核酸分子杂交技术

..其次章 核酸杂交技术〔一〕名词解释原位杂交核酸分子杂交技术探针反向点杂交缺口平移标记法随机引物标记法末端标记法8．Southernblot9．荧光原位杂交10．菌落杂交〔二〕选择题【A型题】链的Tm值主要取决于核酸分子的〔 A G－C含量BA－TCA－GDA－CET－G液相杂交是以下哪一种〔〕ASouthemBNorthemCDotDSlot争论得最早的核酸分子杂交种类是〔 〕菌落杂交Southern杂交C Northern杂交

D E 原位杂交Southern杂交通常是指〔 A DNA和RNA杂交B DNA和DNA杂交C RNA和RNA杂交D 蛋白质杂交E DNA和蛋白质杂交最简洁降解的核酸探针是( )cDNA探针B 探针C ssDNA探针D gDNA探针E:RNA探针基因芯片技术的本质就是〔 A 核酸分子杂交技术子杂交技术C 聚合酶链反响技术D 基因重组技术E 酶切技术DNA探针的长度通常为( A 1000～2023个碱基B 500～1000C 400～500D 100～400E.<100个碱基8．寡核苷酸探针的最大的优势是〔 A 杂化分子稳定B 分仅仅一个碱基差异的靶序列C 易标记易合成易分解9．在Southern印迹中常用的核酸变性剂是( A 甲醛B 乙醛C氢氧化钠D 碳酸钠E 盐酸10．盐酸硝酸纤维素膜最大的优点是〔 A 脆性大本底低共价键结合结合E 高结合力最常用的DNA探针标记方法是( )A 物B 切口平移C3′-末端标记D5′-末端标记EPCR针，重复使用滤膜，以下哪种状况不行以发生〔 〕过过浴过洗过

记过13．5′一末端的DNA探针标记主要依靠的酶是( )A B 末端转移酶AKPDNApolⅡE DNApol14．血友病是一种〔 〕染色体病X代谢缺陷病D 先天畸形E 常染色体隠性遗传病15．预杂交中最常用的封闭剂是( A 溶液B 5×TBE1×TBE1×TAE1×TPE检测目标是RNA的技术是〔 A Southern杂交B Western杂交C Northern杂交D Eastern杂交E 杂交淋巴瘤检测靶序列是DNA的技术是〔 A Southern杂交WesternNorthern杂交D Eastern杂交E 杂交淋巴瘤DNA双螺旋之间氢键断裂双螺旋解开〕变性复性简单性杂交探针具有碱基互补区域的单链又可以重结合形〕变性复性简单性杂交探针一种标记核酸与另一种核酸单链进展配对形链，这一过程称〔 〕变性复性简单性杂交探针点/狭缝杂交可以用于〔〕A快速确定是否存在目的基因不仅可以检测DNA样品中是否存在某一特定的基因，而且还可以获得基因片段的大小及酶切位点分布的信息

因定位分析D 阳性菌落的筛选E 蛋白水平的检测放射自显影时反射光产生的潜影在低温下较稳定，最适温度是( )A -70℃B -30℃C -20℃D -10℃E4℃Southern〔〕 不仅可以检测DNA样品中是否存在某一特定的基因，而且还可以获得基因片段的大小及酶切位点分布的信息C用于基因定位分析D阳性菌落的筛选E蛋白水平的检测ATm=4(G+C)+2(A+T)BTm=2(G+C)+4(A+T)CTm=6(G+C)+4(A+T)DTm=2(G+C)+6(A+T)ETm=6(G+C)+2(A+T)Northern〔〕A快速确定是否存在目的基因不仅可以检测DNA样品中是否存在某一特定的基因，而且还可以获得基因片段的大小及酶切位点分布的信息RNA用于基因定位分析E 荧光原位杂交可以用于〔 〕A 否存在目的基因B 检测的目标是RNAC用于基因定位分析D阳性菌落的筛选E蛋白水平的检测以等位基因特异的寡核苷酸探针杂交法诊断某常染色体隐性遗传病时，假设能与突变探针及正常探针接合，则该样本为〔〕正常人杂合体患者C纯合体患者D携带者E不能确定Tm()ApH3～5BpH4～5CpH5～6DpH5～9EpH8～11一般来说设计的寡核苷酸探针的长度〔 A 2-10bpB 17-50bpC D E 200-300bp

