第八章 化学药物的分析

巴比妥类药物分析10-1一、巴比妥类药物的结构剖析

InterpretationofChemicalStructure丙二酸脲素123456

三类：

5,5-二取代巴比妥类

1,5,5-三取代巴比妥类代表物见表8-1205.)

硫代巴比妥类巴比妥类10-2123456巴比妥类5,5-二取代巴比妥类

R1R2

巴比妥C2H5-

C2H5-

苯巴比妥C2H5-

戊巴比妥

C2H5-

异戊巴比妥

C2H5-

司可巴比妥

-C2H5-1,5,5-三取代巴比妥类

（少数）如：己琐巴比妥硫代巴比妥类

硫喷妥钠

5-3电离，弱酸性与金属离子反应氢活泼，与香草醛反应UV，随电离级数变化IR，巴比妥类结构1.环状母核部分（决定巴比妥类药物的特性）：丙二酰脲（1,3-二酰亚胺基团）碱性条件水解2.取代基部分（区别各种巴比妥类药物）：苯环、不饱和键(烯丙基)、硫元素硫元素反应碘、溴、高锰酸钾反应硝化、硫酸-亚硝酸钠、甲醛-硫酸反应5-4(一)性状白色结晶或结晶性粉未，具有固定的熔点。空气中稳定，加热多升华。游离巴比妥类药物微溶或极微溶于水，易溶于乙醇及有机溶剂；其钠盐则易溶于水，而不溶于有机溶剂。二、性质与鉴别 PropertiesandIdentification示例

ChP中苯巴比妥钠的熔点鉴别法：取本品约0.5g，加水5ml溶解后，加稍过量的稀盐酸，即析出白色结晶性沉淀，滤过，沉淀用水洗净，在105℃干燥后，熔点应为174~178℃。

特征熔点行为——鉴别、纯度测定药物本身、钠盐酸化析出产物、衍生物的熔点方法：钠盐+酸→游离巴比妥类药物↓

→过滤、洗涤、干燥→测熔点5-41.弱酸性2.水解反应（在碱性条件下水解，放出NH3）3.络合反应（与重金属离子Co,Cu,Ag,Hg反应）4.香草醛反应（Vanillin反应）5.特殊取代基反应（苯环，不饱和取代基，S）6.钠盐反应(二)化学性质1.弱酸性1,3-二酰亚胺基团，烯醇互变，水溶液中发生二级电离。

药物具有弱酸性，可与强碱反应生成水溶性的(钠)盐。成盐后，水溶液呈碱性，加酸后析出结晶。2.水解反应

酰亚胺结构，碱性条件共沸，释放氨气，使红色石蕊试纸变蓝。

本类药物的钠盐，在吸湿情况下也能发生水解。pH11以上随碱度的增加水解速度加快。

示例

JP15巴比妥的鉴别：取巴比妥0.2g，加氢氧化钠试液10ml，加热煮沸，则产生具氨臭的气体，可使红色石蕊试纸变蓝。3.络合反应（与重金属离子Ag,Cu,Co,Hg反应）(1)与银盐的反应

(2)与铜盐的反应(3)与钴盐的反应(4)与汞盐反应（5,5-取代）

银盐反应：鉴别

取供试品约0.1g，加碳酸钠试液1ml与水10ml，振摇2分钟，滤过，滤液中逐滴加入硝酸银试液，即生成白色沉淀，振摇，沉淀即溶解；继续滴加过量的硝酸银试液，沉淀不再溶解。SS紫色或紫色沉淀绿色（含硫巴比妥）5,5-取代基亲脂性↑，紫色易进入氯仿

铜盐反应鉴别

取供试品50mg，加吡啶溶液(1→10)5ml，溶解后加铜吡啶试液1ml，即显紫色或生成紫色沉淀。CoH2NCH(CH3)2H2NCH(CH3)2

汞盐反应

钴盐反应异丙胺4.香草醛反应（Vanillin反应）棕红色紫色变蓝色加乙醇香草醛+浓硫酸活泼氢5.特殊取代基反应（苯环，不饱和取代基，S）

硝化反应苯巴比妥与KNO3—H2SO4反应生成黄色与NaNO2—H2SO4反应苯巴比妥与NaNO2—H2SO4反应生成橙黄色→橙红色与甲醛—H2SO4反应苯巴比妥与甲醛—H2SO4反应生成玫瑰红色环(1)芳环取代基的反应(2)不饱和键反应与溴试液或碘试液的反应

司可巴比妥可使溴试液或碘试液褪色与KMnO4的反应

可还原紫色的KMnO4为棕色的MnO2（3）硫元素的反应示例

ChP中注射用硫喷妥钠的鉴别：取本品约0.2g，加氢氧化钠试液5ml与醋酸铅试液2ml，生成白色沉淀；加热后，沉淀变为黑色。硫代巴比妥的紫外吸收光谱

A.HCl液(0.1mol/L)

B.NaOH液(0.1mol/L)巴比妥类药物的紫外吸收光谱A.H2SO4液(0.05mol/L,未电离)B.pH9.9缓冲液(一级电离)C.pH13NaOH液(1mol/L,二级电离)λ(nm)2902702502300.51.01.5A3202802402000.80.50.2λ(nm)AABC238287304（三）巴比妥类药物紫外吸收光谱特征AB5-6三、含量测定Assay银量法溴量法酸碱滴定法（醇-水中、胶束中、非水）紫外分光光度法（直接UV、提取后UV、差示UV）HPLC法1、银量法——与重金属离子络合反应基于巴比妥类药物在合适的碱性溶液中，可与银离子定量成盐。示例

ChP中异戊巴比妥的银量测定法：取本品约0.2g，精密称定，加甲醇40ml使溶解，再加新鲜配制的3%无水碳酸钠溶液15ml，照电位滴定法，用硝酸银滴定液(0.1mol/L)滴定，即得。每1ml硝酸银滴定液(0.1mol/L)相当于22.63mg的C11H18N2O3。含量＝TVf/w

