第六章芳酸及其酯类药物的分析2010

第六章芳酸及其酯类药物的分析AnalysisofAromaticcarboxylicacids&esters分析与药分教研室：苏丽娜苯甲酸类水杨酸类其它§1典型药物分类与性质苯甲酸丙磺舒甲芬那酸1、苯甲酸类一、分类甲芬那酸

mefenamicacid丙磺舒

probenecid苯甲酸

benzoicacidandsodiumbenzoate2、水杨酸类水杨酸

阿司匹林对氨基水杨酸钠双水杨酯贝诺酯二氟尼柳水杨酸

salicylicacid阿司匹林aspirin

对氨基水杨酸钠sodiumaminosalicylate

双水杨酯salsalate贝诺酯benorilate二氟尼柳diflunisal12氯贝丁酯clofibrate布洛芬ibuprofen3、其他芳酸类氯贝丁酯clofibrate布洛芬ibuprofen1、结构分析包括：芳酸、芳酸酯、芳酸盐共同点：苯环、羧基

不同点：不同的取代基（如酚羟基、芳伯氨基等）

二、结构与性质2、性质（一）物理性质

（1）固体具有一定的熔点

（2）溶解性

游离芳酸类药物几乎不溶于水，易溶于有机溶剂；芳酸碱金属盐及其它盐易溶于水，难溶于有机溶剂。

（二）化学性质

1.芳酸具游离羧基，呈酸性，其pKa在3～6之间，属中等强度的酸或弱酸；

pKa=2.95pKa=3.49pKa=4.26取代基为吸电子基团，酸性↑取代基为斥电子基团，酸性↓—X、—NO2、—OH等—CH3、—NH2等邻位取代>间位、对位取代，尤其是邻位取代了酚羟基，由于形成分子内氢健，酸性大为增强

2.芳酸碱金属盐易溶于水，水解，溶液呈碱性，但碱性太弱，所以其含量测定方法为双相滴定法或非水碱量法。

3.芳酸酯可水解，利用其水解得到酸和醇的性质可进行鉴别；利用芳酸酯水解定量消耗氢氧化钠的性质，可用水解后剩余滴定法测定含量；芳酸酯类药物还应检查因水解而引入的特殊杂质。

4.UV

5.IR

6.取代芳酸类药物可利用其取代基的性质进行鉴别和含量测定。如具有酚羟基的药物可用FeCl3反应鉴别；具芳伯氨基的药物可用重氮化—偶合反应鉴别、亚硝酸钠滴定法测定含量。

7.色谱法—制剂分析§2鉴别试验（一）与铁盐的反应

具酚羟基或水解后能产生酚羟基的药物1.水杨酸类药物（三氯化铁反应）水杨酸类药物PH4-6紫色配合物+FeCl3药物实验方法结果

水杨酸水溶液与三氯化铁试液反应紫堇色

阿司匹林加热水解后与三氯化铁试液反应紫堇色加乙醇溶解后与三氯化铁试液反应深紫色对氨基水杨酸钠加稀盐酸呈酸性后与三氯化铁试液反应紫红色

贝诺酯加氢氧化钠试液煮沸水解后加盐酸呈微酸性后反应紫堇色双水杨酯稀溶液与三氯化铁反应紫色

二氟尼柳2.苯甲酸盐赭色↓+FeCl3

中性或碱性3.丙磺舒+FeCl3PH5.0-6.0米黄色↓4.布洛芬[JP(15)]5.氯贝丁酯（异羟肟酸铁反应）芳香第一胺类鉴别反应具芳伯氨基或潜在芳伯氨基的药物

（二）重氮化偶合反应潜在芳伯氨基盐酸或硫酸加热水解游离的芳伯胺基

NaNO2/HCl重氮盐橙红色沉淀碱性β-萘酚贝诺酯benorilate甲芬那酸＋H2SO4△黄色并产生绿色荧光（三）氧化反应棕绿色深蓝色（四）水解反应溶于醋酸铵，100-105℃干燥，熔点156-161℃1、苯甲酸盐（五）分解产物的反应2、含硫的药物（丙磺舒）白色显硫酸盐反应（六）UV特征吸收（七）IR吸收光谱（八）薄层色谱法

