孤啡肽对DGP胃动力的影响 5100字

孤啡肽对DGP胃动力的影响5100字【摘要】目的：探讨糖尿病胃轻瘫〔DGP〕大鼠血浆孤啡肽〔OFQ〕的变化与胃轻瘫的关系及意义.研究孤啡肽对DGP胃排空的作用.办法:SPF级雄性Wistar大鼠90只随机分为正常对照组(n=15)和实验组(n=75).正常对照组以普通饲料喂养20wk，实验组以高脂高糖饲料喂养6wk后小剂量链脲佐菌素(STZ)腹腔注射加高糖高脂饲料及饮食失节法继续诱导20wk，建立糖尿病模型.应用放射性核素胃排空法筛检出DGP及糖尿病(DM)大鼠模型.采用酶联免疫法测定空腹血浆OFQ，而后将DGP再随机分为3组,分别给予OFQ0.6,6.0,60.0nmol/kg静脉注射，每日1次,连续5d,再次测定胃排空.结果：正常对照组、DM组及DGP组胃半排空时间(GET1/2)分别为(61.9±4.6),(66.5±2.3),(168.9±10.6)min,DGP组GET1/2较正常对照组、DM组显著延迟,差别有统计学意义(P【关键词】孤啡肽；糖尿病并发症；胃肌轻瘫；胃排空；大鼠

0引言

糖尿病性胃轻瘫〔diabeticgastroparesis，DGP)以胃肠动力缺乏为主要特征.目前临床治疗主要应用促进胃肠动力的药物缓解病症，疗效欠佳.孤啡肽(OrphaninFQ,OFQ)或痛敏素(nociceptin)是一种具有拮抗吗啡镇痛作用的内源性阿片肽类物质.有研究认为OFQ是一种胃肠道内的活性肽类物质和胃肠功能的内源性神经调节剂［1］.对于OFQ的研究目前主要集中在减轻疼痛和其他生理活动中的作用，其胃肠功能调节的生物学效应尚未完全阐明.研究DGP大鼠血浆OFQ的变化、OFQ对DGP大鼠胃排空的作用、以及OFQ剂量与胃排空的关系，将有助于拓宽胃肠动力紊乱的治疗思路.

1材料和办法

1.1材料SPF级雄性Wistar大鼠90只,体质量(225±15)g，由甘肃中医学院SPF动物实验中心提供；链脲佐菌素(STZ)购自美国Sigma公司；血糖测定仪及试纸由强生公司提供；OFQELISA试剂盒为美国ADL公司的产品;MK《2酶标仪JZW《I《20；OFQ由兰州大学生命科学学院人体与动物机能实验室提供；同位素99mTc2二亚乙三胺五醋酸(DTPA)由中国医学科学院同位素研究所提供；以色列ElscintHelix公司的双探头单光子发射计算机断层照相仪.

1.2办法

1.2.1动物分组与实验处理随机选取15只大鼠作为正常对照组，该组以普通饲料喂养.另75只为实验组大鼠,以高脂高糖饲料〔100g/L猪油、200g/L白糖﹑25g/L胆固醇，10g/L胆酸盐﹑665g/L常规饲料〕饲养，两组诱导6wk后正常对照组经腹腔注射等量枸橼酸钠缓冲液，实验组经腹腔注射枸橼酸缓冲液配制的链脲佐菌素〔STZ〕(30mg/kg).72h后尾静脉采血测定空腹血糖，以空腹血糖高于16.7mmol/L确定为糖尿病模型建立成功.有65只达标，8只不达标，造模过程中死亡2只.3d后补注STZ〔15mg/kg,ip〕，测定血糖2只达标，6只不达标剔除实验.67只糖尿病大鼠造模成功后，不用胰岛素和任何降糖药物控制血糖.以高脂高糖饲料以及饮食失节法继续饲养20wk，每周检测血糖和体质量，20wk后应用放射性核素胃排空法，以正常对照组为正常范围［2］，筛检出DGP大鼠53只，将胃排空功能正常的大鼠设为糖尿病组〔n=14〕.随机选取DGP大鼠〔n=16〕心脏采血,别离血浆,置-80℃超低温冰箱保留，待测.残余37DGP只大鼠，其中3只于尾静脉注射过程中在固定器内窒息死亡，残余34只再随机分为3组,分别给予OFQ0.6〔n=10),6.0(n=12).60.0nmol/kg(n=12)尾静脉注射,连续5d，每日1次,第5日注射后再次进行胃排空、体质量及血糖测定.

1.2.2核素胃排空功能测定采用同位素闪烁计数法(APEXSP26,ElscintInc公司)检测胃排空功能.大鼠禁食12h、禁水6h后，应用含有同位素99mTc2DTPA标记的蒙牛纯牛奶大鼠腹部为目标区〔窗宽20％，矩阵128×128，放大倍数3.0〕，行放射性活性1.5mL(99MTc《DTPA0.5mCi)，通过灌胃器迟缓注入胃内.之后立即将大鼠仰卧绑缚于特制固定架上，以采集.前半小时每5min采集1次，然后每15min采集1次，共采集11次，连续测定90min.通过随机软件，计算出各项指标的校正值及胃的排空曲线.