×100%2、溴量法——司可巴比妥（不饱和取代基）凡在5位取代基含有不饱和键的巴比妥类药物，其不饱和键能与溴定量地发生加成反应，故可采用溴量法测定其含量。*指示剂：淀粉指示剂

5-7示例

ChP中司可巴比妥钠的溴量测定法：取本品约0.1g，精密称定，置250

ml碘瓶中，加水10ml，振摇使溶解，精密加入溴滴定液(0.05mol/L)25ml，再加盐酸5ml，立即密塞并振摇1分钟，在暗处静置15分钟后，注意微开瓶塞，加入碘化钾试液10ml，立即密塞，摇匀后，用硫代硫酸钠滴定液(0.1mol/L)滴定，至近终点时，加淀粉指示液，继续滴定至蓝色消失，并将滴定结果用空白试验校正，即得。每1ml溴滴定液(0.05mol/L)相当于13.01mgC12H17N2NaO3。3、酸碱滴定法非水酸量法——弱酸性巴比妥类药物在非水溶剂中酸性增强，用碱性标准液滴定，终点明显常用溶剂：二甲基甲酰胺非水酸量法----弱酸性

巴比妥类药物在非水溶剂中酸性增强，用碱性标准液滴定，终点明显常用溶剂：二甲基甲酰胺滴定液：甲醇钠(钾)指示剂：麝香草酚蓝5-84、提取重量法5、UV法

酸性溶液无吸收，碱性介质紫外特征吸收——定量6、HPLC法图10-5空白血清和对照品血清HPLC图A.空白血清;B.对照品血清1.苯巴比妥;2.苯妥英;3.卡马西平;4.阿普唑仑（内标）芳酸及其酯类药物的分析本类药物的结构特征（共性）①苯环本类药物的游离羧基酸性比较强，可成盐或成酯。②羧基-COOH直接与苯环相连.如水杨酸类、苯甲酸类药物;或羧基为磺酸基或通过烃氧基与苯环相连，如其他芳酸类。③其他取代基：如酚羟基、氨基等

一、典型药物分类SA(Na)ASA3.（一）、水杨酸类（二）、苯甲酸类苯甲酸（钠）羟苯乙酯丙磺舒甲芬那酸（三）、其他芳酸类氯贝丁酯布洛芬二、主要化学性质（一）、三氯化铁反应

1.水杨酸及其盐

FeCl3试液

紫堇色铁配位化合物

中性或弱酸性pH4-6H+

Fe

Fe+12HCl+4FeCl3SA6（）23

本反应的适宜pH为4～6，在强酸性溶液中配位化合物分解。阿司匹林加热后也可与三氯化铁试液反应呈紫堇色；对氨基水杨酸钠加稀盐酸呈酸性后，与三氯化铁试液反应呈紫堇色；贝诺酯加氢氧化钠试液煮沸后，加盐酸呈微酸性后，与三氯化铁试液反应呈紫堇色2.苯甲酸的碱性水液或苯甲酸的中性溶液，与三氯化铁试液反应生成碱式苯甲酸铁盐的红色沉淀。3.丙磺舒加少量氢氧化钠试液使生成钠盐后，在pH5～6水溶液中与三氯化铁试液反应，即生成米黄色沉淀。4.布洛芬也有类似反应（紫色）。

（二）、重氮化-偶合反应（芳香第一胺反应）

碱性β－萘酚偶氮染料1.对氨基水杨酸钠

NaNO2试液

PAS-NaH+

重氮盐（无色）橙红色或猩红色+NaNO2+HClPAS-NaN≡N+Cl-＋NaCl+2H2O（1）NaOH橙红色COOHOHN=N--OH＋NaCl+H2OCOOHOHN≡N+Cl-+OH（2）2.

贝诺酯具潜在芳伯氨基，加酸水解后生成对氨基酚也有本反应发生。（三）、氧化反应

甲芬那酸与重铬酸钾试液反应。

（四）、水解反应1.阿司匹林等芳酸酯

Na2CO3试液

水杨酸钠＋醋酸钠

H+化SA↓（白色）＋HAc↑（臭味）ASASA-Na+Na2CO3⑴ASA+NaAc+CO2↑SA-Na

＋H2SO4⑶2NaAc+H2SO42HAc(臭)＋Na2SO42.双水杨酸也有类似反应；3.氯贝丁酯加碱水解后，可与盐酸羟胺及三氯化铁生成紫堇色异羟肟酸铁。4.羟苯乙酯的乙醇溶液煮沸后，可与硝酸汞试液反应，放置后生成沉淀，上清液呈现红色。⑵2SA-Na（白色）＋Na2SO42SA三含量测定（一）、酸碱滴定法（中和法）：

阿司匹林原料与其片剂在Ch.P2000中采用本法进行，但具体操作方法有所不同。1、直接滴定法:用于阿司匹林原料测定原理：+NaOH中性乙醇酚酞+H2O

利用ASA中游离羧基的酸性，以中性乙醇为溶剂，直接以NaOH滴定液滴定。注意事项：（1）为便于溶解而又防止在滴定时水解发生，使测定结果偏高，需采用中性乙醇为溶剂。（2）滴定时应不断振摇，速度稍快，室温下进行，否则可使样品发生水解而使结果偏高。（3）用氢氧化钠滴定时，化学计量点偏碱性，选用在碱性区变色的酚酞为指示剂，粉红色出现30秒不退即为终点。（4）计算公式：含量％＝Ｖ·Ｔ·ＦＷ×100％其中：V—终点消耗NaOH滴定液体积；F—滴定液校正因数＝实际浓度/规定浓度；W—样品重量（mg)

T—滴定度；2、两步滴定法:用于阿司匹林片及其肠溶片的测定。

因片剂中加入了稳定剂酒石酸和枸橼酸，故不能采用直接滴定法，而须采用先中和与供试品共有的酸（稳定剂及水杨酸），再将阿司匹林在碱性条件下水解后进行测定的方法。1、中和（第一步）：+NaOH+NaAc+SA-Na+酒石酸钠