二氟尼柳胶囊

（Ch.P2005）（九）高效液相色谱法阿司匹林肠溶胶囊与泡腾片Aspirin副产物生产工艺§3特殊杂质检查

一、阿司匹林水杨酸炽灼残渣易碳化物溶液的澄清度

重金属Aspirin一般杂质特殊杂质阿司匹林中游离水杨酸的检查

（1）杂质来源原料残存（生产过程中乙酰化不完全）、水解产生（贮存过程中水解产生）（2）检查方法对照法

反应原理

三氯化铁反应毒

限量

原料：0.1%（比色法）；阿司匹林片：0.3%

（比色法）；阿司匹林肠溶片：1.5%

（比色法）

；阿司匹林肠溶胶囊、泡腾片、栓剂：3.0%（HPLC法）二、对氨基水杨酸钠中间氨基酚的检查

1.杂质来源原料残存、脱羧产生

2.检查方法（1）ChP（2005）含量测定法（双相滴定法）。利用对氨基水杨酸钠不溶于乙醚，间氨基酚溶于乙醚的性质，使二者分离后，在乙醚中加水适量，用盐酸滴定，控制盐酸滴定液体积以控制间氨基酚限量。

样品3.0g用乙醚提取，加入H2O，用HCl滴定液（0.02mol/L)滴定，生成杂质·HCl（转溶入H2O相，甲基橙指示剂）。滴定液不得过0.30ml（2）

USP（29）离子对HPLC法（内标法）

固定相C18

流动相NaH2PO4(0.05mol/L)-Na2HPO4(0.05mol/L)-CH3OH(含氢氧化四丁基铵1.9g)(425：425：150)检测波长254nm

内标磺胺

离子对色谱：在色谱体系中加入一种与原样品离子电荷相反的离子对试剂；由于形成离子对，存在动态离子交换或离子相互作用二种化学平衡，从而改变样品在两相中的分配，使离子性溶质保留行为和分离选择性发生显著变化。A、离子对试剂的选择：离子对试剂所带电荷应与试样离子的电荷相反酸类或带负电荷的物质常用季铵盐作离子对碱类或带正电的物质常用烷基磺酸盐或硫酸盐作离子对B、流动相PH的选择：调节PH使试样组分和离子对试剂全部离子化，将有利于离子对的形成；改善弱酸或弱碱试样的保留值和分离选择性。。强酸（磺酸染料）2－7.5强碱（季铵碱、生物碱）2－8弱酸（氨基酸、羧酸、水溶性维生素、磺胺类）5－7.5弱碱（儿茶酚胺、烟酰胺、有机胺）2－5C、流动相中所含有机溶剂的比例越高，组分的K值越小；被测组分或离子对试剂的疏水性越强，需有机溶剂的比例越高。三、二氟尼柳中有关物质的检查

ChP（2005）正相TLC

以供试品自身对照法进行有关物质检查－－－高低浓度对比法（1）有关物质A方法：供试品对照品判断：②供试品溶液所显杂质斑点不得深于对照溶液的主斑点（或荧光强度）①控制杂质斑点个数，控制杂质种类优点：以供试品的稀溶液作为对照液，不需要杂质对照品，简单、价廉，还可配成几种限量的对照溶液；缺点：不同物质，不同Rf值比较，准确度差、直观性差。（2）有关物质BChP（2005）反相HPLC以供试品自身对照法进行有关物质检查－－－高低浓度对比法各杂质峰面积的和不得大于对照溶液主峰面积四、甲芬那酸中特殊杂质的检查五、氯贝丁酯中对氯酚及挥发性杂质的检查GC对氯酚（0.0025%）挥发性杂质（0.5%）GC法5%SE-302m160℃，N2FID

