Agilent定量分析讲义

第七章定量基础

BBBBB=基线BVBV=峰谷点B

PBP=基线渗透BHHH=水平基线(基线漂移）各种积分事件校正（定量） 校正即是利用某个峰的峰高或峰面积来确定其对应组分的浓度或含量 当检测器灵敏度针对不同的组分而变化；及检测器对同一组分不同含量响应值发生变化时须做校正校正方法*面积百分比法AREA%

*峰高百分比法HEIGHT%

归一化法NORM%

外标法ESTD

内标法ISTD*不是校正方法面积百分比法AREA% AREA(pk)AREA%= x100%AREA(pk) 假定检测器响应都相同所有组分都流出所有组分都被检测到优点

缺点无需做校正 以上所有的假定简单、快速的定量过程 需测量所有的组分进样量不要求严格 所有的面积都必须准确校正因子绝对响应时间RF=含量/面积校正检测器响应与组分的含量及其它组分的存在无关含量 100 100200面积 3000 2500 4000归一化法(NORM) RF(pk)xAREA(pk) NORM%= x100%[RF(pk)xAREA(pk)] 假定所有组分都流出所有组分都被检测到优点

缺点简单、快速的定量过程 所有组分峰都要流出进样量不要求严格 需测量所有的组分 必须校正所有的峰

外标法（ESTD） 含量＝面积(pk)xRF(pk) 优点 校正检测器的响应 只对欲分析的组分峰做校正 无需所有峰都能被检测到 缺点 进样量必须准确 仪器必须有良好的稳定性 需定期做再校正外标法校正过程首先准备一个混合标样，其中感兴趣组分的浓度须准确知道运行标准样品建立校正表运行待测样品并使用校正表分析它需要时进行再校正单级校正对每一峰只做一次校正单级校正中做了如下假设： 响应因子不会因为某峰对应物质的含量 变化而发生变化 响应曲线须通过原点含量响应值(A或H)含量响应值

A或HA(istd)或H(istd)多级校正对每一峰需做至少两次校正可以补偿检测器对不同含量的样品组分而给出 非线性响应。响应曲线可以不通过原点定量分析多级校正过程首先准备一个混合标样，其浓度应高于欲分析物 的浓度将浓标样等梯度稀释，其中最低浓度低于待测物的浓度运行每一级稀释好的标样在每一级上进行校正运行待测样品并使用校正表分析它需要时进行再校正线性拟合（最小二乘法）含量响应值(A或H)点到点校正曲线含量响应值(A或H)非线性拟合含量响应值(A或H)含量响应值(A或H)含量响应值(A或H)含量响应值(A或H)内标法（ISTD）

RF(pk)面积(pk)含量＝

RF(ISTD)面积(ISTD)优点进样量不严格要求.内标的加入消除了由于进样量、仪器不稳定等因素带来的系统误差。只对欲分析的组分峰做校正缺点必须加一个组分进到样品，易增加面积测量误差。*内标含量=*内标含量面积(pk)面积(ISTD)RF’选择内标物的标准样品中不存在化学性质与样品相似与样品有相同的浓度范围不会与样品发生反应在感兴趣组分附近流出*可得到分离良好的、干净利落的峰色谱性质稳定可迅速容易得到定量方法总结 优点 缺点AREA% 无需校正 检测器的响应必须一致 进样量不严格要求 所有组分峰都须流出 所有组分峰都须被检测到 所有面积都须准确NORM% 进样量不严格要求 所有组分峰都须流出 所有组分峰都须测定 必须校正所有的峰ESTD 校正检测器的响应 进样量必须准确 只对感兴趣峰做校正 仪器需有很好稳定性 无需所有峰都流出 无需所有峰都被检测到

ISTD 进样量不严格要求 必须在所有样品中加入 只对感兴趣峰做校正 一个组分 校正检测器的响应 样品和标样的准备工作 更加复杂本章将学到:如何设置并调试定量数据如何编辑定量结果如何产生定量报告定量数据分析步骤3:查找限定离子步骤2:保留时间窗口内查找目标离子步骤1:在信号窗口内查找峰积分化学工作站定量概念分析标准物分析未知物建立标准曲线由曲线计算含量ResponseAmountStd1UnknownUnknownamtUnknownresponseStd2定量过程连同校正表下载方法文件.下载第一个标准数据文件选择

Calibrate/SetUpQuantitation.设置定量数据资料选择Calibrate/SetUpQuantitation...定量数据资料表参考峰窗口：用于内标非参考缝窗口：用于其它化合物相关窗口：允许目标离子与限定离子的保留时间之差默认值+/-：峰起点与终点须在此范围内浓度单位内标浓度是否用RTE积分单击"InsertAbove"输入化合物输入化合物(续)内标指令用于:增加新级别级别再校正删除级别更新校正表10。00010。000再校正分别选择对浓度和保留时间是否再校正分别对浓度和保留时选择再校正的方式（取代或平均）选择再校正的级别选择Recalibrate化合物信息-第1页化合物信息-第2页化合物信息-第3页校正曲线校正曲线自动定量数据库定量报告选项“MultiView”窗口结果演示交叉定量1.选择Method/EditMethod...2.选定"QuantReport"3.选定报告格式和目的地4.保存方法!!自动生成定量报告使用Qedit手动再积分当前数据声明显示在所有报告中!修改数据状态使用下列工具:TraceModeQuantLocateaPeak/LocateallCompoundsEasyID如果peaks/限定离子找不到,检查:1.积分2.数据文件中的质量数3.时间范围4.信号相关窗口如果出现奇怪的校准曲线,检查:1.数量2.积分事件3.响应定量数据库故障排除查找峰/查找所有化合物修正保留时间校正离子比率设置信号萃取窗口EasyID点击Quantitate/TraceModeQuant对痕量样品进行处理，列出所有相关化合物和内标的定量过程详细资料TraceModeQuant当每个化合物的变化相一致时