人教版高中生物选修一专题二知识点汇总

人教版高中生物选修一专题二学问点汇总专题二微生物的培育与应用一、培育基：人们依据微生物对养分物质的不同需求，配制出供其生长生殖的养分基质。1、★种类：培育基依据物理性质可分为液体培育基和固体培育基。区分：液体培育基中参加凝固剂琼脂制成琼脂固体培育基，是试验室最常用的培育基之一结果：微生物在固体培育基外表生长，可以形成肉眼可见的菌落。2、★化学成分：包括水、无机盐、碳源、氮源。★培育基还要满足微生物生长对PH、特别养分物质以及氧气的要求。二、无菌技术例如，培育乳酸杆菌时需要在培育基中添加维生素，培育厌氧型微生物需要供给无氧条件，培育霉菌时须将培育基的pH调至酸性，培育细菌是需要将pH调至中性或微碱性，二、无菌技术1、争辩和应用微生物的前提是防止杂菌入侵，获得纯洁的微生物。★获得纯洁培育物的关键是防止外来杂菌的入侵。留意：①对试验操作的空间、操作者的衣着和手，进展清洁和消毒。①将用于微生物培育的器皿、接种用具和培育基等器具进展灭菌。①为避开四周环境中微生物的污染，试验操作应在酒精灯火焰四周进展。①试验操作时应避开已经灭菌处理的材料用具与四周的物品相接触。★无菌技术目的：防止试验室的培育物被其他外来微生物污染，有效避开操作者自身被微生物感染。★2、消毒与灭菌的区分消毒指使用较为温存的物理或化学方法杀死物体外表或内部一局部微生物〔不包括芽孢和孢子〕灭菌则是指使用猛烈的理化因素杀死物体内外全部的微生物，包括芽孢和孢子。方法方法适用条件所用器械①煮沸消毒①巴氏消毒日常生活中常用的方法不耐高温的液体100度煮沸70-80度煮消毒①化学药剂消毒如酒精擦拭双手、氯气消毒水源①紫外线消毒法接种室、接种箱或超净工作台的外表或空气紫外灯①灼烧灭菌接种工具、试管口和瓶口酒精灯灭菌①干热灭菌耐高温，需保持枯燥物品，如吸管，培育皿干热灭菌箱①高压蒸汽灭菌，培育基、无菌水高压蒸汽灭菌锅三、制作牛肉膏蛋白胨固体培育基接种室、接种想或超净工作台使用前先用石炭酸或煤酚皂等消毒液消毒，再用紫外线照耀三、制作牛肉膏蛋白胨固体培育基★1、方法步骤：计算、称量、溶化、灭菌、倒平板。 〔灭菌前调PH〕①称量时，放在 称量纸上称量；①熔化时，参加琼脂 ，补加蒸馏水至100ml；①灭菌前PH；①50①左右时，在酒精灯火焰四周倒平板。★2、倒平板操作的步骤：①将灭过菌的培育皿放在火焰旁的桌面上，右手拿装有培育基的锥形瓶，左手拔出棉塞。①右手拿锥形瓶，将瓶口快速通过火焰。①用左手的拇指和食指将培育皿翻开一条稍大于瓶口的缝隙，右手将锥形瓶中的培育基〔约10～20mL〕倒入培育皿，左手马上盖上培育皿的皿盖。①5～10min。然后，将平板倒过来放置。3、倒平板操作的争辩①培育基灭菌后，需要冷却到50①左右时，才能用来倒平板。你用什么方法来估量培育基的温度？答：用手触摸盛有培育基的锥形瓶，感觉锥形瓶的温度下降到刚刚不烫手时，就可进展倒平板了。①为什么需要使锥形瓶的瓶口通过火焰？答：通过灼烧灭菌，防止瓶口的微生物污染培育基。①平板冷凝后，为什么要将平板倒置？答：可以防止培育基外表的水分更快地挥发，又可以防止皿盖上的水珠落入培育基，造成污染。①为什么？四、纯化大肠杆菌答：空气中的微生物可能在皿盖与皿底之间的培育基上滋生，最好不要用这个平板培育微生物。