2、水解与测定（第二步）：（水解）加40.00ml(过量)NaOH液水浴加热15分钟+NaAc中性乙醇酚酞SA-Na(回滴)

2NaOH(剩余)+H2SO4酚酞Na2SO4+2H2O注意事项:

(1)碱液在受热时极易吸收空气中CO2，用酸回滴时使测定结果偏低。故需在相同条件下作空白试验校正。

(2)第一步时以溶液出现粉红色30秒不退即得，再精密加入40ml氢氧化钠滴定液（可从滴定管上加入）。（3）水浴加热应在15分钟以上并振摇，保证水解完全。

(V空-V样)H2SO4.T.F.W片每片ASA含量占标示量%=————————————————

100%W样.标示量

1000其中：V空、V样—回滴时消耗硫酸滴定液的体积数（ml）。

W片—平均片重（g）。标示量（g/片）。原理：

苯甲酸钠为芳酸碱金属盐，易溶于水，其水溶液呈碱性，可用盐酸滴定液滴定，但在滴定过程中析出的游离酸不溶于水，并使滴定终点的pH突跃不明显，不利于终点的正确判断。利用苯甲酸能溶于有机溶剂的性质，在水相中加入与水不相溶的有机溶剂（如乙醚），并置分液漏斗中进行滴定反应，滴定过程中产生的苯甲酸不断萃取入有机溶剂层中，使滴定反应完全，终点清晰，同时可降低苯甲酸的离解。（二）、双相滴定法

（三）、UV法1、直接UV法中国药典采用此法测定丙磺舒含量，中国药典多采用百分吸收系数（）法计算。注意这一方法的计算公式：含量相当于标示量％=A×D×V×W片（E1%

）1cm×100×W样×S标×100％2、离子交换－UV法氯贝丁酯含测3、柱分配色谱－UV法USP（24）用于ASA胶囊含测E1%1cm芳香胺类药物的分析

本章药物的基本结构是芳环、氨基、烃胺基。胺芳胺芳伯氨基本章主要涉及两类药物（2）酰苯胺类：代表药物有盐酸布比卡因、盐酸罗哌卡因、盐酸利多卡因等。（1）对氨基苯甲酸酯类：代表药物有盐酸普鲁卡因、盐酸氯普鲁卡因、苯佐卡因、盐酸丁卡因等。一、对氨基苯甲酸酯类药物1、基本结构：均具有对氨基苯甲酸酯的母核。苯佐卡因盐酸丁卡因盐酸普鲁卡因胺（1）芳伯氨基特性：具有芳伯氨基，可发生重氮化-偶合反应；可与芳醛发生缩合反应；易氧化变色等。盐酸丁卡因无此特性。（2）水解特性：具有酯键（或酰胺键），易水解，尤其受碱或光、热的影响能促使水解。2、主要化学性质（3）弱碱性：除苯佐卡因外，因其脂烃胺侧链有叔胺氮原子，故游离碱多为碱性，能与生物碱沉淀剂发生反应。（4）其它特性：游离碱多为碱性油状液体或低熔点固体，难溶于水，可溶于有机溶剂，其盐可溶于水，难溶于有机溶剂。

二、酰苯胺类药物1、基本结构：为苯胺的酰基衍生物，均具有芳酰氨基。非那西丁（对乙酰氨基苯乙醚）对乙酰氨基酚（扑热息痛）醋氨苯砜贝诺酯（扑炎痛）盐酸利多卡因盐酸布比卡因（1）水解后显芳伯氨基特性：本类药物均具有芳酰氨基结构，在酸性溶液中可水解为具芳伯氨基的化合物，并显芳伯氨基特性反应。水解反应的速度与分子结构有关：对乙酰氨基酚（对位取代）＞贝诺酯（对位取代）＞利多卡因、布多卡因（邻位2个取代基）2、主要化学性质（2）水解产物易酯化：如对乙酰氨基酚，其水解产物为醋酸，可与乙醇生成醋酸乙酯。（3）酚羟基的特性：具有酚羟基或水解后能产生酚羟基，与三氯化铁作用呈色，如对乙酰氨基酚，可与利多卡因和醋氨苯砜区别。（4）弱碱性：如利多卡因和布比卡因具有脂烃胺侧链，显碱性，能与生物碱沉淀剂反应，可与对乙酰氨基酚和醋氨苯砜区别。(5)与重金属离子发生沉淀反应，盐酸利多卡因可与铜离子或钴离子络合，生成有色的配位化合物沉淀。三、鉴别试验（一）重氮化—偶合反应1、直接：盐酸普鲁卡因、苯佐卡因、盐酸普鲁卡因胺

盐酸普鲁卡因[鉴别]（1）本品显芳香第一胺类的鉴别反应

取供试品约50mg，加稀盐酸1m1，必要时缓缓煮沸使溶解，放冷，加0.1mo1/L亚硝酸钠溶液数滴，滴加碱性β-萘酚试液数滴，视供试品不同，生成由橙黄到猩红色沉淀。

2、间接：（酰苯胺类）对乙酰氨基酚、非那西丁、醋氨苯砜、贝诺酯对乙酰氨基酚

[鉴别]

（2）取本品约0.1g，加稀盐酸5m1，置水浴中加热40分钟，放冷；取0.5m1，滴加亚硝酸钠试液5滴，摇匀，用水3ml稀释后，加碱性β-萘酚试液2m1，振摇，即显红色。

