临床酶学检验技术教学文稿

临床(línchuánɡ)酶学检验技术临床(línchuánɡ)生物化学检验林孟戈第一页，共30页。第一节酶学基本知识●酶的本质---绝大部分的酶是蛋白质，有些酶是核酸和酶蛋白组成的复合体，极少数酶的本质是核酸。●酶的特性---极高的催化效率(xiàolǜ)、高度的特异性(specificity)以及催化作用的可调节性●酶的结构与功能单纯酶酶蛋白(apoenzyme)结合酶辅酶(coenzyme)辅因子(cofactor)辅基(prostheticgroup)第二页，共30页。●酶是蛋白质，具有一、二、三级结构，有些酶还具有四级结构。●单体酶(monomericenzyme)---只由一条多肽链构成●寡聚酶(oligomericenzyme)---由多个(duōɡè)相同或不同亚基以非共价键连接的酶●多酶体系(multienzymesystem)---由几种不同功能的酶彼此聚合而成的多酶复合物●酶的必需基团(essentialgroup)---与酶的活性密切相关的基团●酶的活性中心(activecenter)---组成具有能与底物结合并起催化反应的特定空间结构区域第三页，共30页。酶的命名(mìngmíng)、分类与编号●酶的命名(mìngmíng)---习惯命名(mìngmíng)法、系统命名(mìngmíng)法●酶的分类---可分为六大类氧化还原酶(oxido-reductases)、转移酶(transferases)、水解酶(hydrolases)、裂解酶(或裂合酶)(lyases)、异构酶(isomerases)、合成酶(或连接酶)(synthetases或ligases)●酶的编号---用4个数字加以系统编号第一个数字表示酶的类别，第二个表示亚类，第三个表示亚-亚类，第四个表示酶的编号序数。第四页，共30页。习惯用名英文缩写EC编号(biānhào)系统名乳酸脱氢酶LD（LDH）1.1.1.27L乳酸：NAD+氧化还原酶单胺氧化酶MAO1.4.3.4单胺：氧化还原酶γ-谷氨酰转移酶γ-GT/GGT2.3.2.2γ-谷氨酰肽：氨基酸γ-谷氨酰转移酶门冬氨酸氨基转移酶AST2.6.1.1L-门冬氨酸：α-酮戊二酸氨基转移酶（谷草转氨酶）(GOT)丙氨酸氨基转移酶ALT2.6.1.2L-丙氨酸：α-酮戊二酸氨基转移酶（谷丙转氨酶）(GPT)肌酸激酶CK2.7.3.2三磷酸腺苷：肌酸转磷酸酶碱性磷酸酶ALP(AKP)3.1.3.1正磷酸单酯磷酸水解酶临床酶学分析中常用酶的名称(míngchēng)与编号第五页，共30页。第六页，共30页。三、酶促反应(fǎnyìng)动力学（一）酶促反应(fǎnyìng)方程第七页，共30页。（二）酶促反应(fǎnyìng)进程第八页，共30页。（三）酶动力学参数(cānshù)1．反应速度(fǎnyìngsùdù)2．米氏常数(1)初速度指在反应最初阶段底物的消耗量很小（一般在50%以内）时的反应速度(fǎnyìngsùdù)(2)最大反应速度(fǎnyìngsùdù)指当酶的结合位点与底物结合饱和时的反应速度(fǎnyìngsùdù)第九页，共30页。(四)酶偶联反应(fǎnyìng)ABCD

