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小鼠脾脏单个核细胞分别及细胞计数实验时间：实验地点：实验人：实验原理小鼠脾脏位于上腹部左后侧，体积较大，长条形，属于外周免疫器官。外周血中淋巴细胞可经再循环驻如脾脏等外周免疫器官的特定地域，因此富含各类免疫细胞。免疫细胞的分别：采纳红细胞裂解法，是依据细胞对浸透压变化的敏感度。红细胞因为细胞结构较为简单，仅有细胞膜结构，对于膨胀的耐受能力较差，因此绝大部分就会涨破，遇到破坏。是一种比较平和的去除红细胞最简易易行的方法。实验资料：健康小鼠手术器材（剪刀、镊子）、解剖板70%乙醇PBS缓冲液、红细胞裂解液（ACK）%台盼蓝细胞计数板、计数器离心计显微镜实验方法：取小鼠脾脏将小鼠颈椎脱位处死，用酒精消毒。用剪刀剪开背部皮肤，再找到脾脏，用镊子夹出脾脏并剪除四周组织。制备单个核细胞悬液将拿出的脾脏置于盛有3mlPBS缓冲液的平皿中，而后再置于尼龙指套中，用针芯轻轻碾压使得单个核细胞悬浮于平皿中。汲取平皿中细胞悬液置于刻度离心管（15ml）中，以1500rpm离心10min，弃去上清液，加入ASK至2-3ml，轻轻吹打混匀并搁置2min，以破坏红细胞。而后加入PBS缓冲液至10ml，以1500rpm离心10min。弃去上清液，用PBS缓冲液定容至2ml，吹打混匀即为小鼠脾脏单个核细胞悬液。计算细胞浓度稀释十倍，随机采纳一个大方格计数细胞计数为324个，计算细胞浓度为4×7324×10×10=10/ml计算细胞活力在总计为324个细胞被骗数，死亡细胞有16个，计算细胞活力为：324-16/324×100%=%在理论范围以内实验结果研磨脾脏获取细胞悬液本实验中将小鼠的脾脏放入尼龙指套内，置于少许PBS液中缓慢研磨，获取细胞悬液。实验中，我们发现尼龙指套不可以滤去全部结缔组织，操作中会有结为絮状团块的结缔组织。这些结缔组织在离心后会和细胞绞缠在一起，去除十分麻烦，并且会损失细胞。应当在离心以前尽早用吸管吹打后当心弃去（这样损失的细胞比较少，造成较小的偏差）。研磨脾脏时的力度、时间、温度都会影响细胞的活性。因此应置于冰上快速、柔和地研磨，置于液体中防范干磨。我们在实验室室温下碾磨，造成细胞破碎较多，影响最后实验结果。白细胞计数在使用血球计数板时，遇到了镜下看不到计数板格子线的问题:开初，我们小组可以在镜下观察到细胞，但是细胞清楚时没法找到计数板格子线。以后我们意识到，这可能是因为充池后马上观察，细胞还悬浮在液体中，和方格线不在同一个平面上。静置2分钟后再调焦观察，只好隐约看到方格线。在频频调试中发现，减小光圈并降低光源亮度可以增添方格线的清楚度。其余，必定要注意在充池前对计数板的洁净。我们小

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