3、盐酸丁卡因：无重氮化反应，分子中有芳香仲胺结构可与亚硝酸钠作用，生成N-亚硝基化合物。（二）三氯化铁反应

对乙酰氨基酚的结构中具有酚羟基，与三氯化铁试液作用，即显蓝紫色。紫堇色铁配位化合物¾®¾+-

FeClOHAr3（三）与重金属离子反应1、与铜和钴离子反应（1）盐酸利多卡因在碳酸钠试液中，与硫酸铜（芳酰胺与脂肪胺）反应生成蓝紫色配位化合物，溶于氯仿显黄色，水层显紫色。（P212）黄色蓝紫色硫酸铜盐酸利多卡因氯仿碳酸钠¾¾®¾¾¾¾®¾+2、与汞离子反应：盐酸利多卡因与对氨基苯甲酸酯类药物相区别。黄色硝酸汞盐酸利多卡因¾¾¾®¾+H+Δ对氨基苯甲酸酯类红或橙黄色1、盐酸普鲁卡因的鉴别试验（四）水解产物的反应盐酸普鲁卡因[鉴别]（2）取本品约0.1g，加水2ml溶解后，加10％氢氧化钠溶液1ml，即生成白色沉淀；加热，变为油状物；继续加热，产生的蒸气，能使湿润的红色石蕊试纸变为蓝色；热至油状物消失后，放冷，加盐酸酸化，即析出白色沉淀。此沉淀能溶于过量的盐酸。（五）制备衍生物测熔点1、测三硝基苯酚衍生物的熔点盐酸布比卡因与三硝基苯酚反应生成的衍生物，熔点约为194℃。2、测硫氰酸盐衍生物的熔点

盐酸丁卡因溶于醋酸钠溶液后，加硫氰酸铵溶液，即析出结晶性白色沉淀。干燥后熔点约为131℃。

盐酸布比卡因

ChP（2010）[鉴别]（2）取本品，精密称定，按干燥品计算，加0.01mol/L盐酸溶液制成每1ml中含0.40mg的溶液，照分光光度法（附录ⅣA）测定，在263nm与271nm的波长处有最大吸收；其吸收度分别为0.53～0.58与0.43～0.48。（六）紫外特征

（七）红外红外吸收光谱

盐酸普鲁卡因及盐酸普鲁卡因胺ChP（2010）[鉴别]（3）本品的红外光吸收图谱与对照的图谱一致。四、含量测定（一）亚硝酸钠滴定法1、原理：具芳伯氨基的药物。具游离芳伯氨基的药物可用本法直接测定。具潜在芳伯氨基的药物，如具酰胺基药物（对乙酰氨基酚等）经水解，芳香族硝基化合物（如无味氯霉素）经还原，也可用本法测定。2、测定方法

盐酸普鲁卡因

取本品约0.6g，精密称定，照永停滴定法（附录ⅦA），在15～25℃，用亚硝酸钠滴定液（0.1mol/L）滴定。每1ml亚硝酸钠滴定液（0.1mol/L）相当于27.28mg的C13H20N2O2·HCl。+NaNO2+2HCl+NaCl+2H2O（1）加入适量KBr加快反应速度

KBr为催化剂NaNO2+HCl→HNO2+NaClHNO2+HCl→NOCl+H2O在盐酸存在下，重氮化反应的机理为：3、主要测定条件（1）K1（2）K2

∵K1≈300K2

加入KBr，可增大被测溶液中NO+的浓度，所以能加快重氮化反应速度。OHNOBr

HBrHNO22++OHNOCl

HClHNO22++（2）溶液的酸度在不同酸中重氮化反应的速度为：HBr＞HCl＞H2SO4＞HNO3芳胺：盐酸

（用量）1:2.5～6加入盐酸的作用：Ⅰ重氮化反应速度加快；Ⅱ重氮盐在酸性溶液中稳定；Ⅲ防止生成偶氮氨基化合物，影响测定结果NN+Cl-

+

H2NNN

NH

+

HCl（4）滴定速度：先快后慢滴定管尖端插入液面下2/3处，在搅拌下快速加入滴定液，近终点时方改为慢速滴定。（3）室温条件下滴定：10～30℃4、指示终点的方法（1）永停滴定法原理：用两个相同的铂电极，在两个电极间加一低电压（约50mv），并串联一个微电流计，电极浸在被滴定液中，终点前，线路上无电流或仅有很小的电流流过微电流计，指针为零；到达终点，线路中有电流通过，电流计指针突然偏转。（2）外指示剂法KI—淀粉糊剂或试纸终点变蓝NaNO2+2KI+4HCl→2NO+I2+2KCl+2NaCl+2H2O（二）非水溶液滴定法

盐酸利多卡因结构中酰氨基邻位有二个甲基，受空间位阻影响，水解较慢，不适宜用重氮化法测定；但其结构中有脂肪胺基[-N（C2H5）2]，具有弱碱性，可采用非水溶液滴定法。(三）分光光度法对乙酰氨基酚在稀碱性（0.4％氢氧化钠）溶液中，在257±1nm波长处有最大吸收，可用于定量。杂环类药物的分析（一）典型药物的结构异烟肼尼可刹米一、吡啶类药物硝苯地平（二）主要的化学性质

1.弱碱性母核吡啶环上的氮原子显弱碱性2.还原性酰肼基具有较强的还原性3.吡啶环的特性可发生开环反应1、吡啶环的开环反应

本反应适用于吡啶环的α、α’位为无取代基的异烟肼和尼可刹米。（1）.戊烯二醛反应尼可刹米与溴化氰、苯胺反应生成黄色至黄棕色戊烯二醛衍生物。（三）、鉴别试验（2）.二硝基氯苯反应异烟肼与2,4-二硝基氯苯反应，在碱性溶液中显紫红色。还原反应(银镜反应)异烟肼加水溶解后，加氨制硝酸银试液，即有黑色浑浊出现，并生成氮和金属银，可在管壁上产生银镜。+AgNO3+H2O4Ag+N22、酰肼基团的反应（喹核碱）（喹啉环）H2SO4·2H2O

本类药物具吡啶与苯环稠合而成的喹啉杂环，本类最常见的典型药物有硫酸奎宁、硫酸奎尼丁、盐酸环丙沙星、喜树碱等。硫酸奎宁（quininesulfate)（一）典型药物结构二、喹啉类药物分析硫酸奎尼丁（quinidinesulfate)H2SO4·2H2O盐酸环丙沙星·HCl·H2O（二）主要理化性质1、碱性：喹啉环上的N具有碱性。2、旋光性3、荧光特性（三）、鉴别试验（一）绿奎宁反应

