- 现行
- 正在执行有效
- 2009-03-09 颁布
- 2009-05-01 实施
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文档简介
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中华人民共和国国家标准
犌犅/犜23239—2009
伊氏锥虫病诊断技术
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20090309发布20090501实施
中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局
发布
中国国家标准化管理委员会
书
犌犅/犜23239—2009
前言
本标准的制定参照了世界动物卫生组织(OIE)编写的《陆生动物诊断试验和疫苗手册(哺乳动物、
禽鸟与蜜蜂)》(第五版,2004)。
本标准的附录A、附录B和附录C为资料性附录。
本标准由中华人民共和国农业部提出。
本标准由全国动物防疫标准化技术委员会归口。
本标准起草单位:中国农业科学院上海兽医研究所。
本标准主要起草人:周金林、沈杰。
Ⅰ
书
犌犅/犜23239—2009
伊氏锥虫病诊断技术
1范围
本标准规定了新鲜血片、薄血涂片染色、毛细管集虫、实验动物接种等病原鉴定方法和乳胶凝集试
验、间接血凝试验和酶联免疫吸附试验等血清学试验技术。
本标准适用于伊氏锥虫病的诊断、检疫、流行病学调查。
2临床诊断
依家畜种类不同,临床症状表现不同。马(骡、驴)一般呈急性经过,感染后,体温突然升高到40℃
以上,稽留数日,而后经短时间的间隙,再行发作,体表水肿为常见症状,结膜和第三眼睑常有出血斑。
黄牛、水牛及骆驼等一般呈慢性经过,有不定期的间歇发热,食欲不振,消瘦,肿脚和耳、尾干枯症状,许
多慢性感染病例无明显病变。
有以上临床症状者,可以怀疑感染,确诊需要实验室检验。
3病原鉴定
3.1采血样
可从耳静脉或尾静脉采取外周血,从颈静脉或其他大静脉采取深部血液,因伊氏锥虫喜欢寄生于深
部血液,处于低虫血症时,外周血检出率常低于深部血的50%。
3.2新鲜血片检查
在干净载玻片上滴上一小滴鲜血,盖上盖玻片,使血液扩散成为细胞单层,再用光学显微镜(200倍)
观察活动锥虫。为防止血液在观察时干涸,也可先在载玻片滴血时加一滴生理盐水或3%柠檬酸三钠
生理盐水。
3.3薄血膜染色检查
将一小滴血放在清洁载玻片一端约20mm处,按常用方法推成薄血膜,迅速风干,用甲醇固定
2min,干燥后,再加姬氏染色液(配法参见附录A)染色25min,倾去染色液,自来水冲洗,干燥后用
400倍~1000倍显微镜检查。
3.4毛细管集虫检查
3.4.1材料准备
肝素处理过的毛细管(管内径1.5mm,长75mm的玻璃或无色透明的硬质塑料管,在拟进血的一
端吸入3%肝素钠10mm,用烤箱70℃~80℃烤干后备用),显微镜一台,离心机一台,载玻片,盖玻
片,12号以上注射针头(或金属针),塑泥(橡皮泥)。
3.4.2采集待检血样
从动物耳静脉或尾静脉穿刺获得血液。先用酒精棉擦净拟采血处皮肤,干后用针头穿刺血管,血流
出时用毛细管吸入达40mm深(即70μL血),封闭未沾染血的另一端(可用塑泥或火焰加热封闭)。
3.4.3集虫
以3000犵离心10min,待红细胞全部沉积于毛细管下半部,上层为黄色血浆时即可。
3.4.4检查
在毛细管的血浆与红细胞分界线下1mm处将管折断(切断、剪断)
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