生物化学-生化实验

“设计性实验”项目申请项目名 芦荟中SOD的分离提项目朴哲 3412020填表日 国家级生物实验教学示范填表说明1、本申请书适用于各门实验课程的设计实验23、格式要求一律用A4纸打印，于左侧装订成册字体：中文用宋体，英文和数TimesNewRoman体，行距为1.5行距。（一（二（三”等依次分级编号，左起缩进2字符，宋体加黑，字号为小四号。二级标题：标题编排应采用“1、2、32字符，宋体加黑，字号为五号。内容：字号为五号，每段第一行左起缩进2字符4设计性实验”项目每人填写一5、参考文献按照《文后参考文献著录规则》87)要求书写6、本《申请书》各页不够可自行加、、 （元20145月至2014年9人E-（一）研究目试用于纤维性炎，于硬结区域内注射，1次注射5mg～10mg后，多数症状即获得明O2（超氧阴离子自由基O2身免疫等疾病。芦荟SOD的活性回收率很高，采用最佳萃取条件可达87.2%，故大规模提取SOD的原料优选为芦荟。（二）国内外研究现状分以前SOD的排他性不常温保存血液的交及其潜在以国际生组呼吁立刻停止物D的用以人们渐将目转到植物D芦荟SD的活回收率很高，采用最佳萃取条件可达87.2%。芦荟SOD逐渐成为动物SOD的替代物。目前国内已经出现以芦荟SOODSOSOD的提取率。（三）研究意（四）主要参考［］（）．中国．中国ＳＯＤ，２００５，４：５２－５３．１０：２３－２５，２００７，２４（３：５７－５９ ：１７－１９ Ｋｑ ｆ］ＳｆＣ ．Ｍ○—ｕｐｒｎ．Ｓｐ ．ａａ ｇｈａ ｖａｒａｏ． ｕｅｉｅｆ ｉｃ ａｔｉｏ ｐｈｙｃｏｃｙａｎｉｎ．２００７，３４：１５６－１６ 化酶的纯化和性质研究．生物化学 ，１９８９，５：１８２－１８４．［７］Ｊ．萨姆布克鲁克，等．分子克隆实验指南． ：科学技 ，２００２：１７１３－１７２２二、项目研究内容（主要研究内容、拟解决的关键问题、创新点等（一）项目主要研究内（二）拟解决的关键问 芦荟中提取SOD量的方法、 （三）创新采水相萃取技术，最大限度地利用了芦荟SOD资源。抛弃了传统的盐析法、单独的热变性法三、项目实施方案（研究思路、技术路线、研究方法等（一）研究思（二）技术路 测（三）研究方 →匀浆过滤→滤液离心→取上清液→热变形冷冻离心→取上清液→透析袋除杂→制作双水相→双水相萃取→SOD粗品离子交换层析SDS﹣PAGE（四）实施计1、芦荟中的SOD粗品提植物原料均经过去离子水洗涤，切成小块放入多功能机，所得匀浆经双层纱布过滤两次，合并滤液离心10min（4000r/min，室温上清液并在60°C水浴下变性15min，10mn（8000/min，°CPEG-磷酸盐双水相的建PEG（K2HPO4KH2PO4）分别一定浓度的溶液，准确量取一成相即可得到PEG-磷酸盐双水相体根据加入的PEG和磷酸盐溶液的量算出PEG和磷酸盐在PEGSOD10g，充分混合，静止待上下分相。2、SOD的提氯仿﹣ 酶液置于冰浴中，缓慢加入一18。C预冷的，搅拌lO分钟(操作需在离心管中进行)。酶液过夜后，4500转／分离心10分钟，弃沉淀，测定上清液的SOD酶与蛋白质含量。 4、SDS电（1）分离胶的配分离胶缓冲液1．5mL，30％丙烯酰胺液2．5mL，10％过硫酸胺20μL，加水2mL。均匀，翻（2)浓缩脏的配按下列比例配浓缩胶：SDS1．5mL，30％丙烯酰胺0．5mL，10％过硫酸会后，3020μL，加入样品槽。(5)染色和脱， ，（6）蛋白质分子量的估5、离子交换层DEAE纤维素的处理、平衡和再吸去柱表面的溶液，使剩余的的溶液恰好进入柱内，再地用移液管加样，也让它恰好进入柱床，用少量溶剂按同法加到柱内，使样品最后的残留部分洗入柱床内。最后，地将溶6、蛋白质含量的测足至500HL，同时以两管500#L的双蒸水作空白对照。每管各加入5mL考马斯亮兰溶液，振荡混7、酶的测定(1)邻苯三酚自氧化速率的测加入预热的邻苯三酚(10mmol／L盐酸配制，对照管用lOmmol／LHCI代替)，迅速摇匀倒入lcm试 加入量 双蒸 3mmol/L邻苯三酚溶 总 (2)酶液的活性测表2—2测定SOD酶的试剂和酶液用试 双蒸 酶 3mmol/L邻苯三酚溶 总 [（0.070-样品抑制速率）0.070]×100%SOD