四、纯化大肠杆菌1、微生物接种的方法最常用的是平板划线法和稀释涂布平板法。★〔1〕平板划线法：通过接种环在琼脂固体培育基外表连续划线的操作。将聚拢的菌种逐步稀释分散到一个细胞生殖而来的肉眼可见的子细胞群体，这就是菌落.作用:可用于分别细菌，不能计数。★〔2〕稀释涂布平板法：将菌液进展一系列的梯度稀释，然后将不同稀释度的菌液分别涂布到琼脂固体培育基的外表，进展培育。分为系列稀释操作和涂布平板操作两步。目的：使聚拢在一起的微生物分散成单个细胞，从而能在培育基外表形成单个的菌落。作用:可用于分别细菌，能计数。★2、平板划线法操作步骤：①将接种环放在火焰上灼烧，直到接种环烧红。①在火焰旁冷却接种环，并翻开棉塞。①将试管口通过火焰。 ①将已冷却的接种环伸入菌液中蘸取一环菌液。①将试管通过火焰，并塞上棉塞。①左手将皿盖翻开一条缝隙，右手将沾有菌种的接种环快速伸入平板内，划三至五条留意不要划破培育皿。①灼烧接种环，待其冷却后，从第一区域划线的末端开头往其次区域内划线。重复以上操作，在三、四、五区域内划线。留意不要将最终一区的划线与第一区相连。①将平板倒置放入培育箱中培育。★【思考】假设其次划线区域所划的第一条线上无菌落,误有：①接种环灼烧后未冷却①划线未从第一区域末端开头3、平板划线操作的争辩★①为什么在操作的第一步以及每次划线之前都要灼烧接种环？在划线操作完毕吗？为什么？答：操作的第一步灼烧接种环是为了避开接种环上可能存在的微生物污染培育物；每次划线前灼烧接种环是为了杀死上次划线完毕后，接种环上残留的菌种，使下一次划线时，接种环以便得到菌落。划线完毕后灼烧接种环，能准时杀死接种环上残留的菌种，避开细菌污染环境和感染操作者。①答：以免接种环温度太高，杀死菌种。①在作其次次以及其后的划线操作时，为什么总是从上一次划线的末端开头划线？答：划线后，线条末端细菌的数目比线条起始处要少，每次从上一次划线的末端开头，能使细菌的数目随着划线次数的增加而逐步削减，最终能得到由单个细菌生殖而来的菌落。★①为到达把聚拢的菌种逐步稀释分散到培育基的外表的目的，操作上留意什么？答：其次次及以后每次划线前接种环要灼烧，冷却后从上一区划线末端开头划，首尾不能重叠。4、涂布平板操作的步骤：①将涂布器浸在盛有酒精的烧杯中。①取少量菌液滴加到培育基外表。①将沾有少量酒精的涂布器在火焰上引燃，待酒精燃尽后，8～10s。①用涂布器将菌液均匀地涂布在培育基外表。留意：①系列稀释操作时，用手指轻压移液管上的橡皮头，吹吸三次的目的是使菌液与水充分5、涂布平板操作的争辩①2如何进展无菌操作？提示：应从操作的各个细节保证“无菌”。例如，酒精灯与培育皿的距离要适宜、吸管头不要接触任何其他物体、吸管要在酒精灯火焰四周等等。★①纯化培育完毕后，觉察培育基上菌落连成一片，可能的缘由是什么？五、确定培育基是否合格答：稀释倍数不够，菌落浓度太高；划线时，划完第一次后接着划其次次。五、确定培育基是否合格六、菌种的保存★方法：将未接种的培育基在适宜温度的恒温箱中保温1～2则需要重制备。六、菌种的保存〔1〕临时保藏法适用：频繁使用的菌种方法：承受固体斜面培育基，当菌落长成后，放入4★3～6个月，都要转移到颖的培育基上。缺点：保存时间不长，菌种简洁被污染或产生变异。〔2〕甘油管藏 适用：长期保存的菌种。方法：放在－20★的冷冻箱中保存。★尿素不能直接被农作物吸取，只有在脲酶的催化作用下分解成氨之后，才能被植物利用反响式：CO(NH2)2+H2O 细菌脲酶 CO2+2NH3一、筛选菌株1自然界筛选实例：查找耐高温的TaqDNA聚合酶启发：查找目的菌种时要依据它对生存环境的要求，到相应的环境中去查找。2、筛选菌株的培育基KH2PO4 1.4gNaHPO4 2.1gMgSO4H2O 0.2g葡萄糖 10.0g尿素 1.0g

