标准解读

《GB/T 23239-2009 伊氏锥虫病诊断技术》是中国国家标准之一，旨在规范动物（尤其是马属动物）伊氏锥虫病的实验室检测方法。该标准详细介绍了用于确诊伊氏锥虫感染的各种技术和程序。

首先，标准中定义了伊氏锥虫病的基本概念及其在动物中的临床表现。接着，文件列出了进行疾病诊断时所需遵循的一般原则，强调了样本采集的重要性，并提供了血液、淋巴结液等不同类型生物样本的最佳采集方式与保存条件。

对于实验室检测部分，《GB/T 23239-2009》涵盖了多种诊断方法，包括但不限于显微镜检查法、培养分离法以及分子生物学技术如PCR扩增。每种方法都有详细的步骤说明和技术要求，确保结果准确可靠。此外，还特别提到了如何通过观察寄生虫形态特征来辅助鉴别诊断。

除了直接检测病原体外，标准也讨论了间接免疫学检测手段的应用，比如ELISA试验，用于检测宿主体内是否存在针对伊氏锥虫特异性抗体。这部分内容为无法通过常规方法发现活体或死亡寄生虫的情况提供了解决方案。


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  • 现行
  • 正在执行有效
  • 2009-03-09 颁布
  • 2009-05-01 实施
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文档简介

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中华人民共和国国家标准

犌犅／犜２３２３９—２００９

伊氏锥虫病诊断技术

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２００９０３０９发布２００９０５０１实施

中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局

发布

中国国家标准化管理委员会

书

犌犅／犜２３２３９—２００９

前言

本标准的制定参照了世界动物卫生组织（ＯＩＥ）编写的《陆生动物诊断试验和疫苗手册（哺乳动物、

禽鸟与蜜蜂）》（第五版，２００４）。

本标准的附录Ａ、附录Ｂ和附录Ｃ为资料性附录。

本标准由中华人民共和国农业部提出。

本标准由全国动物防疫标准化技术委员会归口。

本标准起草单位：中国农业科学院上海兽医研究所。

本标准主要起草人：周金林、沈杰。

Ⅰ

书

犌犅／犜２３２３９—２００９

伊氏锥虫病诊断技术

１范围

本标准规定了新鲜血片、薄血涂片染色、毛细管集虫、实验动物接种等病原鉴定方法和乳胶凝集试

验、间接血凝试验和酶联免疫吸附试验等血清学试验技术。

本标准适用于伊氏锥虫病的诊断、检疫、流行病学调查。

２临床诊断

依家畜种类不同，临床症状表现不同。马（骡、驴）一般呈急性经过，感染后，体温突然升高到４０℃

以上，稽留数日，而后经短时间的间隙，再行发作，体表水肿为常见症状，结膜和第三眼睑常有出血斑。

黄牛、水牛及骆驼等一般呈慢性经过，有不定期的间歇发热，食欲不振，消瘦，肿脚和耳、尾干枯症状，许

多慢性感染病例无明显病变。

有以上临床症状者，可以怀疑感染，确诊需要实验室检验。

３病原鉴定

３．１采血样

可从耳静脉或尾静脉采取外周血，从颈静脉或其他大静脉采取深部血液，因伊氏锥虫喜欢寄生于深

部血液，处于低虫血症时，外周血检出率常低于深部血的５０％。

３．２新鲜血片检查

在干净载玻片上滴上一小滴鲜血，盖上盖玻片，使血液扩散成为细胞单层，再用光学显微镜（２００倍）

观察活动锥虫。为防止血液在观察时干涸，也可先在载玻片滴血时加一滴生理盐水或３％柠檬酸三钠

生理盐水。

３．３薄血膜染色检查

将一小滴血放在清洁载玻片一端约２０ｍｍ处，按常用方法推成薄血膜，迅速风干，用甲醇固定

２ｍｉｎ，干燥后，再加姬氏染色液（配法参见附录Ａ）染色２５ｍｉｎ，倾去染色液，自来水冲洗，干燥后用

４００倍～１０００倍显微镜检查。

３．４毛细管集虫检查

３．４．１材料准备

肝素处理过的毛细管（管内径１．５ｍｍ，长７５ｍｍ的玻璃或无色透明的硬质塑料管，在拟进血的一

端吸入３％肝素钠１０ｍｍ，用烤箱７０℃～８０℃烤干后备用），显微镜一台，离心机一台，载玻片，盖玻

片，１２号以上注射针头（或金属针），塑泥（橡皮泥）。

３．４．２采集待检血样

从动物耳静脉或尾静脉穿刺获得血液。先用酒精棉擦净拟采血处皮肤，干后用针头穿刺血管，血流

出时用毛细管吸入达４０ｍｍ深（即７０μＬ血），封闭未沾染血的另一端（可用塑泥或火焰加热封闭）。

３．４．３集虫

以３０００犵离心１０ｍｉｎ，待红细胞全部沉积于毛细管下半部，上层为黄色血浆时即可。

３．４．４检查

在毛细管的血浆与红细胞分界线下１ｍｍ处将管折断（切断、剪断）

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