革兰氏染色法的过程原理

革兰氏染色法的过程及原理之勘阻及广创作一，过程．涂片将培育的分歧菌分别作涂片（注意涂片切不可过于浓重），干燥、固定。固准时经过分焰l一2次即可，不可过热，以载玻片不烫手为宜。．染色(1）初染加草酸铰结晶紫一滴，约一分钟，水洗。(2）媒染滴加碘液冲去残水，并覆盖约一分钟，水洗。(3）脱色将载玻片上边的水甩净，并衬以白布景，用95％酒精滴洗至流出酒精刚才不出现紫色时为止，约20一30秒钟，立刻用水冲净酒精。(4）复染用番红液染1一2分钟，水洗。(5）镜检干燥后，置油镜察看．革兰氏阴性菌呈红色，革兰氏阳性菌呈紫色。以分别开的细菌的革兰氏染色反响为准，过于密集的细菌，常常呈假阳性。(6)同法在一载玻片上以大肠杆菌与枯草芽孢杆菌混淆制片，作革兰氏染色对照。二，原理革兰氏染色法（Gramstain）不只能察看到细菌的形态并且还可将全部细菌划分为两大类：染色反响呈蓝紫色的称为革兰氏阳性细菌，用G＋示意：染色反响呈红色（复染颜色）的称为革兰氏阴性细菌，用G一示意。细菌关于革兰氏染色的分歧反响，是因为它们细胞壁的成分和构造分歧而造成的。革兰氏阳性细菌的细胞壁主假如由肤聚糖形成的网状构造构成的，在染色过程中，当用乙醇办理时，因为脱水而惹起网状构造中的孔径变小，通透性降低，使结晶紫一碘复合物被保留在细胞内而不简单脱色，所以，体现蓝紫色；革兰氏阴性细菌的细胞壁中肤聚糖含量低，而脂类物质含量高，当用乙醇办理时，脂类物质溶解，细胞壁的通透性增添，使结晶紫一碘复合物易被乙醇抽出而脱色，而后又被染上了复染液（番红）的颜色，所以体现红色。革兰氏染色的重点在于严格掌握酒精脱色程度，如脱色过分，则阳性菌可被误染为阴性菌：而脱色，不敷时，阴性菌可被误染为阳性菌。别的，菌龄也影响染色结果，如阳性菌培育时间过长，或已死亡及部分菌自行溶解了，都常呈阴性反响。青霉素作用体制扰乱细菌细胞壁的合成。青霉素你的结果与细胞壁的成分粘肽构造中德D-丙氨酰-D-丙氨酸近似，可与后者竞争转肽酶，阻挡你粘肽的形成，造成细胞壁的缺损，使细菌失掉细胞壁的浸透屏障，对细菌起到杀灭作用。溶菌酶与青霉素对细菌细胞壁的作用溶菌酶作用体制：是一种能水解致病菌种黏多糖的碱性酶，只需经过损坏细胞壁中的N-乙酰胞壁酸和N-乙酰氨基葡萄糖之间的B-1，4糖苷键，使细胞壁不溶性黏多糖分解成可溶性糖肽，致使细胞壁破碎内容物流出而使细菌溶解，溶菌酶还能够和带负电荷的病毒蛋白直接联合，与DNA，RNA，脱辅基蛋白形成复盐，使病毒失活，所以该酶拥有抗菌消炎，抗病毒等作用判断细菌有无鞭毛的方法电镜察看，鞭毛染色，半固体穿刺培育，菌落形态察看描绘细菌与古细菌在细胞膜上的主要化学差异在革兰氏阴性菌的表层，有由肽葡聚糖形成的细胞壁，在壁的外面，又有由蛋白质、磷脂质、脂多糖形成的膜层，与里面的细胞质膜相对应，特称此层为细菌外膜。外膜比细胞质膜的磷脂质含量低，但脂多糖的含量则比较高。外膜的蛋白质与细胞质膜分歧，主要部分为数种蛋白质所构成。其主要蛋白质的部分与特异的内面的肽葡聚糖以共价键联合。脂多糖存在于外膜的最外层。在外膜中仅知有磷脂酶，在细胞与外界的联系中，已看到有很多功能的蛋白质，即有各样噬菌体、维生素B12、大肠杆菌素等的受体存在，而其一部分蛋白质则与DNA的复制、细胞分裂相关，别的，外膜对水溶性低分子物质简单透过，但抗衡菌物质则是透过的屏障，它对革兰氏阴性菌间的透过性带来很大的差异。关于古细菌来说，细胞壁不含肽聚糖，有的以蛋白质为主，有的含杂多糖，有的近似于肽聚糖，但都不含胞壁酸、D型氨基酸和二氨基庚二酸。缺少细胞壁的原核生物，除了自然界天然存在的缺壁细胞，比方支原体外，实验室菌种的突变、人为克制新细胞壁合成、和对现成细胞壁进行酶解都能够获得缺壁细胞。缺壁细胞主要有四类：Ｌ型细菌，原生质体，球状体，以及支原体。Ｌ型细菌；形成；实验室或宿主体内经过自觉性突变而形成的遗传性稳固的细胞壁缺点菌株特色；细胞膨大，对浸透敏感，在培育基上可形成油煎蛋状菌落，拥有正常的生殖能力实践意义；没有了细胞壁的机械固定，细胞及其柔韧，呈多样性，成为“滤过型细菌”。原生质体，球状体；形成；用溶菌酶除尽原有的细胞壁，再用青霉素克制重生细胞壁的合成，最后获得一层仅有细胞膜包裹的圆球状浸透敏感细胞特色；无完好的细胞壁，细胞呈球状，对浸透压极其敏感，革兰氏染色阴性，细胞不克不及分裂，对相应噬菌体不敏感，无生殖能力实践意义；比正常有细胞壁的细菌更简单导入外源遗传物质，究遗传规律和进行原生质体交融育种的优秀资料

是研支原体；形成；在长久进化中形成，适应自然生活条件