艾滋病梅毒乙肝实验室检测

艾滋病、梅毒、乙肝

实验室检测第一页，共120页。主要内容酶联免疫吸附试验〔ELISA〕简介免疫层析法简介样品的采集、保存和运输艾滋病实验室检测梅毒实验室检测乙肝实验室检测第二页，共120页。ELISA简介ELISA原理基础活性相关抗原或抗体的固相化及抗原抗体的酶标记固相载体外表的抗原或抗体酶标记的抗原或抗体免疫学活性酶的活性固相上的酶量与标本中受检物质的量

第三页，共120页。ELISA方法类型检测抗原检测抗体双抗体夹心法间接法捕获法双抗原夹心法竞争法第四页，共120页。ELISA的试剂完好的ELISA试剂盒包含以下各组分：

〔1〕已包被抗原或抗体的固相载体；

〔2〕酶标记的抗原或抗体；

〔3〕酶的底物；

〔4〕阴性对照品和阳性对照品〔定性测定中〕，参考标准品和控制血清〔定量测定中〕；

〔5〕标本〔和结合物〕的稀释液；

〔6〕洗涤液；

〔7〕酶反响终止液。ELISA的试剂〔上〕第五页，共120页。ELISA的试剂固相载体：常用聚苯乙烯固相载体形状主要有三种：微量滴定板、小珠和小试管。以微量滴定板最为常用，专用于EILSA的产品称为ELISA板，国际上标准的微量滴定板为8×12的96孔式。第六页，共120页。ELISA的试剂结合物〔酶标记的抗体或抗原〕常用的酶：辣根过氧化物酶(horseradishperoxidase,HRP)碱性磷酸酶(alkalinephosohatase,AP)第七页，共120页。ELISA的试剂底物HRP：常见的有邻苯二胺(OPD)反响后呈橙红色，用酸终止酶反响后为橙黄色，在492nm处有最高吸收峰四甲基联苯胺(TMB)反响后显蓝色，终止后呈黄色，最适吸收波长为450nm。第八页，共120页。ELISA的试剂洗涤液常用含0.05%吐温20磷酸缓冲盐水。终止液

HRP常用强酸，最常见2mol/L硫酸第九页，共120页。包被特异性抗原双抗原夹心法ELISA检测抗体1.加样2.孵育3.洗涤4.加入二抗5.孵育6.显色酶标记的特异性抗原第十页，共120页。操作要点标本的采取和保存加样孵育洗涤显色与终止第十一页，共120页。标本的采取和保存

防止溶血，红细胞溶解时会释放出具有过氧化物酶活性的物质，以HRP为标记的ELISA测定中，溶血标本可能会增加非特异性显色。血清标本宜在新颖时检测。如有细菌污染，菌体中可能含有内源性HRP，也会产生假阳性反响。第十二页，共120页。标本的采取和保存冻结血清融解后，蛋白质部分浓缩，分布不均，应充分混匀并防止产生气泡。混浊或有沉淀的血清标本应先离心或过滤，澄清后再检测。标本防止反复冻融，反复冻融过程中的机械剪切力会破坏蛋白质构造，使抗体效价下降，因此血清标本如需作屡次检测，宜少量分装冻存。第十三页，共120页。加样