奎宁和奎尼丁互为异构体，结构中均有6位含氧喹啉衍生物，可以发生绿奎宁反应，即奎宁盐经氯水（或溴水）的氯（溴）化反应，再加氨水处理，生成翠绿色的二醌基吲胺的胺盐。（二）光谱特征1.紫外吸收光谱特征2.荧光光谱特征（P216）3.红外光谱特征（三）无机酸盐（P216）（一）结构特点与典型药物

吩噻嗪药物为苯并噻嗪的衍生物，其分子结构中均具有共同的硫氮杂蒽母核，基本结构为：三、吩噻嗪类药物的分析

本类药物结构上的差异，主要表现在母核2位上的R2取代基和N10位上的R1取代基的不同。R2基团通常为—H、—Cl、—CF3、—COCH3、—SCH2CH3等，R1基团则为具有2～3个碳链的二甲或二乙胺基，或为含氮杂环如哌嗪和哌啶的衍生物等。.HCl.HCl盐酸异丙嗪盐酸氯丙嗪（二）主要理化性质1、具有紫外和红外吸收光谱特征本类药物的紫外特征吸收，主要由母核三环的π系统所产生。一般具有三个峰值，即在204～209nm（205nm附近）、250～265nm（254nm）附近、和300～325nm（300nm附近）。最强峰多在250～265nm（ε为2.5×104～3×104）；本类药物母核中S为二价，易氧化，其氧化产物为亚砜和砜,它们具有四个吸收峰，与未氧化的吩噻嗪类母核的吸收峰不同。（SO）（S）002、易氧化呈色本类药物硫氮杂蒽母核中二价S易氧化，其母核易被氧化成亚砜、砜而呈色。3、与金属离子络合呈色未被氧化的二价S能与金属钯离子形成有色配位化合物。其氧化产物亚砜、砜则无此反应。4、碱性1、紫外特征吸收和红外吸收光谱2、显色反应

1、氧化剂氧化显色2、与钯离子络合显色

吩噻嗪类药物分子结构中的未被氧化的二价S能与金属钯离子络合形成有色络合物。（三）、鉴别试验（一）、结构特征与典型药物的结构

苯并二氮杂卓类药物为含氮杂原子、六元和七元环双并合而成的有机化合物，其中1,4-苯并二氮杂卓类药物是目前临床应用最广泛的镇静剂。中国药典收载有氯氮卓（利眠宁），并将安定和硝基安定更名为地西泮和硝西泮。四、苯并二氮杂卓类药物地西泮氯氮卓阿普唑仑（一）化学鉴别

1、沉淀反应2、水解后重氮化-偶合反应氯氮卓和奥沙西泮加盐酸溶液，加热煮沸水解后，水解产物可有此反应。而地西泮水解后则无此反应。3、硫酸-荧光反应4、分解产物的反应5、氯化铜焰色反应（二）、鉴别试验（二）紫外和红外吸收光谱（三）薄层色谱法（一）、非水溶液滴定法

非水溶液滴定法，是国内外药典采用较多的含测方法，特别是对弱碱类药物及其盐的测定。弱碱及其盐在水溶液中用标准酸液直接进行滴定没有明显的滴定突跃，滴定终点难于掌握。若采用非水酸性溶剂作为滴定介质，则可显著提高弱碱性药物的相对碱度，使滴定突跃增大，滴定反应顺利完成。五、含量测定

除少数药物以游离碱的形式供分析外，绝大多数为盐类（HCl盐与H2SO4盐）。这些盐类的滴定过程，实际上是一个置换滴定，即强酸滴定液置换出与游离碱结合的较弱的酸。反应原理可用下列通式表示：BH+·A-+HClO4BH+·ClO4-+HA基本原理：

由于被置换出来的HA的酸性强弱不同，因此对滴定反应的影响也不同。当HA酸性较强时，反应不能定量完成，必须采取措施除去或降低反应产生的HA的酸性，使反应顺利完成。因此，必须根据不同情况采用相应的测定条件。二、铈量法

本法是氧化还原法，硝苯地平与吩噻嗪类药物可采用本法进行测定。由于这些药物具有还原性，在酸性介质中可以用硫酸铈滴定液直接滴定。前者用邻二氮沸指示剂，后者不加指示剂而是利用药物自身的颜色变化指示终点。三、比色法（一）酸性染料比色法

本法是在适当的pH介质中利用酸性染料（如磺酸酞类）与碱性药物定量结合呈色，采用比色法测定其含量。酸性染料是指具有酸性基团的酸碱指示剂(磺酸酞类)，如溴酚蓝、溴麝香草酚蓝、溴甲酚绿、溴甲酚紫等。本法具有一定的专属性和准确度，样品需用量少，灵敏度高，适用于样品量少、小剂量药物及其制剂或体内碱性药物的测定。（二）钯离子比色法1.基本原理

在适当pH值溶液中，利用吩噻嗪类药物可与金属钯离子形成有色络合物，借以进行比色测定。

本法优点可选择性地用于未被氧化的吩噻嗪药物的测定。因为未被氧化的二价S能与金属钯离子形成有色配位化合物，当硫原子已被氧化为亚砜或砜时，则不与Pd2+络合呈色。

缺点是：样品浓度高时，络合物的溶解度较低，可能会导致络合物析出。2.测定方法四、紫外分光光度法基于药物据有紫外特征吸收光谱，在其最大吸收波长处测定吸收度，利用百分吸收系数计算；或与对照品溶液同时测定，计算含量。（一）直接分光光度法1、盐酸异丙嗪片的测定

