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文档简介

实验四

电泳技术概论

血清蛋白质醋酸纤维薄膜电泳

动物医学院动物生化教研室1了解电泳的概念和一般原理；掌握醋酸纤维薄膜电泳的操作技术；判别动物血清中各种蛋白组分一、实验目的2二、实验原理

电泳Electrophoresis带电颗粒在电场的作用下向着与其所带电荷相反的方向迁移的现象。

不同溶质由于所带电荷性质，数量以及分子大小、形状不同，在电场中的泳动方向和速度不同而被分离.

同向电泳与电泳速度（mobility）有关，一般称迁移率。3式中r是球状分子的半径，η是缓冲液粘度，υ是电泳速度(υ=d/t，单位时间粒子运动的距离，cm/s)。电泳迁移率（m）是指在单位电场强度（1V/cm）时带电分子的迁移速度：

所以：

由上式可以看出，迁移率与带电分子所带净电荷成正比，与分子的大小和缓冲液的粘度成反比。电泳迁移率（Mobility，m）4电泳分类

⑴纸电泳（Paperelectrophorisis）⑵醋酸纤维薄膜电泳（CelluloseAcetateelectrophoresis）⑶琼脂凝胶电泳（AgarGelelectrophoresis）⑷聚丙烯酰胺凝胶电泳（PolyacrylamideGelelectrophoresisPAGE）⑸SDS－聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS－PAGE）。按支持介质的不同可分为：5

按支持介质形状不同可它为

⑴薄层电泳；⑵板电泳（水平和垂直）；⑶圆盘柱状电泳按用途不同可分为

⑴分析电泳；⑵制备电泳；⑶定量免疫电泳；

按所用电压不同可分为

⑴低压电泳：100V～500V，电泳时间较长⑵高压电泳：1000V～5000V，电泳时间短6影晌电泳分离的主要因素

1.待分离生物大分子的性质（各自的电荷和形状大小）

2.缓冲液的性质（缓冲液的pH值，缓冲液的离子强度）

3.电场强度

（V/cm）是每cm的电位降，也称电位梯度。与电泳速度正比。4.电渗

（液体在电场中，对于固体支持介质的相对移动，称为电渗现象）

5.支持介质的筛孔7电泳系统电泳装置8醋酸纤维薄膜电泳以醋酸纤维薄膜作为支持介质

9人血清蛋白质的等电点

清蛋白pI=4.88α1-球蛋白pI=5.06α2-球蛋白pI=5.06β-球蛋白pI=5.12γ-球蛋白pI=6.85-7.50醋酸纤维薄膜分离血清蛋白质的基本原理PrCOO-COO-NH3+NH3+PrCOO-COO-NH2NH3+PrCOOHCOO-NH3+NH3++H+-H+pH=pI(0)pH<pI(+)pH>pI(-)10三、实验步骤电泳50min染色（5min)准备（醋酸薄膜、电泳槽的准备）点样（无光泽面[毛面]，距编号一端1.5cm处）电泳（稳流，0.3mA/cm膜宽，10min后，0.5mA/cm膜宽）漂洗（漂洗液I,II,III各约10min)透明（透明液甲2min,透明液乙1min)冷风吹干透明后，热风吹干11准备醋酸薄膜电泳槽的准备12点样13电泳光面朝上，点样端在负极，稳流电泳14染色漂洗透明

冷风吹干热风吹干15取膜第1步第2步第3步第4步16定性分析：一般为5条条带定量分析：薄层扫描或比色点样

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