准确加到微孔板底部，防止加在孔壁上部，并注意不可溅出，不可产生气泡，参加后及时放入孵箱。第十四页，共120页。孵育

孵育的时间要掌握好，严格按照说明书操作。注意封板，防止蒸发。反响板不宜叠放，以保证各板的温度都能迅速平衡注意孵育中边缘效应第十五页，共120页。洗涤洗涤在ELISA过程中虽不是一个反响步骤，但却决定着实验的成败。ELSIA就是靠洗涤来到达别离游离和酶标记物的目的。通过洗涤以去除残留在板孔中没能与固相抗原或抗体结合的物质，以及在反响过程中非特异性地吸附于固相载体的干扰物质。聚苯乙烯等材质对蛋白质的吸附是普遍性的，所以在洗涤时应把这种非特异性的干扰物质洗涤下来。第十六页，共120页。洗涤各种试剂盒的洗液不要混用。按要求稀释，洗液假如结晶应待其融解后配制。孔内液体被洗板机吸收得越干净洗涤效果更好，手工洗板防止洗液在孔内形成气泡。第十七页，共120页。显色与终止显色剂不用过期显色剂，肉眼可见浅蓝色的TMB显色剂不可用加终止液时应防止产生气泡。如产生较多气泡，那么会导致假阳性。不允许肉眼判读结果第十八页，共120页。第十九页，共120页。第二十页，共120页。第二十一页，共120页。严谨的设计，优质的试剂，正确的操作和良好的仪器是保证ELISA必要条件。严格遵照规定操作，必能得出准确的结果。ELISA法质量管理第二十二页，共120页。快速检测〔免疫层析法〕简介快速测试的临床应用日常诊断测试紧急检测用处(外科手术，输血)针头刺伤母婴筛查就职和移民体检性犯罪人员检查偏远地区户外检测第二十三页，共120页。免疫层析法的原理第二十四页，共120页。免疫层析法的原理表层保护膜顶部膜片样品别离垫连接物垫捕捉条膜强硬低部膜片成熟的膜片叠加技术和免疫层析法完美组合第二十五页，共120页。免疫层析法在硝酸纤维素膜上预置胶体金标记的抗原，同时分别在其下方的检测区包被抗原，对照区包被抗人IgG。样品加至样品孔后，样品中的抗体先与胶体金标记的抗原结合形成复合物。由于层析作用，复合物沿硝酸纤维素膜挪动，到达检测区时那么与包被于其上的抗原形成双抗原夹心免疫复合物，显色出现肉眼可见的红色条带；第二十六页，共120页。在质控区出现另一条红色条带作为质控。无需冷藏、步骤简捷、无需任何仪器设备及容易解释结果等特点，合适于基层实验室筛查使用。第二十七页，共120页。免疫层析试剂盒操作步骤第二十八页，共120页。血清/血浆样品加50ul样品于样品垫中15分钟内读取结果第二十九页，共120页。全血样品加50ul样品于样品垫中手指血方法静脉血方法加一滴缓冲液15分钟内读取结果第三十页，共120页。注意严格按照试剂盒说明进展结果读取。时间过短或过长都会影响判读结果由于血红蛋白的存在，时间过长〔如>20分钟〕那么有色的血红蛋白也层析到检测线位置，影响判读结果。第三十一页，共120页。快速检测的优势特点取样品种：血清,血浆和全血无须仪器,容易使用：1至2步即可快速：一般15分钟体积小,室温稳定,包装防潮,便携式内置质控,每一人份一条,可批式或单个样品临床质控,不单监测产品质量,其样本反响的质量也受监控第三十二页，共120页。质量控制试剂内对照：为确保结果有效，在样品反响条中放入质控条并标有“Control〞，当分析完毕后质控条没有变红，测试结果无效，必须重测。外部质控品：包含阴性和阳性样品，不能使用ELISA实验质控品。需使用外部质控品做质量控制：更换试剂批号；更换检测人员；更换包装；每个检测日；更换试剂厂家。需参加省级或地市级CDC组织的实验室才能验证。第三十三页，共120页。样品的采集、保存和运输1、样品采集〔1〕样品采样前准备①准备采血用具〔平安针具，如蝶形针〕、皮肤消毒用品〔70%乙醇等〕、采血管及试管架、耐穿刺防渗漏的利器盒、油性记号笔等，并检查所需物品是否已备齐，是否在有效期内，有无破损。②制定样品编码的标准操作程序〔SOP〕。③使用专用的样品记录本或登记表记录样品信息，建议录入电脑保存。第三十四页，共120页。样品的采集、保存和运输1、样品采集〔2〕样品采集①核对受检者信息与样品管的标记是否一致，应注明样品采集时间。选择符合生物平安要求的采血室，受检者坐〔卧〕于适宜的位置。②消毒部分皮肤，用真空采血管抽取足量静脉血，或用一次性注射器抽取静脉血，转移至真空管中〔转移时制止直接将针头插入真空管，应去除针头，翻开真空管直接注入〕，如真空管中加有添加剂，那么需轻轻颠倒混匀6～8次，备用。③采血完成后的穿刺针头必须丢弃于利器盒内，防止发生职业暴露。第三十五页，共120页。