ve含量测定课件

维生素E的测定

一、概述

维生素是维持人体正常生命活动所必需的一类天然有机化合物。其种类很多，目前已确认的有30余种，其中被认为对维持人体健康和促进发育至关重要的有20余种。这些维生素结构复杂，理化性质及生理功能各异，有的属于醇类，有的属于胺类，有的属于酯类，还有的属于酚或醌类化台物。维生素都具有以下共同特点：这些化合物或其前体化合物都在天然食物中存在；它们不能供给机体热能。也不是构成组织的基本原料，主要功用是通过作为辅酶的成份调节代谢过程，需要量极小；它们一般在体内不能合成，或合成量不能满足生理需要，必须经常从食物中摄取；长期缺乏任何一种维生素都会导致相应的疾病。二、脂溶性V的测定

VA、VD、VE、VK与类脂物一起存于食物中，摄食时可吸收，可在体内积贮。脂溶性维生素具有以下理化性质：1.溶解性：脂溶性维生素不溶于水，易溶于脂肪、乙醇、丙酮、氯仿、乙醚、苯等有机溶剂。2.耐酸碱性：维生素A、D对酸不稳定，对碱稳定，维生素E对碱不稳定，但在抗氧化剂存在下或惰性气体保护下，也能经受碱的煮沸。耐热性、耐氧化性

耐热性氧化性VA

好，能经受煮沸易被氧化（光、热促进其氧化）VD好，能经受煮沸不易被氧化VE好，能经受煮沸在空气中能慢慢被氧化（光、热、碱促进其氧化）VK好，能经受煮沸易被光、氧化剂及醇破坏

（一）铈量法1、原理：

VE用硫酸加热回流，水解成生育酚，用硫酸铈定量地氧化为对一生育醌，过量的硫酸铈氧化二苯胺指示剂而指示滴定终点。终点：亮黄→灰紫;空白试验.2、反应条件（1）VE在H2SO4酸性条件下水解为宜。碱性溶液中游离生育酚易被氧化。Ce(SO4)2液滴定在酸性溶液中进行,如在碱性中会生成碱式盐而影响测定。（2）Ce(SO4)2溶于酸水溶液，不溶于醇,α-生育酚溶于酸而不溶于水,滴定过程中应有一定浓度的乙醇。（3）本法适用于纯度高的VE供试品。[检查方法]

取本品0.10g，加无水乙醇5ml溶解后，加二苯胺试液1滴，用硫酸铈滴定液(0.01mol/L)滴定，根据消耗硫酸铈滴定液的量来进行计算

紫外分光光度法[原理]:维生素E在碱性溶液中加热水解生成游离生育酚，并被三氯化铁氧化为对生育醌，同时生成亚铁离子。后者与联吡啶生成血红色的配离子，再进行比色测定。但由于操作麻烦，专属性不高，又容易有干扰，现已被GC取代。生育酚[O]对-生育醌★气相色谱法(ChP)六十年代起开始研究维生素E的气相色谱法。GC特点选择性好灵敏度高速度快分离效能好气相色谱法(GLC)测定维生素E的优点

可分离维生素E、其异构体及杂质，可选择性地测定维生素E

。适宜测定纯度不高的维生素E及维生素E制剂。中国药典测定维生素E及维生素E制剂均采用气相色谱法。（二）气相色谱法1、色谱条件及系统适应性试验色谱柱：2m×4mmI.D.硼硅玻璃柱，内装硅藻土（80-100目）或高分子多孔小球固定相：硅酮（OV-17）涂布浓度2%的填充柱固定液→100%二甲基聚硅氧烷毛细管柱载气：N2，流速:含2%固定相：以18-20分钟为宜；含5%固定相：以30-32分钟为宜柱温：265℃内标：正三十二烷检测器：FID（氢火焰离子化检测器）4、溶液配制：内标溶液：正三十二烷的环己烷溶液（1.0mg/ml）对照溶液：对照品溶解于内标溶液中(1mg/ml)供试品溶液：供试品约50mg，用内标溶液，溶解并稀释至50ml3、供试品测定

f×Ax×MsAs

Ax：供试品峰面积F：校正因子

As:内标物的峰面积2、系统适用性试验：n≥500（按维生素E计算）R≥2（维生素E与内标物正三十二烷的分离度）mg=★定量法:内标法加校正因子1KAA=内对2KAA=内样实际工作中的计算方法本品含C31H52O3应为96.0~102.0%2、测定方法：取供试品液和对照品液各20μl注入高效液相色谱仪中，记录峰高HX和Hr3、计算：供试品中维生素E的量mx(mg)=式中：mr—为生育酚对照品的量，Hx、Hr—为生育酚供试品、对照品中检测得峰高。维生素E的荧光分光光度法同步扫描直接（内源）荧光法[原理]：维生素大多含有芳香环结构（大的共轭键结构），本身具有较强的天然荧光，因此可以利用内源荧光检测维生素。如血液中维生素E295nm激发，325nm处测量。扫描过程中使激发波长（ex）和发射波长（em）彼此间保持固定的波长间隔em-ex=△（本实验中△为常数40nm）在△保持固定的情况下，同步荧光的信号强度便与待测物质的浓度成正比直接295nm激发，325nm处测量。则溶剂Raman光谱严重干扰测定!同步荧光扫描技术（可变角同步扫描技术）（三）荧光分光光度法1、药物本身