§4含量测定一、酸碱滴定法1.直接滴定法

pKa3～6苯甲酸、丙磺舒、水杨酸、二氟尼柳、双水杨酯、布洛芬阿司匹林

取本品约0.4g，精密称定，加中性乙醇（对酚酞指示液显中性）20ml，溶解后，加酚酞指示液3滴，用氢氧化钠滴定液（0.1mo1/L）滴定。每lml的氢氧化钠滴定液（0.1mo1/L）相当于18.02mg的C9H8O4。（1）测定方法及计算

Ka=3.27×10-4

反应摩尔比为1∶1

（2）讨论①中性乙醇溶解阿司匹林且防止酯键水解。“中性”是对酚酞指示液显中性，可消除滴定误差。

②优点：简便、快速

缺点：酯键水解干扰（不断搅拌、快速滴定）酸性杂质干扰（如水杨酸）③适用范围：不能用于含水杨酸过高或制剂分析，只能用于合格原料药的含量测定2.水解后剩余滴定法酯的一般含量测定方法阿司匹林USP（29）、JP（14）方法：取本品约1.5g，精密称定,加入氢氧化钠滴定液（0.5mo1/L）50.0m1，混合，缓缓煮沸10min，放冷，加酚酞指示液，用硫酸滴定液（0.25mo1/L）滴定剩余的氢氧化钠，并将滴定结果用空白试验校正。每1ml的氢氧化钠滴定液（0.5mol/l）相当于45.04mg的C9H8O4。2NaOH（过量）＋H2SO4Na2SO4＋2H2O剩余滴定：水解：

反应摩尔比为1∶2

优点：消除了酯键水解的干扰缺点：酸性杂质干扰

3.两步滴定法阿司匹林片、阿司匹林肠溶片氯贝丁酯

如阿司匹林片的测定：取本品10片，精密称定，研细，精密称取适量（约相当于阿司匹林0.3g），置锥形瓶中，加中性乙醇（对酚酞指示液显中性）溶解后，振摇使阿司匹林溶解，加酚酞指示液3滴，滴加氢氧化钠滴定液（0.1mol/L）至溶液显粉红色，再精密加氢氧化钠滴定液（0.1mol/L）40m1，置水浴上加热15分钟并时时振摇，迅速放冷至室温，用硫酸滴定液（0.05mol/L）滴定，并将滴定的结果用空白试验校正。每lml的氢氧化钠滴定液（0.1mo1/L）相当于18.02mg的C9H8O4。

第一步中和第二步水解后剩余滴定水解：2NaOH（过量）＋H2SO4Na2SO4＋2H2O

反应摩尔比为1∶1

本法消除了酸性杂质的干扰，降低了酯键水解的干扰剩余滴定：片剂含量测定结果的计算

剩余滴定法

取本品30片，研细，用中性乙醇30ml，分数次研磨，并移入50ml量瓶中，充分振摇，再用水适量洗涤研钵数次，洗液合并于50ml量瓶中，再用水稀释至刻度，摇匀，滤过，精密量取滤液15ml（相当于阿司匹林0.3g），置锥形瓶中，加中性乙醇（对酚酞指示液显中性）20ml，振摇，使阿司匹林溶解，加酚酞指示液3滴，滴加氢氧化钠滴定液(0.1mol/L)至溶液显粉红色，再精密加氢氧化钠滴定液(0.1mol/L)40ml，置水浴上加热15分钟并时时振摇，迅速放冷至室温，用硫酸滴定液(0.05mol/L)滴定，并将滴定的结果用空白试验校正。每1ml氢氧化钠滴定液(0.1mol/L)相当于18.02mgC9H8O10。药分实验：

氯贝丁酯（两步滴定法）消除供试品中共存的酸性杂质二、亚硝酸钠滴定法（对氨基水杨酸钠）具芳伯氨基或潜在芳伯氨基（芳酰氨基水解或硝基还原）的药物+HCl+NaCl三、双相滴定法芳酸碱金属盐

如苯甲酸钠

ChP(2005)微溶于水酸性

苯甲酸钠为芳酸碱金属盐，易溶