细菌的接种与培养方法操作规程_第1页
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文档简介

细菌的接种与培养方法操作规程一、细菌的接种根据待检标本的来源、培养目的及所用培养基的性状，采用不同的接种方法。1、平板画线分离法、连续画线分离法此法主要用于杂菌不多的标1/5处密集涂布,然后回来作曲线连续划线接种，线与线间有一定距离,划满平板为止。先将标本均匀涂布于平板边缘一小区(约占平板1/5),再12次。以获得单个菌落。2、斜面接种法该法主要用于单个菌落的纯培养。用灭菌接种针取上作连续曲线画线。一直画到斜面顶端。3、液体接种法多用于一些液体生化试验管的接种。用灭菌接种环取菌少许，在试管内壁与液面交接处的管壁上轻轻研磨，使细菌混合于液体中。4、穿刺接种法主要用于半固体培养基、明胶及双糖铁的接种。用接种针取］少许，从半固体培养基中央，平行于管壁垂直刺入，接近管底但不可接触管底，然后接种针原路退出。用接种针取］少许，从半固体培养基中央，平行于管5、倾注平板法临床上主要用于尿液等标本的细菌计数。将标本经适当稀释后，取一定量加入已灭菌的平皿内，倾入已经45°C左右的定量培养基，混匀，待凝固后倒置、培养。6、涂布接种法常用于纸片药物敏感性测定，也可用于被检标本的细菌计数。加定量的被检菌液于琼脂平板表面，然后用灭菌的棉签反复涂布几次，使被检菌均匀分布在琼脂平板表面。然后贴上药敏纸片培养，或直接培养观察结果。二、细菌培养方法根据临床初步诊断及待检细菌的种类，可选用不同的环境进行培养。常用的有需氧培养法、二氧化碳培养法和厌氧培养法。1、需氧培养法本法是临床细菌室常用的培养方法，即将已经接种好的平板、斜面和液体培养基等。置于35°C18〜24小时。2、二氧化碳培养法CO2CO2孵箱内培养。三、分离及纯化法3.1、分离是指从原材料或多种细菌的混合培养物中将各种细菌彼此独立地分离开，以得到纯的单一菌株，技术步骤如下：作纯培养分离时，一般只用一只完整的琼脂平板。涂划多采用分区划线法，在一只平板中可划3~5有两种：3.1.K从临床标本分离细菌所含菌数相对较少时,可1/32、3区依次划线，每划完一个区域均将接种环灭菌一次，冷却后再划下一区域，每一区域的划线均接触上一区域的接种线1〜2次，使菌量逐渐减少以获得单个菌落。3.1.2、快速划线分离法：采用快速划线使一接种环有很大关系。3.2

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