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文档简介

实验(shíyàn)九酪氨酸酶的动力学第一页，共11页。1.学会(xuéhuì)测定酶反应速度的基本方法。2.掌握测定米氏常数Km值的原理和方法。【目的(mùdì)和要求】第二页，共11页。【实验(shíyàn)原理】酪氨酸酶催化(cuīhuà)的反应为：475nm第三页，共11页。常用单位时间内、产物的浓度(nóngdù)增加量表示。一、酶活力测定(cèdìng)—酶反应初速度的测定(cèdìng):TimeProductConcentrationv=dC/dtA=εCd:3600M-1cm-1d:1cm确定(quèdìng)酶反应时间！第四页，共11页。二、底物(dǐwù)浓度[S]对酶反应速度：一级反应混合级反应零级反应Effectofsubstrateconcentrationontheinitialvelocityofanenzyme-catalyzedreaction.½VmaxKm第五页，共11页。Km值测定(cèdìng):双倒数作图法第六页，共11页。（一）酶反应初速度的测定(cèdìng)：---酶反应时间的确定在比色杯中，按下表依次(yīcì)加入试剂：【实验(shíyàn)方法】加入酶液后立即混匀，并每隔15秒读取475nm处的吸光值。L-多巴（mL）1磷酸缓冲液（mL）1.97酪氨酸酶（mL）0.03注：酪氨酸酶5U/l第七页，共11页。绘制产物浓度C-Time反应曲线，观察酶反应初速度，确定(quèdìng)酶反应时间。一般在30~120秒左右。时刻（秒）A时刻（秒）A0135151503016545180601957521090225105240120255各时刻(shíkè)的吸光值记录在下表：第八页，共11页。（二）米式常数(chángshù)的测定：在比色杯中(bēizhōnɡ)，采用已确定的酶反应时间X，分别记录各管反应开始时A0和X秒钟后的A1。管号15mML－多巴(ml)磷酸缓冲液（ml）

酪氨酸酶（ml）

10.22.770.0320.32.670.0330.42.570.0340.52.470.0350.62.370.03每管反应(fǎnyìng)体系仍为3ml。第九页，共11页。记录(jìlù)数据于下表：利用双倒数(dǎoshù)作图法，横坐标为1/S，纵坐标为1/v，分别求出Vmax和Km。管号L－多巴浓度（mM）A0A1ΔA（A1-A0）V（mM/min）12345第十页，共11页。【思考题】1.

为什么酶活力测

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