1.2.3酶联免疫法测定血浆OFQ大鼠空腹12h〔禁食不禁水〕后在吸入乙醚麻醉后对各组进行心脏采血，血液置入预冷的含抑肽酶(500IU/L)和乙二胺四乙酸二钠(EDTANa2，10g/L)的塑料指型管中，充沛混匀后，4℃，3000r/min，离心10min，留取血浆-80℃保留，统一采用ELISA办法测定孤啡肽，各步骤严格按照表明书操作.

统计学处理：各组指标用x±s表示,组间差别用方差分析,以P2结果

2.1大鼠体质量正常对照组大鼠体质量在实验期间由(223±16)g增至(420±18)g，实验组大鼠初始体质量为(221±29)g,与正常对照组大鼠体质量差别无统计学意义(P>0.05，图1〕.造模前6wk实验组大鼠体质量增长迅速，经STZ诱导为糖尿病模型20wk后,实验组大鼠体质量较成模前明显下降(P0.05).

2.2大鼠血糖正常对照组大鼠的初始血糖为(5.7±0.6)mmol/L,20wk后为(7.1±0.5)mmol/L，前后差别无统计学意义(P>0.05).DM,DGP大鼠在腹腔注射STZ72h后其空腹血糖水平［(23.5±5.2),(22.9±4.3)mmol/L］较正常对照组大鼠显著增高，差别有统计学意义(P0.05).

2.3胃半排空时间、胃内核素残留率正常对照组大鼠胃半排空时间(GET1/2)为(61.9±4.6)min，90min后胃内核素残留率为(46.4±3.6)%.以正常对照组为正常范围,筛检出DGP大鼠,DGP组大鼠GET1/2为(168.9±10.6)min,90min后胃内核素残留率为(85.6±2.9)%,均显著延迟或高于正常对照组和DM组,差别有统计学意义(P0.05〕.

DGP：糖尿病胃轻瘫；DM：糖尿病.

图13组大鼠体质量的变化〔略〕

2.4血浆OFQ含量与胃半排空时间相关性分析正常对照组大鼠血浆OFQ与DM组比拟差别无统计学意义［(9.83士5.70)vs(8.90士3.50)ng/L,P>0.05)］.DGP组大鼠血浆OFQ［(5.30士1.70)ng/L］与DM组、正常对照组比拟差别有统计学意义(P图2血浆孤啡肽与胃半排空时间相关性〔略〕

2.5DGP大鼠在OFQ治疗前后的胃半排空时间3组DGP大鼠给药后GET1/2都较本组治疗前显著缩短,前后比拟差别有统计学意义(P0.05).

表13种剂量孤啡肽治疗糖尿病胃轻瘫大鼠胃半排空时间的比拟〔略〕

aP3讨论

DGP的胃肠动力障碍，不仅影响患者食物的吸收和消化,还因影响口服药物的吸收而给糖尿病的治疗带来极大的干扰.目前认为可能是自主神经功能障碍、胃肠激素分泌异常、高血糖、平滑肌损害以及微血管病变等因素综合影响的结果.OFQ是一种新近发现的内阿片肽,与经典的阿片肽一样属于脑肠肽，作为一种胃肠道内的活性肽类物质，它是一种新的胃肠功能的神经调节剂［1］.许多学者证实OFQ与经典的阿片肽一样定位于大鼠的肠神经系统，属于肠神经系统的神经递质，参与肠神经系统对胃肠动力、内分泌、粘膜血流及免疫功能的调节［3］.相对于胃肠道来讲，肠神经系统的作用要大于中枢神经系统.OFQ作为重要的脑肠肽之一,高度叙述于胃肠神经系统而非平滑肌上［4］.Krowicki等［5-6］发现静脉注入0.6～60.0nmol/kgOFQ可提高大鼠胃的收缩活性，提高胃内压.有研究检测了健康人、肝硬化到肝癌患者的血浆OFQ水平,证实呈梯度升高趋势，可为临床诊治肝脏肿瘤提供旁证［7］.另外血浆OFQ在肝豆状核变性病［8］、慢性胆囊炎、慢性胃炎及十二指肠球部溃疡中皆升高，在急性胰腺炎呈现进行性升高［9］.而在糖尿病胃动力障碍的长期慢性状态下血浆OFQ水平的变化目前尚未见研究.本研究采用ELISA办法测定血浆OFQ水平，发现DGP组明显低于正常对照组和DM组,提示血浆OFQ水平在DGP时明显下降.以上的结果表明可能由于长期糖尿病造成了微血管、胃肠肌间神经和肠神经系统神经细胞变性，导致肽能神经受损［10］.使得定位于大鼠肠神经系统的内源性肠神经递质之一的OFQ减少，由于DGP大鼠体内不足促进胃肠动力的内源性神经肽OFQ,导致OFQ促进胃肠动力的作用减弱，从而引起DGP大鼠出现一系列胃肠动力障碍的胃肠道病症.并且随着血浆OFQ含量呈现下降趋势，GET1/2的延迟时间呈现延长趋势，相关性分析显示血浆OFQ水平与GET1/2呈显著负相关,提示血浆OFQ的含量越下降，胃排空延迟时间越长，表明OFQ在DGP的发病中起着重要的调节作用.本研究静脉给予0.6，6.0，60.0nmol/