思考：2、此配方能否筛选出产生脲酶的细菌？为什么？答：能。缘由：只有产生脲酶的细菌才能利用尿素作为氮源而生存。1该培育基的配方中，为微生物的生长供给碳源和氮源的分别是什么物质？2、此配方能否筛选出产生脲酶的细菌？为什么？答：能。缘由：只有产生脲酶的细菌才能利用尿素作为氮源而生存。琼脂 15.0g 将上述物质溶解后，用蒸馏水定容到1000mL。3、选择性培育基：在微生物学中，将允许特定种类的微生物生长，同时抑制或阻挡其他种类微生物生长的培育基二、统计菌落数目★1、测定微生物数量的常用方法：稀释涂布平板法〔包括活菌〕显微镜直接计数〔包括死菌和活菌。此外测定大肠杆菌菌数的方法：伊红美蓝培育基 计算培育基上黑色菌落数目★2、稀释涂布平板法原理：样品稀释度足够高时，培育基外表生长的一个菌落，来源于样品稀释液中的一个活菌。留意事项：①为了保证结果准确，一般设置3个30～300的平板进展计数，并取平均值。①统计的菌落数往往比活菌的实际数目低。统计结果一般用菌落数而不是活菌数缘由：当两个或多个细胞连在一起时，平板上观看到的只是一个菌落。①每克样品中的菌株数=〔C÷V〕×M 。C:某一稀释度下平板上生长的平均菌落数；V:所用稀释液的体积；M:稀释倍数。3、设置比照目的：排解试验组中非测试因素对试验结果的影响，提高试验结果可信度。试验：在做分别分解尿素的细菌试验时，A106150个菌落，而其50个菌落。试验：在做分别分解尿素的细菌试验时，A106150个菌落，而其50个菌落。A同学的结果产生缘由可能有：A同学的培育基被杂菌污染，培育基混入了其它含氮物质，A同学所选用的土壤样品与其他同学不同。三、试验设计①1、筛选分解尿素分解菌方法：①方法：使用以尿素为唯一氮源的选择培育基进展培育。①培育基要求：加琼脂，加尿素，不加牛肉膏蛋白胨，加葡萄糖，不加抗生素。①1～2天，假设未接种的培育基无菌落，说明培育基没有杂菌污染。①制备以尿素为唯一氮源的培育基〔A〕和牛肉膏蛋白胨培育基BA培育基上的菌落少于以B基上的数目，说明筛选成功★2、流程：土壤取样→制备培育基→样品稀释涂布平板→微生物的培育与观看→菌落计数H接近土壤中取样。3～8cm的土壤层取样。制备培育基：尿素唯一氮源的选择培育基、牛肉膏蛋白胨培育基样品的稀释涂布平板：★①30~300之间、适于计数的平板。①稀释倍数：测定土壤中细菌的数量，一般选用104 105 106的稀释液进展平板培育；测定放线菌的数量，一般选用103 104 105的稀释液进展平板培育；测定真菌的数量，一般选用102 103 104的稀释液进展平板培育。微生物的培育与观看①培育：不同种类的微生物，往往需要不同的培育温度和培育时间。30~37①1~225~28①5~725~28①3~4天①a.24小时统计一次菌落数目，★b.选取菌落数目稳定时的记录作为结果，可防止因培育时间缺乏而导致遗漏菌落数目。