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实验七考马斯亮蓝G-250法测定蛋白质含量一、实验目的学会用考马斯亮蓝G-250法测定蛋白质含量二、实验原理考马斯亮蓝能与蛋白质的疏水微区结合，这种结合具有高度的敏感性。考马斯亮蓝G-250的磷酸溶液呈棕红色，最大吸收峰在465nm当它与蛋白质结合形成复合物时呈蓝色其最大吸收峰改为595nm，考马斯亮蓝G-250-复合物的高消光效应导致了蛋白质定量测定的高敏感度。在一定范围内，考马斯亮蓝G-250-复合物呈色后，在595nm下吸光度与蛋白质含量呈线性关系，故可以用于蛋白质浓度的测定。三、实验器材（1）旋涡混合器。（2）试管1.5cm×15cm（×8）（3）吸管0.10ml（×1），0.50ml（×2），1.0ml（×2），2.0ml（×1），2.0ml（×1）。（4）722型（或7220型）分光光度计。（5）容量瓶1000ml（×1）。（6）量筒100ml（×1）。（7）电子分析天平。四、实验试剂1、0.9％NaCL溶液。2、标准蛋白液；牛血清白蛋白（0.1mg/ml），准备称取牛血清白蛋白0.2g，用0.9%NaCl溶液溶解并稀释至2000ml。3、染液：考马斯亮蓝G250(0.01%),称取0.1g考马斯亮蓝G250溶于50ml95%乙醇中，再加入100ml浓磷酸，后加蒸馏水定容到1000ml,过滤。4、样品液：取牛血清白蛋白（0.1mg/ml）溶液，用0.9%NaCl稀释至一定浓度。五、实验步骤（一）标准曲线的制备1、取7支干净试管，按下表进行编号并加入试剂。2、混匀，室温静置3min，以第1管为空白，于波长595nm处比色，读取吸光度，以吸光度为纵坐标，以标准液浓度（ug/ml）作为横坐标作图得标准曲线。表考马斯亮蓝法测定蛋白质浓度——标准曲线的制备

管号试剂1234567标准蛋白液/ml00.10.20.30.40.60.80.9%NaCl/ml10.90.80.70.60.40.2考马斯亮蓝染液/ml4444444蛋白质浓度（μg/ml）0102030406080A595nm（二）样品的测定另取一支干净试管，加入样品液1.0ml及考马斯亮蓝染液4.0

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