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本文格式为Word版，下载可任意编辑——中草药对虹鳟稚鱼免疫力的影响

材料与方法

1.1中药方剂配伍

针对免疫力低、发病率高，而配制提升鱼体非特异免疫力方剂。本方组成如下：黄芪、肉丛蓉;川芎、金银花、红花、五味子、柴胡;鱼腥草、白花蛇舌草;石斛;白术、白头翁、绞股蓝、桑螵蛸、甘草、板蓝根、天麻等25味。

1.2药饵的制作与投喂

将配好的中药粉碎后，以1%的剂量添加到已配好的饲料原料中，充分搅拌混匀后制成直径1.5mm的颗粒。

在2个面积5m2的流水池中，放入平均体重为4.38g的虹鳟稚鱼。试验池放14800尾，对照池放12600尾。试验池投喂药饵，对照池投喂正常饲料。并记录试验池和对照池的死鱼数。试验池连续喂12天药饵，死鱼数记录30天。

1.3免疫学指标的测定

试验池连续喂12天药饵后，试验池和对照池各取6尾鱼采组织样品，各取10尾鱼采血液样品，用上海仁捷生物科技有限公司ELISA检测试剂盒，分别检测：超氧化物歧化酶（SOD）、干扰素（IFN）-γ、白细胞介素（IL）-1β、过氧化氢酶（CAT）、碱性磷酸酶（ALP）、肿瘤坏死因子（TNF）-ɑ等6种免疫相关酶。

用预冷的PBS（0.01M，pH=7.4）冲洗组织，去除残留血液，称重0.1g后将组织剪碎。将剪碎的组织与900μLPBS参与玻璃匀浆器中，于冰上充分研磨。结果将匀浆液于5000×g离心5～10分钟，取上清检测。

将收集于血清分开管的全血在室温放置2小时，然后1000×g离心20分钟，取上清检测。

概括检测方法如下：

①设置标准品孔和样本孔，标准品孔各加不同浓度的标准品50μL;

②样本孔中参与待测样本50μL;空白孔不加。

③除空白孔外，標准品孔和样本孔中每孔参与辣根过氧化物酶（HRP）标记的检测抗体100μL，用封板膜封住回响孔，37℃水浴锅或恒温箱温育60min。

④弃去液体，吸水纸上拍干，每孔加满洗涤液（350μL），静置1min，甩去洗涤液，吸水纸上拍干，如此重复洗板5次。

⑤每孔参与底物A、B各50μL，37℃避光孵育15min。

⑥每孔参与终止液50μL，15min内，在450nm波优点测定各孔的OD值。

2.结果与议论

试验池和对照池30天的死鱼数分别为2487尾和4965尾，存活率分别为92.32%和76.93%。测验组比对照组高15个百分点。而且试验池比对照池晚发病一周。

组织免疫学指标检测结果见图1;血清免疫学指标检测结果见图2。

由图1可看出，测验组和对照组组织样品的免疫学指标无显著差异。由图2可看出，测验组和对照组血液样品的免疫学指标差异显著。测验组鱼血清中的超氧化物歧化酶（SOD）、干扰素（IFN）-γ、白细胞介素（IL）-1β、过氧化氢酶（CAT）、碱

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