菌落计数菌落特征，包括外形、大小、隆起程度、颜色等方面。★3、鉴定分解尿素的细菌:试剂：酚红指示剂原理：脲酶催化尿素分解成氨→培育基碱性增加→酚红变红→结论：该细菌能分解尿素。尿素唯一氮〔鉴别培育基H的变化。4、测定大肠杆菌的数目：方法：滤膜法培育基：伊红美蓝培育基计算培育基上黑色菌落数目五、试验的具体操作〔一、无菌操作1、取土样用的小铁铲和盛土样的的信封在使用前都要灭菌。2、应在火焰旁称取土壤，倒入锥形瓶中，塞好棉塞。3、在稀释土壤溶液的过程中，每一步都要在火焰旁进展。〔二、做好标记，标明培育基种类、培育日期、平板上培育样品的稀释度〔三、制定打算★总结：为从富含纤维素的土壤中分别获得纤维素分解菌的单菌落，某同学设计了甲、乙两种培育基〔成分见下表表示无。酵母膏无机盐淀粉纤维素粉琼脂CR溶液水培育基甲++++-++培育基乙+++-+++据表推断，培育基甲不能〔填“能”或“不能”〕液体培育基不能分别单菌落培育基乙不能〔填“能”或“不能”〕用于分别和鉴别纤维素分解菌，缘由是乙培育基中没有纤维素，不会形成CR-纤维素红色复合物，即使消灭单菌落也不能确定其为纤维素分解菌现单菌落也不能确定其为纤维素分解菌一、纤维素与纤维素酶

1．纤维素①根本单位：葡萄糖首尾相连而成的高分子化合物，①含量：是地球上含量最丰富的多糖类物质。①分布：棉花是自然界中纤维素含量最高的自然产物，木材、作物秸秆等也富含纤维素。★2．纤维素酶①种类：纤维素酶是一种复合酶C1酶、CX酶和葡萄糖苷酶，1 ①作用：C、C 酶使纤维素分解成纤维二糖，葡萄糖苷酶将纤维二糖分解成葡萄糖。1 ★二、纤维素分解菌的筛选筛选方法：刚果红染色法。能够通过颜色反响直接对微生物进展筛选。多糖物质形成红色复合物，当纤维素被纤维素酶分解后，刚果红－纤维素的复合物就无法形成，培育基中会消灭以纤维素分解菌为中心的透亮圈。这样，我们就可以通过是否产生透亮圈来筛选纤维素分解菌。染色方法：一种是先培育微生物，再参加刚果红进展颜色反响；另一种是在倒平板时就参加刚果红。NaCL作用：漂洗作用，洗去与纤维素结合不结实的刚果红，以免消灭的透亮圈不够清楚。三、试验设计★土壤取样→选择培育→梯度稀释→将样品涂布到鉴别纤维素分解菌的培育基上→选择产生透亮圈的菌落〔其次步是否需要，应依据样品中目的菌株数量的多少来确定〕土壤采集：选择富含纤维素的环境。选择培育：目的：增加纤维素分解菌的浓度，以确保能够从样品中分别到所需要的微生物。30ml选择培育基〔液体培育基〕的锥形瓶中，固定在摇床上，在肯定温度下振荡培育2-2d，直至培育液浑浊。梯度稀释：涂布培育：将样品涂布到鉴别纤维素分解菌的培育基上，是固体培育基筛选菌株：刚果红染色法，选择产生透亮圈的菌落。四、课题延长1、为确定得到的透亮圈中的菌落是纤维素分解菌，需要进展发酵产纤维素酶的试验，2、产纤维素酶的发酵方法有液体发酵和固体发酵两种。2.纤维素酶的测定方法：对纤维素酶分解滤纸等纤维素后所产生的葡萄糖进展定量的测定。疑难解答为什么要在富含纤维素的环境中查找纤维素分解菌？答：由于生物与环境的相互依存关系，在富含纤维素的环境中，纤维素分解菌的含量相对提高，因此从这种土样中获得目的微生物的几率要高于一般环境。将滤纸埋在土壤中有什么作用？你认为滤纸应当埋进土壤多深？