取本品10片，除去糖衣后，精密称定，研细，精密称取适量（约相当于盐酸异丙嗪12.5mg），置200ml量瓶中，加盐酸溶液（91000）适量，振摇15分钟使盐酸异丙嗪（二）萃取后分光光度法（三）萃取－双波长分光光度法（四）二阶导数分光光度法溶解，滤过，取续滤液10ml,置100ml量瓶中，再用盐酸溶液（91000）稀释至刻度，摇匀，在249nm波长处测定吸收度，按C17H20N2S·HCl的吸收系数（）为910计算，即得。2、盐酸异丙嗪注射液的测定抗氧剂VitC对测定有干扰。测定波长改在299nm处。3、奥沙西泮的测定﹒

E1%1cm五、气相色谱法

气相色谱法是一种有效地分离技术，它具有分离效果好、灵敏度高、选择性好、用量少和分析速度快等特点，特别适合组分比较复杂的供试品中微量有机药物及其代谢物的分离测定。由于绝大数药物极性大，不易气化，或对热不稳定，因此该法在药物分析中的应用不如HPLC法多（一）硫酸阿托品片剂的含量测定

USP(24)方法，色谱条件：玻璃填充柱，担体为硅烷化硅藻土，固定液为3％OV－17，载气为氮气，流速25ml/min，检测器为FID。后马托品为内标。（二）人血浆中硝苯地平的GC法测定及药代动力学研究六、高效液相色谱法

高效液相色谱法，在本类药物的含量测定中应用越来越广泛，其中80％以上是采用反相HPLC法，利用本法可十分有效地分离和测定本类药物及分解产物。USP(24)收载的药物有数十个品种采用本法测定。本章药物仅有地西泮注射液在中是采用本法进行测定。（一）反相HPLC法

反相HPLC法，是指流动相的极性大于固定相极性的色谱方法。

在本法中常采用化学键合相作为固定相，即在硅胶表面，如键合为十八烷基时，则形成常用的十八烷基硅烷化键合硅胶（ODS）。在硅胶表面引入硅烷基形成的固定相极性很弱，而流动相多采用水－甲醇或水－乙腈等大极性系统。在反相HPLC中，极性大的组分在分离时先流出柱子，极性弱的组分后流出柱子，适合于共存组分极性差异大的样品的测定。1.地西泮注射液的反相HPLC法2.高效液相法测定硫酸阿托品片的含量（二）离子对高效液相色谱法

离子对色谱法，是离子对提取于色谱技术与相结合的产物，可用于分析呈离解状态的药物，如有机碱类或有机酸类药物。离子对色谱法是将待测组分的反离子加入到流动相中，与呈离解状态药物作用，生成可逆的离子对化合物。分离测定杂环类药物中吡啶类、喹啉类等药物时，主要是采用烷基磺酸盐或其他盐类作为离子对试剂（如戊烷磺酸钠与庚烷磺酸钠）。影响离子对形成的条件如溶液的pH、反离子的种类、流动相等流动相一般呈酸性，以利于有机碱离解。维生素类药物的分析

-H维生素A醇-COCH3维生素A醋酸酯-COC15H31维生素A棕榈酸酯R:（一）、结构一、维生素A（VitaminA）共轭多烯侧链的环己烯1、为一个具有共轭多烯侧链的环己烯

（1）具有UV吸收

（2）存在多种立体异构化合物

（3）易发生脱氢、脱水、聚合反应（二）、理化性质△或有金属离子存在时更易氧化2、不稳定性3、与三氯化锑发生呈色反应CHCl34、溶解性不溶于水易溶于有机溶剂和植物油等1、三氯化锑反应CHCl3（三）、鉴别试验

维生素A在饱和无水三氯化锑的无醇氯仿溶液中呈现不稳定的蓝色，再变为紫红色。反应条件：①要求无水，如存在水可能产生氯化氧锑（SbOCl

）。②配制所用的氯仿不能含醇（应用无醇氯仿）和光气（COCl2）。③三氯化锑有腐蚀性。2、紫外吸收光谱维生素A分子中含有5个共轭双键，其无水乙醇液在326nm波长处有最大吸收。当在盐酸催化下加热，即发生脱水反应生成去水维生素A（A3）。去水维生素A比维生素A多一个共轭双键，其最大吸收波长向红移，在340～390nm波长间出现3个最大吸收峰。3、薄层色谱三、含量测定1、紫外分光光度法

利用维生素A醇和其醋酸酯分子中具多烯共轭体系结构，在325～328nm处有选择性吸收峰，故可进行含量测定。（二）三氯化锑比色法维生素A可与三氯化锑的氯仿溶液作用，产生蓝色，在618～620nm波长处有最大吸收。可用于维生素A的比色测定。要求在5～10秒内测定。本法缺点多，已被UV法取代。（三）高效液相色谱法氨基嘧啶环－CH2－噻唑环(季铵盐)HClCl-维生素B1（盐酸硫胺）二、维生素B1的分析1、溶解性①易溶于水②水溶液呈酸性2、UV共轭双键λmax=246nm（一）结构与性质嘧啶环——

伯氨噻唑环——

季铵1、可与酸成盐2、与生物碱↓→↓3、含量测定——

非水碱量法（3）硫色素反应（4）碱性（二）鉴别试验1、硫色素反应（VitB1的专属反应）VitB1H+H+H+H+2、沉淀反应3、氯化物反应4、硝酸铅反应：与氢氧化钠共热，产生硫化钠，与硝酸铅反应生成黑色沉淀。1、非水溶液滴定法（药典用于测定原料药）原理：利用噻唑环上季铵和嘧啶环上氨基的弱碱性，在非水溶液中用高氯酸液滴定。（三）含量测定2、UV分光光度法（药典用于测定片剂、注射剂）（1）原理：维生素B1分子中具有共轭双键结构，具有紫外吸收特征，可在其最大吸收波长下测定吸收度，根据取样量计算含量。（2）方法NaOH（三）硫色素荧光法原理（1）激发波长365nm发射波长435nm（2）方法与计算L－抗坏血酸三、维生素C的分析①易溶于水②水溶液呈酸性(一）结构与性质1、溶解性C3－OH的pKa=4.17C2－OH的pKa=11.572、酸性一元酸二烯醇结构二酮基结构二烯醇结构3、强还原性L(+)－抗坏血酸活性最强手性C（C4、C5）4、光学活性**△糖类的显色反应50℃结构与糖类相似5、具糖的性质6、UV特征（二）鉴别试验1、与AgNO3反应2、与2，6-二氯靛酚反应氧化型玫瑰红色还原型蓝色3、与碱性酒石酸铜反应USP4、与KMnO4反应5、糖类的反应6、紫外分光光度法指示剂淀粉指示液原理（1）1、碘量法（三）含量测定

