实验三、口服扑热息痛生物利用度和药代动力学参数测定

实验三口服扑热息痛生物利用度

和药代动力学参数的测定生物药剂学与药物动力学实验课件一、实验目的:1.掌握口服给药后测定制剂生物利用度的原理和计算药物动力学参数的方法；2.熟悉扑热息痛血液样品的处理和检测；3.熟悉家兔口服给药。生物药剂学与药物动力学实验课件二、基本原理1.血管外给药药物动力学血管外给药途径包括口服、肌肉注射、皮下注射、透皮给药、粘膜给药等，相比于血管内给药，血管外给药后，药物有一个吸收过程。因此血管外给药后，药物的吸收和消除常用一级过程描述，即药物以一级速度过程吸收进入体内，然后以一级速度过程从体内消除，为一级药物动力学吸收模型。2.扑热息痛

为乙酰苯胺类解热镇痛药。通过抑制环氧化酶，选择性抑制下丘脑体温调节中枢前列腺素的合成，导致外周血管扩张、出汗而达到解热的作用，其解热作用强度与阿司匹林相似；通过抑制前列腺素等的合成和释放，提高痛阈而起到镇痛作用，属于外周性镇痛药，作用较阿司匹林弱，一般口服给药有效。扑热息痛口服易吸收，血药浓度0.5-1.0

h达峰值，吸收后在体内分布均匀，约有25%与血浆蛋白结合，大剂量时与血浆蛋白结合可达43%；因此本实验采用血浆作为测定样品（加肝素钠抗凝）。生物药剂学与药物动力学实验课件血管外给药后药物的吸收以及消除过程：X0X0为给药剂量；F为吸收率；Xa为吸收部位药量；Ka为一级吸收速率常数；X为体内药量；K为一级消除速率常数。药学代谢动力学公式：tmax=2.303/(Ka-K)lg(Ka/K)

Cmax=FX0/V*e-ktmax应用抛物线法拟合计算药代动力学参数（tmax、Cmax、K、Ka等），残数法计算ka、ka、V、t1/2、AUC。取近峰值三个血药浓度Ｃ－时间ｔ点，代入抛物线方程：Y=aX＋ｂｘ＋Ｃ生物药剂学与药物动力学实验课件FXaKaXK抛物线拟合tmax代入方程求Cmax２＝－ｂ／２ａ生物药剂学与药物动力学实验课件家兔口服给药操作示意图开口器生物药剂学与药物动力学实验课件所用材料日本大耳白或新西兰兔兔子固定器灌胃器具1.5

ml

EP管其它:肝素钠，漩涡振荡器，离心机，紫外检测仪，10

ml离心管,三氯醋酸等.扑热息痛片剂生物药剂学与药物动力学实验课件三、实验操作1.扑热息痛血药标准曲线的绘制：①标准溶液的配制：精密吸取400

ug/ml的浓储备液1.25,2.5,3.75,5.0,6.25

ml于100

ml容量瓶中，用蒸馏水定容得50,100,150,200,250

ug/ml的标准溶液。②空白血浆制备：将家兔耳缘静脉处拔毛，将耳缘静脉横向切开，采血9ml，装入1%肝素润洗过离心管，离心（2500r/min，15min）得上清空白血浆。③标准曲线绘制：取1.5

mlEP管，分别加入上述配制标准液0.5ml，加入空白血浆0.5ml，再加入0.5ml三氯醋酸，静止5

min，10000

rpm离心5

min，取上清液0.5

ml，加入3.5ml蒸馏水，涡旋1min，离心（4000rpm,10min)，取上清液在245

nm处测吸光度A（以空白血浆相同处理结果为对照），绘制浓度c-吸光度∆A标准曲线。2.口服给药途径血药浓度的测定①取体重2.5~3.0kg健康雄性家兔1只，禁食12

h，口服灌胃给药0.5g（1片）。分别在给药前（0时间）和给药后20、40、60、90、120、150、180

min用锐利刀片切割耳缘静脉，用肝素钠润洗好的EP管取血约1.5ml。②分离血浆：将取血后的EP管马上离心(10000r/min，15s)，取上清液血浆约0.5ml至一新的1.5mlEP管中。③沉淀蛋白：往血浆中加入0.5

ml三氯醋酸，蜗旋震荡后静止5

min，10000

rpm离心5

min，取上清液0.5

ml，加入3.5ml蒸馏水，涡旋1min，离心（4000r/min,10min)；取上清液在245

nm处测吸光度A（以空白血浆相同方法处理为对照），代入标准曲线计算浓度c。3.假设F=0.9，扑热息痛药物含量：90%，单室模型给药，求计算药动学相关参数：tmax、Cmax、K、Ka、t1/2、V、AUC。4.本实验3人一组：每组进行家兔口服给药及血药浓度药物动力学数据的计算。四、实验结果：生物药剂学与药物动力学实验课件T(min)20406090120150180△AC(μg/ml)二、扑热息痛血药浓度-时间表一、扑热息痛血药浓度与△A的标准曲线C=28.228*△A-6.6085C单位：ug/ml,r=0.99882三、药物动力学参数的计算结果生物药剂学与药物动力学实验课件作时间t-浓度C-lgC表，画lgC

–

t图，求算tmax、Cmax、K、Ka、t1/2、V、AUC。五、讨论与思考1.

做好本实验的关键是什么？操作中注意哪些

生物药剂学与药物动力学实验课件四、实验结果：生物药剂学与药物动力学实验课件T(min)20406090120150180△A0.02640.03230.04590.07840.07270.04740.0396C(μg/ml)二、扑热息痛血药浓度-时间表一、扑热息痛血药浓度与△A的标准曲线C=28.228*△A-6.6085C单位：ug/ml,r=0.99882生物药剂学与药物动力学实验课件六、参考结果：序号时间（min）不同波长下吸光度△A浓度（mg/ml）245nm1200.2740.10.18412400.1680.070.12893600.1390.0640.11784900.1550.0620.114151200.2630.0560.103161500.1480.0560.103171800.2740.10.1841C=28.228*△A-6.6085C单位：ug/ml,r=0.9988二、扑热息痛血药浓度-时间表一、扑热息痛血药浓度与△A的标准曲线生物药剂学与药物动力学实验课件T(min)20406090120150180C(mg/ml)1.841.291.1781.1411.0311.0311.841lgC0.2650.1100.0710.0570.01330.0130.265二、扑热息痛口服灌胃后时间t

–

C

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lgC表生物药剂学与药物动力学实验课件七、注意事项：（1）为得到血浆，需将盛放血液的EP管加低浓度肝素钠（肝素钠：蒸馏水=1：9）1滴润洗，防止血液凝固；（2）本实验家兔给药前要先取空白血浆，血样处理方法与含药血浆相同；（3）扑热息痛药物用灌胃前用5ml蒸馏水配成混悬液，灌胃后再用5ml蒸馏水冲洗烧杯和管路；（4）灌胃操作小心，防止家兔将灌胃管咬断；灌胃前先通水试一下灌胃管是否通畅；给药时要确定导管进入兔子食道，可将导管插入口腔2/3后用吹气实验进行验证，看水杯中是否有气泡冒出，防止给药入气管从而导致动物死亡；（5）所得浓度数据需*16，才是家兔真正的血中药物浓度；数据计算和计算的过程均需