酶学分析中作为(zuòwéi)试剂用于测定化合物浓度或酶活性浓度的酶Ei——指示(zhǐshì)酶Ea——辅助酶ExEiEa工具酶第十页，共30页。第十一页，共30页。第二节血清酶变化(biànhuà)的生理病理机制一、血清酶的来源与去路（一）血清酶的来源1．血浆固有(gùyǒu)酶2．非血浆固有(gùyǒu)酶①外分泌酶②细胞酶（二）血清酶的去路1．肾小球滤过从尿液中排出2．网状内皮系统清除3．血管内失活或灭活第十二页，共30页。二、血清酶变化(biànhuà)的生理病理机制（一）血清酶的生理差异1．性别2．年龄3．饮食4．运动5．妊娠（二）血清酶变化的病理机制1．酶合成异常2．细胞内酶的渗漏3．酶进入(jìnrù)血液的方式4．其他血管内的抑制作用、清除速度第十三页，共30页。(一)酶活性单位1．惯用单位2．国际单位---在特定的条件下，一分钟内使底物转变(zhuǎnbiàn)一微摩尔的酶量为一个国际单位。3．Katal单位---在规定条件下，每秒钟催化转化一摩尔底物的酶量。1katal＝60×106U

第三节酶含量的表示(biǎoshì)方法一、酶活性浓度(nóngdù)表示法第十四页，共30页。（二）酶活性浓度指单位体积样品中的酶活性单位（三）正常上限(shàngxiàn)升高倍数（ULN)是指用测得的酶活性结果除以参考范围上限(shàngxiàn)第十五页，共30页。第十六页，共30页。二、酶蛋白质量浓度(nóngdù)表示法测定(cèdìng)酶蛋白质量浓度优点：①灵敏度高②特异性高③可测定无活性的酶④与酶活性测定一起，计算(jìsuàn)免疫比活性⑤在同工酶测定中更有价值第十七页，共30页。第四节酶催化活性浓度测定的理论(lǐlùn)基础一、定时(dìnɡshí)法二、连续监测法第十八页，共30页。（三）连续监测法的方法(fāngfǎ)设计1．以人工合成色素原做底物的连续监测2．NAD(P)H的连续监测3．以Trinder反应做指示(zhǐshì)反应的连续监测4．特殊反应类型的连续监测第十九页，共30页。第五节酶活性测定的影响因素与最适条件(tiáojiàn)的确定一、方法(fāngfǎ)因素的影响（一）正向反应与逆向反应（二）检测底物或检测产物（三）底物启动(qǐdòng)模式与样品启动(qǐdòng)模式第二十页，共30页。二、测定条件的影响(yǐngxiǎng)与最适条件的确定（一）底物种类和浓度（二）缓冲液种类、pH和离子强度（三）反应温度（四）辅助(fǔzhù)因子和激活剂（五）抑制剂（六）酶偶联法中的辅助(fǔzhù)酶和指示酶（七）延滞期与线性期的确定（八）样品与试剂比例第二十一页，共30页。三、其他因素对测定结果(jiēguǒ)的影响（一）仪器（二）校准物（三）实验(shíyàn)参数（四）副反应第二十二页，共30页。第六节同工酶检测(jiǎncè)技术一、电泳(diànyǒnɡ)法二、抑制法三、其他方法（一）热变性（二）亲和层析法第二十三页，共30页。免疫抑制法利用同工酶的一种(yīzhǒnɡ)亚基与相应的抗体结合后，酶活性受到抑制，测定加与不加抗体前后样品中酶活性的变化，可以计算出该型同工酶的活性。不加抗CK-MM血清时样品的CK活性：CK-MM和CK-MB活性；加入抗CK-MM血清时样品的CK活性：50％CK-MB的活性；加入抗CK-MM血清时样品的CK活性×2：CK-MB活性；所测CK-MM和CK-MB之总活性－CK-MB活性＝CK-MM活性。第二十四页，共30页。第七节目前(mùqián)常用诊断酶的酶活性测定一、丙氨酸氨基转移酶与门冬氨酸氨基转移酶的测定(cèdìng)第二十五页，共30页。L-丙氨酸＋α-酮戊二酸α-丙酮酸＋L-谷氨酸丙酮酸＋NADH＋H+乳酸(rǔsuān)＋NAD+ALT（样品(yàngpǐn)）LD（试剂(shìjì)）酶耦联法测定ALT340nm－△A/minα-酮酸标本中GLDH