标准解读

《GB/T 19915.6-2005 猪源链球菌通用荧光PCR检测方法》是中国一项关于猪源链球菌检测的技术标准，旨在为相关行业提供一种统一、准确且高效的检测手段。该标准详细规定了使用荧光聚合酶链反应（Fluorescent Polymerase Chain Reaction, F-PCR）技术来识别和定量猪源样本中链球菌的方法学要求、操作步骤、质量控制及结果判定准则。下面是该标准内容的详述：

标准适用范围

本标准适用于猪源性食品、饲料及其生产环境中链球菌的检测，尤其适合于监控猪群健康状况及肉类食品安全，以预防和控制由链球菌引起的疾病传播。

检测原理

利用荧光PCR技术，通过设计针对猪源链球菌特异性核酸序列的引物和探针，在DNA扩增过程中，当探针与目标DNA片段结合并被酶切时，会释放出可被仪器检测到的荧光信号。随着循环次数增加，荧光信号累积，达到阈值的时间点（Ct值）可以用来定量初始模板DNA的数量，从而判断样品中是否存在猪源链球菌及其大致浓度。

样品处理

标准中详细说明了样品的采集、保存、前处理步骤，包括如何从不同类型的样本（如组织、血液、环境样本等）中有效提取DNA，确保检测的准确性不受前期处理过程的影响。

PCR反应体系与条件

制定了荧光PCR反应所需的试剂组成、反应体积、各成分浓度以及优化后的PCR扩增程序（包括温度设置、循环次数等），以确保检测的特异性和灵敏度。

质量控制

强调了内部对照、阳性对照和阴性对照的应用，用以监测整个检测过程中的污染情况及试剂有效性，确保检测结果的可靠性。

结果判定与报告

规定了根据荧光信号的强度及Ct值来判定样品中链球菌的有无及其数量，并对结果报告格式提出了具体要求，确保检测结果的标准化表达和交流。

方法验证

标准还涵盖了方法验证的相关指导原则，包括敏感性、特异性、重复性及再现性的评估方法，以证明该检测方法的科学性和实用性。


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  • 现行
  • 正在执行有效
  • 2005-09-27 颁布
  • 2005-11-01 实施
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GB/T 19915.6-2005猪源链球菌通用荧光PCR检测方法_第1页
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文档简介

ICS07.100.30C53中华人民共和国国家标准GB/T：19915.6—2005猪源链球菌通用荧光PCR检测方法Methodofthereal-timePCRforthedetectionofSireptococcussuis2005-09-27发布2005-11-01实施中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局发布中国国家标准化管理委员会

GB/T19915.6-2005前本标准的附录A是规范性附录·附录B是资料性附录。本标准由国家标准化管理委员会提出。本标准由全国动物防疫标准化技术委员会归口本标准起草单位：中华人民共和国北京出入境检验检疫局、中国兽医药品监察所。本标准主要起草人：张鹤晓、宋立、高志强、宁宜宝、周琦、乔彩霞、杨承槐、吴丹、谷强本标准系首次发布的国家标准

GB/T19915.6—2005猪源链球菌通用荧光PCR检测方法1范围本标准规定了猪源链球菌通用荧光PCR检测方法本标准适用于增菌培养物、疑似病料及生猪执子、猪组织样品中猪源链球菌的检测规范性引用文件下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件,其随后所有的修改单(不包括勒误的内容)或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件,其最新版本适用于本标准。GB/T19438.1—2004禽流感病毒通用荧光RT-PCR检测方法缩略语本标准采用下列缩略语：荧光PCR荧光聚合酶链式反应C值每个反应管内的荧光信号量达到设定的闽值时所经历的循环圈数DNA脱氧核糖核酸TagDNA聚合酶PBS磷酸盐缓冲生理盐水原理采用TagMan方法.在比对猪源链球菌16SrDNA基因序列的基础上.设计针对该基因的特异性引物和特异性的荧光双标记探针进行配对。探针5"端标记FAM荧光素为报告荧光基团(用R表示）3"端标记TAMRA荧光素为浑灭荧光基团(用Q表示）,它在近距离内能吸收5°端荧光基团发出的荧光信号。PCR反应进入退火阶段时,引物和探针同时与目的基因片段结合，此时探针上R基团发出的荧光信号被Q基团所吸收.仪器检测不到荧光信号;而反应进行到延伸阶段时.Taq酶的5"→3"的外切核酸酶功能将探针降解。这样探针上的R基团游离出来,所发出的荧光不再为Q所吸收而被检测仪所接收。随着PCR反应的循环进行,PCR产物与荧光信号的增长呈现对应关系。5猪源链球菌通用荧光PCR检测实验室的标准化设置与管理猪源链球菌通用荧光PCR检测实验室的标准化设贸与管理见GB/T19438.1—2004中附录C。试剂和材料6.1除另有说明.所用试剂均为分析纯。6.1.1无水乙醇：-20℃预冷6.1.275%乙醇;用新开启的无水乙醇和无DNA酶的灭菌纯化水

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