变性剂可使核酸的Tm值降低，常用的变性剂是( )A 甲酰胺B 钠C 浓盐酸稀盐酸甲醇以下有关cDNA探针的描述不正确的为〔 A 利用mRNA通过RT-PCR在体外反转录可制备大量的cDNA探针cDNAcDNAA〔T，有可能产生非特异性杂交的问题cDNA度进展( )A B 10～15℃C 5～10℃D E 40～50℃33．对于寡核苷酸探针，杂交温度一般般低于其值( )A30～40℃B20～30℃C15～30℃D10～15℃E 5℃一般状况下，不含变性剂甲酰胺时，杂交反响常在多少℃下进展( A 9080756858在含50%甲酰胺时，杂交反响在多少℃进展()A70B65C55D42E35杂交时的温度与错配率有关，错配率每增加则Tm值下降( A 0.5℃B1～1.5℃C2～2.5℃D3～3.S℃E4～4.5℃交体的Tm值一般应增加( A 1～5℃B 5～10℃C 10～15℃D E 20～25℃杂交的时间一般为t的( A l倍B1～3C3～5

D 5～8倍E 为封闭非特异性杂交位点，可在预杂交液中参加( )ssDNA1×SSCC 10×SSCD 5×TBECE 50×TAE随机引物法标记探针常用的AGT聚体的数目是( )4681012【X以下哪些是影响DNA复性的因素( A DNA浓度B C 温度碱基组成DNADNA探针的优点有〔 A 制备方法简洁DNA择粒载体中，可以无限生殖，取之不尽E 单链，不存在竞争性的自身复性以下哪些方法可以用于探针的全程标记〔 A DNA加尾法B 记法C 随机引物标记法D E 尾端标记关于DNA变性的描述正确的选项是( )A 二级构造破B 坏C 黏度降低D E 浮力密度增加以下哪些因素可以使DNA变性〔 A 增加溶液的浓度加热转变溶液的pH值D 有机溶剂E 冷藏46．预杂交中，以下能起封闭作用的是( ssDNABSAD 脱脂奶粉E DTT变性的DNA会发生哪些理化性质的变〔 A 粘度下降B 加C 浮力下降D 增加E 紫外光吸取削减

以下物质适于非放射性探针标记的是()A AKPACP生物素地高辛荧光素关于人工合成的寡核苷酸探针，以下描述正确的选项是)特异性高基酸序列推想其序列C 分子量小D 基因挨次差异性分析E 可用末端转移酶进展5′端标记通过哪些措施可以提高杂交反响的速度〔 A 承受大片段探针B 反响体积C 高反响温度不断的振摇大量的反响体积51．DNAC 可标记超螺旋DNAD 双链DNAE 可标记随机引物以下哪些方法可以用于从凝胶上转移 DNA〔 〕A毛细转移B真空转移C负压转移D E 冷冻转移关于随机引物法标记探针下述正确的选项是()A可标记单链DNAB可标记双链RNAC可标记单链RNAD比活性高达108cpm／µgDNAE常经过SephadexG-50可以承受哪些方法来标记探针〔〕A杂交标记法B切口平移标记法C5’-末端的标记D3’-末端的标记E化学法延长标记整个杂交反响主要以下哪些步骤组成〔〕A预杂交杂交洗脱固定转移56．放射自显影可以被分为〔 A 直接放射自显影B 氧化显影C D 自显影E 固定显影关于电转移以下描述正确的选项是( )A 快速、高效B 设备TBE

可产生高温E常用NC预杂交的主要目的是〔 A 平衡滤膜B封闭非特异性杂交的位置C提高杂交信号的检测效率D便于从滤膜上除去探针E 去除用于杂交反响检测的显色物质关于非放射性探针标记以下描述正确的选项是( A 对人体危害小B 需要特别设备C 间使用D 如放射性探针E 重杂交探比较简洁DNA失或插入产生，或由于限制性酶切位点转变而导致〔〕APCRRAPDSouthermDNorthern印迹杂交E以上都不是DNADNA〔〕菌落印迹杂交NorthernCWesternD原位杂交E斑点杂交关于RNA探针的描述以下正确的选项是()A 可用于随机引物标记B 特异性高C D 位素标记法标记E 不易降解以下哪些可以作为核酸探针使用〔 A microRNAB C 寡核苷酸D mRNAE 双链RNA64．A B 可以是RNA可用放射性标记射性标记E 必需是单链核酸〔三〕问答题1．依据哪三种不同的分类标准可以将杂交分为哪几类？2．简述反义核酸技术的根本原理及其应用范围3．试述Northernblot杂交的操作步骤？4．什么是肽核酸？并简述其应用？5．请举例说明杂交技术在临床检验科基因诊断方面的应用。6．请表达杂交探针标记方法的种类。7．简述直接放射自显影的原理。〔一〕 名词解释