取本品约0.2g，精密称定，加新沸过的冷水100ml与稀醋酸10ml使溶解，加淀粉指示液1ml，立即用碘滴定液（0.1mol/L）滴定，至溶液显蓝色，在30秒内不褪。每1ml碘滴定液(0.1mol/L)相当于8.806mg的C6H8O6（2）方法2、2，6-二氯靛酚钠滴定法USPJP原理自身指示终点法（2）方法

维生素E（消旋-α-生育酚醋酸酯）苯并－二氢吡喃醇四、维生素E的分析名称R1R2相对活性α-生育酚β-生育酚γ-生育酚δ-生育酚CH3CH3HHCH3HCH3H1.00.50.20.1***（一）结构与性质苯环+二氢吡喃环+饱和烃链1、易溶于有机溶剂，不溶于水2、UV3、酯键易水解△1、硝化反应75℃15′橙红色（二）鉴别2、三氯化铁－联吡啶反应△[O]3、紫外光谱法4、薄层色谱法5、其他方法（三）含量测定GC法GC特点选择性好灵敏度高速度快分离效能好挥发性低、不稳定、极性强→衍生化易受样品蒸气压限制甾体激素类药物的分析基本结构：环戊烷并多氢菲ABCD12345678910111213141516171819分类：甾体激素肾上腺皮质激素性激素雄性激素及蛋白同化激素孕激素雌激素肾上腺皮质激素氢化可的松肾上腺皮质激素醋酸地塞米松雄性激素丙酸睾酮蛋白同化激素苯丙酸诺龙孕激素黄体酮雌激素炔雌醇一、结构与性质1.肾上腺皮质激素主要活性基团性质△4–3–酮UV、与羰基试剂反应

C17

–

α–醇酮基还原性

常见药物有氢化可的松、醋酸泼尼松、醋酸氟轻松、倍他米松等。2.雄性激素及蛋白同化激素主要活性基团性质△4–3–酮UV、与羰基试剂反应

C17–羟基可成酯

常见药物有丙酸睾酮、甲睾酮、苯丙酸诺龙等。3.孕激素主要活性基团性质△4–3–酮UV、与羰基试剂反应C17–甲酮基与亚硝基铁氰化钠反应C17–乙炔基与AgNO3反应

常见药物有黄体酮、炔孕酮、炔诺酮、炔诺孕酮等。4.雌激素主要活性基团性质A环为3–OH苯环UV、与重氮苯磺酸盐反应C17–乙炔基与AgNO3反应C17–羟基可成酯

常见药物有炔雌醇、炔雌醚、雌二醇、苯甲酸雌二醇等。（一）呈色反应甾酮激素类药物黄色的腙羰基试剂（1）C3–酮基和C20–酮基这类反应也可用于定量分析（比色法）。常用的羰基试剂：2,4-二硝基苯肼、异烟肼、硫酸苯肼等。二、鉴别试验异烟腙（黄色）睾酮具有甲酮基或活泼亚甲基的甾体激素类药物呈色

亚硝基铁氰化钠间二硝基酚、芳香醛（2）甲酮基黄体酮蓝紫色产物，具有专属性亚硝基铁氰化钠其他甾体淡橙色或不显色黄体酮蓝紫色有机氟Fˉ有机破坏有机氯Clˉ（3）有机卤素茜素氟蓝硝酸亚铈硝酸-硝酸银AgCl↓呈蓝紫色茜素氟蓝蓝紫色F-雌激素类药物红色偶氮染料重氮苯磺酸（4）酚羟基肾上腺皮质激素药物Cu2O↓橙红色碱性酒石酸铜（二）沉淀反应Ag↓黑色氨制硝酸银1.C17–

α–醇酮基（还原性）含炔基的甾体激素银盐沉淀硝酸银2.炔基↓炔雌醇白3.与硝酸-硝酸银的沉淀反应含有氯取代的甾体激素类药物。△KOH(三)制备衍生物测定m.p.△△香（四）水解产物的反应特臭特臭△４-3-酮240nm苯环280nm（五）UV法3300～3000cm-13000～2700cm-11900～1650cm-11650～1450cm-11000～650cm-1（六）IR法3750～3300cm-1ν醋酸可的松结构特征：△4–3–酮、C17–OHC20–酮基、C11–酮基、醋酸酯1630cm-1ν3420cm-1亚甲基、角甲基吸收带1750cm-11232cm-11052cm-1（七）TLC法

主要用于甾体激素类药物制剂的鉴别

方法：对照品法要求供试品溶液所显主斑点的颜色和位置与对照品溶液的主斑点相同。炔诺酮TLC图（八）HPLC法

主要用于甾体激素类药物制剂的鉴别（如：醋酸曲安奈德软膏、醋酸氟轻松软膏）

方法：对照品法要求在含量测定项下记录的色谱图中，供试品峰的tR与对照品峰的tR一致。四、含量测定（一）UV法△４-3-酮：240nm（±）肾上腺皮质激素雄性激素和蛋白同化激素孕激素苯环：280nm（±）雌激素（二）反应分光光度法1.适用于非分光光度活性药物2.使待测组分光谱位移，避免干扰3.增加测定灵敏度4.增加选择性弱、非分光光度活性药物强分光光度活性药物化学反应

肾上腺皮质激素类C17-α－醇酮基：强还原性OH-[还原]1.四氮唑比色法（1）原理三苯甲臜↓深红氯化三苯四氮唑（TTC）红四氮唑（RT）蓝四氮唑（BT）双甲臜（暗蓝）2.其他比色法

