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文档简介

FRET术研究目标蛋白之间在小鼠神经（经质胞）的相互作用一术本理（即发生FRET是通过可以也就并且保证了供体CFP（protein）、YFP（yellowprotein与YFP当用CFP，CFP的发以CFP的发射荧的的6对空质a和b间的据FRET原：（protein）、蛋白bYFP（yellow）用CFP长质a与，CFP与是CFP为476nm质与b由于质b质CFP是的为质-青色荧光蛋白报告载体，如下图一．质粒的选择及载体构建：订购：带有SalI和II两个切位点的小PEDF表达克隆质粒带有I和Xba个酶切位点的小鼠目标蛋白过表达克隆质粒pECFP．质粒pEYFP．质SalI、SacIII、XbaI内切酶dna合成酶等PEDF（pECFP-C1）表达载体的构建及鉴定鼠列blst1的的入al和acIIF：、GTCGAC-atgcaggccctggtgctact-3、R：、、中GTCGAC为点alI，CCGCGG为酶点SacII。引物中未粒pedf的有文体将到pECFP-C1中，不知道这个实验需要不需要做这一盒Cloned将。pECFP-C1酶化(~4．盒胶NA／PCR—A：DV805A)1．DNA于／质的的’入pnXbaF：、。。。。。。-3、R：、。。。-3、中GTCGAC为点pn，，CCGCGG点点XbaI。引物中5基AT。pEYFP-C1-目标粒ECFP-C1-YFP的构建及鉴定55中GTCGAC为S，为酶．PEDF和目标蛋白在神经细胞（或胶质细胞）中FRET研究2.PEDF蛋白和目标蛋白在神petri皿里。PBS胞用15min，PBS液洗用0.5％Triton孔5min用PBS洗次用％闭30min将用％BSA按：1000的用PBS洗C孵1用BS洗3加200ulFluo—Antimedium防止荧光淬灭，在共聚焦显微镜下观察。染48h后荧光显微镜下观察并拍照后胞提取总蛋白进行FRET：将和于，pECFP-PEDF和EYFP-目：

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