参考答案

退火温度下，能与各种单链DNA模板结合。首先1．原位杂交：是首先应用核酸探针与组织或细胞中的核酸按碱基互补配对原则进展特异性结合形在显微镜下进展细胞内基因定位或基因表达的检测技术。2．核酸分子杂交技术：单链的核酸分子在适宜的交检测靶序列的一类技术称核酸分子杂交技术。3．探针：是一段单链或双链核苷酸，用放射性核针。4．反向点杂交：是将多种探针固定在同一膜上，4．反向点杂交：是将多种探针固定在同一膜上，性筛查出多种不同的序列，而不是像传统的杂交性筛查出多种不同的序列，而不是像传统的杂交法，一次仅能检测一个未知序列。法，一次仅能检测一个未知序列。5．缺口平移标记法：该法是利用低浓度DNaseIDNAE.coliDNAI5’35’dNTP的探针。6．随机引物标记法：随机引物是各种可能序列的

DNA引物结合于两条单链模板上，当反响液中存在的4种dNTP中有一种带放射性核素标记时，在DNADNA后经纯化即可得到标记的DNA探针。7．末端标记法：寡核苷酸探针由于较其他类型的探DNA5’端本身即为羟基。其原理是利用多核苷酸激酶将P分子上7位磷酸基转移至寡核苷酸链53’端进展。技术，在遗传诊断、DNAPCR析等方面有重要价值。Southern印迹杂交的方法是将标本DNA用限制性内切酶消化后，经琼脂糖电泳分别各酶切片段，接着，使酶切片段DNA发生变性并转印到一固相支持物(通常是硝酸纤维素这种方法不仅可以检测DNA样品中是否存在某一特定的基因，而且还可以获得基因片段的大小及酶切位点分布的信息。9．荧光原位杂交：是一种利用非放射性的荧光信号对原位杂交样本进展检测的技术。它将荧光信号的高灵敏度、安全性，荧光信号的直观性和原位杂交的高准确性结合起来，通过荧光标记的DNA探针与待测样本的DNA进展原位杂交，在荧光显微镜下对荧光信号进展区分和计数，从而对染色体或据。称菌落杂交，主要步骤包括：①菌落平板培育；②滤膜灭菌后放到细菌平板上，是菌落粘附到经适当饱和的吸水纸上；③菌斑溶解产生单练的DNA、

1．依据哪三种不同的分类标准可以将杂交分为哪几类？DNADNARNARNA与RNA固定A，用

标记的探针与菌落进展杂交；

相杂交又可以分为菌落杂交、 Southern杂交、平板相比较，就可以确定阳性菌落。〔二〕选择题【A

Northern杂交、点杂交和狭缝杂交。反义核酸技术是近几年进展起来的一项的1A 2E 3D 4B 5E 6A A7C 8B 9C 0B 1A 2A 技术及核酶技术。13．A 14．B 15．A 16．C 17．A 18．A 3．Northernblot杂交的操作步骤？19．B 20．D 21．A 22．A 23．A 24．A ①RNA5C 6C 7DD 9B 0A 膜放在含有A电泳条带的凝胶上；③转印盘中31．E 32．A 33．E 34．D 35．D 的转移缓冲液将渐渐为胶和膜上掩盖的吸水纸吸36．B 37．E 38．B 39．A 40.B【X

收，从而利用④毛细作用将胶中的变性RNA分子转移到硝酸纤维薄膜上；⑤转印完成后，使RNA41．ABCD47．ABD53．ABCD59．ABCD〔三〕问答题

42．ACD48．ACDE54．BCD60．AC

43．BC49．ABCD55．ABC61．ADE

4针杂交；0D2D交区带。4．什么是肽核酸？并简述其应用？56．AD 57．ABCD 58．AB肽核酸是一种全的DNA类似物，在20世20年月由4以中性的DNA通过碱基互补配对的形式识别并结合DNARNA序列，形成稳定的双螺旋构造。由于PNA不带电荷，与DNA和RNA之间不存在静电斥力，因而结合的稳定性和特异性都大为提高；PNA与DNA或RNADNADNA或DNA、RNA杂交，表现在很高的杂交稳定性、优良的特异性，而且不被蛋白酶和核酸酶水解等方面。鉴于科技领域。如：病原体、遗传病的检测，抗癌、抗病毒反义核酸的争论和应用。特别是PNA可取代核酸用于基因芯片的制备，被认为是基因芯片的升PNA还可用于定量PCRPNAA为宽阔的应用前景。5．请举例说明杂交技术在临床检验科基因诊断方面的应用是镰状细胞贫血病的基因诊断。链第6位的谷氨酸被缬氨酸取代，表示为6(A3)谷→6GAAGTA，