标准解读

《GB/T 19915.8-2005 猪链球菌2型毒力因子荧光PCR检测方法》是中国一项关于猪链球菌2型（Streptococcus suis type 2）的检测技术标准，具体聚焦于利用荧光聚合酶链反应（Fluorescent Polymerase Chain Reaction, FPCR）技术来识别和测定该菌株中的毒力因子。此标准旨在为兽医诊断、食品安全监控及流行病学研究提供一个快速、灵敏且特异的方法。下面是该标准内容的详细说明：

标准范围

本标准规定了应用荧光PCR技术检测猪链球菌2型中特定毒力因子的采样、样本处理、核酸提取、PCR反应体系配置、反应条件设置、结果分析及判定方法。适用于猪肉产品、临床样本及环境中猪链球菌2型的毒力因子筛查与鉴定。

关键术语和定义

  • 荧光PCR：通过在PCR反应体系中加入荧光标记探针或染料，实时监测反应过程中荧光信号变化，以实现对目标DNA序列的定量或定性分析。
  • 毒力因子：指猪链球菌2型中能直接参与致病过程的特定基因或其表达产物。

检测原理

基于荧光PCR技术，设计针对猪链球菌2型特定毒力因子的引物和探针，当样本中含有目标DNA序列时，在PCR扩增过程中，随着循环数的增加，荧光信号强度逐渐增强，通过荧光信号的变化曲线判断目标序列的存在与否及其初始模板量。

检测步骤

  1. 样本采集与保存：确保样品无污染，按照规定方法采集后迅速冷藏或冷冻保存，防止DNA降解。
  2. 样本处理与核酸提取：使用适当的方法裂解细胞，去除蛋白质、脂质等杂质，然后提取纯化DNA。
  3. PCR反应体系配制：根据标准要求准备包含模板DNA、引物、探针、酶、缓冲液等成分的反应混合物。
  4. 荧光PCR扩增：在专门的荧光PCR仪上进行温度循环，包括变性、退火、延伸等步骤，并实时监测荧光信号。
  5. 结果分析：通过软件分析荧光信号的增加情况，判断是否达到阈值周期（Ct值），以此确定样本中目标DNA的有无及其相对量。

结果判定与报告

根据Ct值的大小及内部对照的结果，判断样本中猪链球菌2型毒力因子是否存在。报告应包含实验日期、样本信息、检测方法、检测结果及必要的质量控制信息。

注意事项

  • 实验操作需严格遵守生物安全规范，防止样本交叉污染。
  • 使用的标准品和阳性对照应定期验证，确保检测系统的准确性和稳定性。
  • 详细记录实验过程，确保结果可追溯。

该标准为猪链球菌2型感染的诊断和防控提供了科学依据，有助于及时发现并控制疫情，保障公共卫生安全和畜牧业健康发展。


如需获取更多详尽信息，请直接参考下方经官方授权发布的权威标准文档。

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  • 现行
  • 正在执行有效
  • 2005-09-27 颁布
  • 2005-11-01 实施
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GB/T 19915.8-2005猪链球菌2型毒力因子荧光PCR检测方法_第1页
GB/T 19915.8-2005猪链球菌2型毒力因子荧光PCR检测方法_第2页
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文档简介

ICS07.100.30C53中华人民共和国国家标准GB/T：19915.8—2005猪链球菌2型毒力因子荧光PCR检测方法Protocolofreal-timePCRassayforvirulencefactorsofStreptococcussuistype22005-09-27发布2005-11-01实施中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局发布中国国家标准化管理委员会

GB/T19915.8-2005前本标准的附录A为规范性附录本标准由国家标准化管理委员会提出。本标准由全国动物防疫标准化管理委员会归口本标准由中国检验检疫科学研究院和江苏出入境检验检疫局负责起草本标准主要起草人：林祥梅、吴绍强、韩雪清、贾广乐、刘建、梅琳、陈国强、张敬友、姜炭、唐泰山本标准为首次发布

GB/T19915.8-2005猪链球菌2型毒力因子荧光PCR检测方法范围本标准规定了猪链球菌2型毒力因子MRP和EF检测的荧光PCR操作方法本标准适用于检测生猪执子、增菌培养物、疑似病料及猪组织样品中猪链球菌2型菌株的致病力。2术语和定义下列术语和定义适用于本标准毒力因子irulencefactor猪链球菌2型菌株的致病力与其毒力因子直接相关。猪链球菌2型的毒力因子有溶菌酶释放蛋白（MRP）、胞外因子(EF)、溶血素、英膜多糖以及44kDa蛋白、1gG结合蛋白、纤毛粘着素等。其中，溶菌酶释放蛋白(MRP)和胞外因子(EF)是最主要的两个毒力因子，可作为判定菌林毒力的指标。一般认为表型MRP十EF十为强致病株,MRP+EF－为弱致病株.MRP－EF－为非致病株，未发现MRP-EF十表型3缩略语本标准采用下列缩略语：荧光PCR荧光聚合酶链反应MRP溶菌酶释放蛋白胞外因子C值荧光信号到达设定的闽值所经历的循环数FAM6-按基货光素TAMRA四甲基罗丹明实验材料与仪器4.1实验试剂实验试剂包括：-猪链球菌2型毒力因子荧光PCR检测引物、探针、阳性对照及常规PCR反应试剂；商品化的组织基因组DNA提取试剂盒.具体提取操作参照说明书进行。4.2仪器所用仪器包括荧光PCR仪：高速冷冻离心机；台式离心机：旋涡混勺器；冰箱（2C～8C和-20C两种）微量可调移液器(

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