杆菌无芽胞，有荚膜支气管鲍特菌、鸟鲍特菌有鞭毛百日咳鲍特菌革兰染色第20页/共48页

3种鲍特菌抗原因子种特异因子其他因子百日咳鲍特菌12、3、4、5、6、7副百日咳鲍特菌148、9、11、7支气管炎鲍特菌128、9、10、11、7第21页/共48页2.培养特性专性需氧，营养要求高最适生长温度为35℃～37℃

最适pH6.8～7.0

常用培养基：B-G培养基（血液、甘油、马铃薯）、CCBA培养基第22页/共48页百日咳鲍特菌在CCBA培养基的菌落第23页/共48页（二）临床检验程序1.标本采集咳碟法、鼻咽拭子法2.标本直接检查直接显微镜检查抗原检测核酸检测3.分离培养与鉴定第24页/共48页凝集反应鲍特菌检验程序标本直接检查（革兰染色）DFA抗原检出核酸检测分离培养血清学诊断，ELISA等可疑菌落菌落观察镜检生化反应DFA核酸检测鲍-金琼脂第25页/共48页动力氧化酶脲酶枸橼酸盐利用硝酸盐还原百日咳鲍特菌-+---副百日咳鲍特菌--++-支气管鲍特菌+++++鸟鲍特菌++---欣氏鲍特菌++-+-霍氏鲍特菌-----6种鲍特菌生化特征第26页/共48页第三节布鲁菌属（Brucella）第27页/共48页一、分类羊布鲁菌（B.melitensis）牛布鲁菌（B.abortus）猪布鲁菌（B.svis）绵羊布鲁菌(B.ouis)狗布鲁菌(B.canis)森林鼠布鲁菌（B.neotomaes）第28页/共48页二、临床意义传染源：病兽，以羊、牛、猪多见传播途径：病兽的组织、尿、乳液、等通过人体的皮肤、呼吸道、消化道进入人体易感人群：发病以青壮年为主，从事兽医、皮毛加工、屠宰的工人发病率较高潜伏期：5~21日，亦可高达数月第29页/共48页致病物质内毒素、透明质酸酶、荚膜所致疾病动物：母畜流产、乳腺炎、附睾炎等赤藓醇－－胎盘、绒毛膜含量高人类：波浪热第30页/共48页分泌物、乳品消化道、呼吸道黏膜、皮肤及眼结膜人菌血症1～6W潜伏期（70％）发热、出汗、关节痛和全身乏力内毒素进入肝、脾、骨髓（发热消退）繁殖入血菌血症（体温再次上升）波浪热第31页/共48页三、微生物学检验生物学特性标本采集标本直接检查分离培养与鉴定第32页/共48页（一）生物学特性1.形色染色革兰阴性短小球杆菌，两端钝圆，偶见两极浓染，无动力、无芽胞、无荚膜2.抗原成分

A抗原、M抗原马尔他布鲁菌革兰染色A:M羊—1:20牛—20:1猪—2:1第33页/共48页需氧，营养要求较高需5%~10%的CO2培养基：硫胺、烟酸、生物素等物质生长温度为35℃最适pH6.7生长缓慢（5~7天）3.培养特性马尔他布鲁菌血平板菌落第34页/共48页（二）临床检验程序1.标本采集血、骨髓、尿、乳汁、关节滑膜液2.标本直接检查显微镜检查直接镜检意义不大凝集反应玻片凝集、试管凝集PCR检测第35页/共48页标本（血液、羊水、骨髓、分泌物等）血清学诊断凝集试验抗人球蛋白试验补体结合试验分离培养（5%~10%CO2）血琼脂、双相培养基马铃薯培养基动物实验（豚鼠腹腔或皮下注射）菌落、染色镜检纯培养生化反应凝集试验分离培养镜检凝集试验布鲁菌检验程序第36页/共48页3.分离培养与鉴定血液及体液：双相培养基-30d无菌生长阴性分泌物、脏器：选择培养基血清或肝浸液培养基:2~3d可见细小、无色透明的光滑型菌落血平板上不溶血液体培养基开始轻度混浊、两周后有沉淀第37页/共48页

布鲁菌的生化特性菌种触酶氧化酶

糖分解精氨酸脱羧硝酸盐还原尿素酶H2S产生染料的耐受葡萄糖半乳糖阿拉伯糖硫廑

(40μg)复红

(20μg)羊布鲁菌+++---+V-++牛布鲁菌+++++-+++-+猪布鲁菌++++++++(-)+-森林鼠布鲁菌+-+++-+++--绵羊布鲁菌+--------+(-)犬布鲁菌+++--+++-+-注：V不定;(-)大部分菌株阴性第38页/共48页第四节巴斯德菌属（Pasteurella）

第39页/共48页分类多杀巴斯德菌（P.multocida）嗜肺巴斯德菌（P.pneumotropica）溶血巴斯德菌（P.haemolytica）产气巴斯德菌（P.aerogenes）鸡巴斯德菌（P.qallinarum）犬巴斯德菌（P.Canis）贝氏巴斯德菌（P.beffgae）达可马巴斯德菌（P.dagmatis）明立巴斯德菌（P.tomatts）第40页/共48页临床意义为人兽共患病原菌常引起肺部感染、支气管炎、菌血症、脑膜炎、脑脓肿、化脓性关节炎、骨髓炎、阑尾脓肿、腹膜炎、产褥热、肝脓肿及伤口感染近年来，家养宠物增多，所以该病较为多见第41页/共48页微生物学检验生物学特性标本直接检查分离培养与鉴定第42页/共48页生物学特性形态染色革兰阴性球杆菌无动力、无芽胞第43页/共48页分离培养巧克力平板、血平板：白色不溶血小菌落，约0.5~1.5mm鉴定触酶和氧化酶阳性，发酵葡萄糖产酸不产气，不发酵乳糖，能还原硝酸盐多杀巴斯德菌血平板菌落第44页/共48页第五节弗朗