异烟肼比色法

Kober反应比色法ChP、USP、BP、JP均采用RP-HPLC（大多内标法）特点：用样量少，灵敏度高，分离效果好，测定速度快（三）HPLC法药物制剂分析的特点1、为了防治和诊断疾病的需要；2、为了保证药物用法和用量的准确；3、为了增强药物的稳定性；4、为了药物使用、贮存和运输的方便；5、为了延长药物的生物利用度；6、为了降低药物的毒性和副作用。

药物制成制剂的目的一、中国药典（2010年版）二部（21种）片剂注射剂酊剂栓剂胶囊剂软膏剂眼用制剂丸剂植入剂糖浆剂气雾剂膜剂颗粒剂口服溶液剂散剂耳用制剂鼻用制剂洗剂搽剂凝胶剂贴剂

利用物理、化学或生物测定方法对不同剂型的药物进行检验分析，以确定被测的制剂是否符合质量标准。二、制剂分析的定义和特点（一）定义符合质量标准的原料药赋形剂、稀释剂附加剂（稳定剂、防腐剂、着色剂）不同制剂

（二）制剂分析的特点（与原料药的区别）例

VitC

原料制剂（片）[性状]熔点，比旋度外观颜色[鉴别]化学法，IR化学法[检查]溶液的澄清度与颜色溶液的颜色炽灼残渣重量差异铁，铜，重金属崩解时限[含量测定]碘量法碘量法1、鉴别试验不完全相同药物制剂的鉴别可以参考原料药的鉴别方法，若附加剂不干扰鉴别试验，可采用与原料药相同的方法鉴别，如果附加剂对鉴别试验有干扰，则不能使用。如：IR通常只用于原料药的鉴别，而不能用于制剂的鉴别。

一般原料药项下的检查项目不需重复检查，只检查在制备和储运过程中产生的杂质及制剂相应的检查项目。2、杂质检查不相同（1）检查的项目不同如：阿司匹林“水杨酸”≤0.1%阿司匹林片“水杨酸”≤0.3%（2）杂质限量的要求不同

对于相同的杂质，原料药的限量要求要比制剂高。如：片剂需要检查重量差异和崩解时限等3、制剂需要进行“制剂通则”的有关检查

制剂质量标准的检查项下，除对杂质进行检查外，还需检查是否符合剂型方面的有关规定。4、含量测定的方法不完全相同（1）干扰组分多要求含量测定方法具有一定的专属性附加成份：赋形剂、稳定剂、稀释剂、抗氧剂、防腐剂、着色剂、调味剂盐酸氯丙嗪（含量测定）原料：非水滴定法片剂：UV法(λ测

254nm)

注射剂：UV法(λ测

306nm)例如：硫酸阿托品（含量测定）原料：非水滴定法片剂注射剂酸性染料比色法（2）主要成分含量低要求含量测定方法具有一定的灵敏度（3）含量表示方法及合格范围不同原料药制剂质量分数（%）标示量的百分含量（％）阿司匹林≥99.095.0～105.0VitB1≥99.0(干燥品)90.0～110.0VitC≥99.093.0～107.0红霉素≥920单位/g90.0～110.0（4）含量测定结果的计算方法不同原料药：百分含量＝m测得量m取样量×100％制剂（片剂、胶囊、注射剂等）标示量的百分含量×100％＝标示量每片（颗、ml）测得含量片剂和注射剂的分析片剂常规检查项目一、

片剂是指药物与适宜的辅料通过制剂技术压制而成的片状或异形片状的制剂。≤0.3g/片±7.5%＞0.3g/片±5.0%（1）规定1、重量差异定义每片重量与平均重量之差异糖衣片、薄膜衣片应包衣前检查（3）规定超出限度片数≤2片超出限度1倍片数=0片（2）方法与标示片重比较与平均片重比较每片重量®®()平均片重素片片®202、崩解时限用崩解仪测定定义固体制剂在规定的介质中，以规定的方法进行检查，崩解溶散并通过筛网所需时间的限度。素片≤15′薄膜衣片≤30′糖衣片≤60′肠溶衣片=120′完整(盐酸液)≤60′崩解(磷酸缓冲液)（1）规定37℃泡腾片≤5′（15－25℃）（2）方法不合格时另取6片复试同时测定片®6崩解仪如图：二、片剂含量均匀度和溶出度检查（一）含量均匀度检查1、定义小剂量或单剂量的固体制剂、半固体制剂和非均相液体制剂等每片（个）含量符合标示量的程度。除另有规定外，片剂、胶囊剂或注射用无菌粉末，每片（个）标示量不大于25mg或主药含量小于每片（个）重量25%者；其他制剂，每个标示量小于2mg或主药含量小于每个重量2%者；贴剂，均应检查含量均匀度。

凡检查此项的制剂不再检查重量差异2、方法与计算

用规定的含量测定方法分别测定10片（个）药物，计算每片（个）的含量Xi，然后计算

A+1.8S=？

S=标准偏差计量型方案，二次抽检法，以标示量为参照值3、判断标准（1）A+1.80S≤15.0另取20片复试,按30片计A+1.45S≤15.0（若改变限度，则改15.0）符合规定不符合规定符合规定（2）A+S＞15.0（3）A+1.80S＞15.0,且A+S≤15.0重量差异试验含量均匀度适用范围普通片剂(混合均匀)小剂量片剂或较难混合均匀者检查指标片重差异每片含量偏离标示量的程度特点简便快速准确（二）溶出度的测定1、定义溶出度是指药物从片剂等固体制剂在规定的溶剂中溶出的速率和程度。是一种模拟口服固体制剂在胃肠道里的崩解和溶出情况的体外试验法。主要用于难以溶解的药物。凡检查溶出度的制剂，不再进行崩解时限的检查。2、方法转篮法：取6片（个）分别置溶出度仪的6个吊篮（或烧杯）中，37±0.5℃恒温下，在规定的溶液里按规定的转