样品的采集、保存和运输2、样品处理〔1〕血浆：将采集的抗凝全血1500～3000r/min离心15min，上层即为血浆，吸出置于与采血管标记一致的螺口带硅胶垫的离心管中，备用。〔2〕血清:室温下自然放置1～2h，待血液凝固、血块收缩后，操作同上。第三十六页，共120页。样品的采集、保存和运输3、样品保存〔1〕用于抗体检测的血清或血浆样品，1周内进展检测的存放于2～8℃，一周以上存放于-20℃以下，超过三个月的应保存于-80℃。〔2〕艾滋病检测筛查实验室检测的筛查阳性样品应及时送筛查中心实验室或确证实验室，筛查阴性样品，可根据详细需要决定保存时间，建议至少保存1～2个月。特殊用处或专项工程的样品根据详细要求确定保存时间。第三十七页，共120页。*滤纸干血斑〔DBS〕根据需要，可将采集的各种血液样品制备成滤纸干血斑，保存、运输及检测。最常用的是用抗凝全血、末梢全血和血浆制备滤纸干血斑。用移液器从样品管中汲取100μL抗凝全血〔或血浆〕样品，对准滤纸印圈的中心处，将样品滴在滤纸上，或将穿刺后自皮肤伤口流出的末梢全血直接滴加在滤纸印圈的中心处。根据需要，连续在数个印圈上滴加样品。第三十八页，共120页。于室温下自然枯燥至少4小时〔潮湿气候下至少枯燥24小时〕，不要加热或堆叠血斑，勿与其它界面接触。血斑充分枯燥后，将其放入密封袋中，防止血斑之间的互相污染，同时放入枯燥剂及湿度指示卡，密封包装，保存备用。第三十九页，共120页。样品的采集、保存和运输4样品的运送应符合生物平安要求；要获得相应部门批准并由具有资质的人员专程护送。应采用三层容器对样品进展包装，随样品应附有与样品唯一性编码相对应的送检单。送检单应标明受检者姓名、样品种类等信息，并应放置在第二层和第三层容器之间。第一层容器：直接装样品，应防渗漏。样品应置于带盖的试管内，试管上应有明显的标记，标明样品的唯一性编码或受检者姓名、种类和采集时间。在试管的周围应垫有缓冲吸水材料，以免碰碎。第四十页，共120页。第二层容器：包容并保护第一层容器，可以装假设干个第一层容器。要求不易破碎、带盖、防渗漏、容器的材料要易于消毒处理。第三层容器：包容并保护第二层容器的运输用外层包装箱。外面要贴上醒目的标签，注明数量、收样和发件人及联络方式，同时要注明“小心轻放、防止日晒、小心水浸、防止重压〞等字样，还应易于消毒。用于抗体检测的血清和血浆样品应在冻存条件下运送。用于CD4+和CD8+T淋巴细胞测定的样品应在室温下〔18～25℃〕或4℃〔特殊要求时〕运送。用于病毒载量检测的样品应在-20℃以下运输。DBS样品应在室温下〔18～25℃〕运送。每一件包装的体积以不超过50mL为宜。运送样品必须有记录。特殊情况下经有关部门批准可以用特快专递邮寄样品，但必须按三层包装，将样品管包扎好，严禁使用玻璃容器。第四十一页，共120页。样品的采集、保存和运输5样品的接收样品包裹必须在具有处理感染性材料才能的实验室内、由经过培训的、穿戴防护衣、戴口罩、防护眼镜的工作人员在生物平安柜中翻开，用后的包裹应及时进展消毒。核对样品与送检单，检查样品管有无破损和溢漏。如发现溢漏应立即将尚存留的样品移出，对样品管和盛器消毒，同时报告实验室负责人和上一级实验室技术人员。检查样品的状况，记录有无严重溶血、微生物污染、血脂过多以及黄疸等情况。假如污染过重或者认为样品不能被承受，应将样品平安废弃。并将样品情况立即通知送样人。接收样品时应填写样品接收单。第四十二页，共120页。艾滋病实验室检测第四十三页，共120页。HIV简介逆转录病毒科慢病毒属单股正链的RNA病毒，电镜下可见一致密的圆锥状核心，20面体，具有包膜〔被膜〕HIV-1和HIV-2，目前我省也检测出HIV-2。HIV是什么东西？第四十四页，共120页。HIV包膜蛋白〔env〕：gP160、gP120、gP41

核心蛋白〔gag〕：P17、P24、P55酶蛋白〔pol〕：P66、P51〔逆转录酶〕、P31〔整合酶〕第四十五页，共120页。HIV病毒及基因组构造第四十六页，共120页。HIV的感染●HIV感染具有CD4+的T淋巴细胞。●研究发现，主要感染具有CCR5、CXCR4

受体的细胞。●主要有T淋巴细胞、单核细胞和巨噬细胞。第四十七页，共120页。HIV病毒感染的细胞第四十八页，共120页。HIV感染的过程1、病毒颗粒与宿主细胞外表的受体结合。2、病毒的核心穿过细胞膜进入宿主细胞。3、在病毒核内，病毒RNA逆转录成DNA。4、在病毒核蛋白的协助下，病毒DNA转运到宿主细胞核内。5、病毒DNA随机整合到宿主细胞DNA〔染色体〕上，形成前病毒。第四十九页，共120页。HIV感染的过程6、以前病毒为模板，在细胞RNA聚合酶Ⅱ的参与下，合成病毒RNA。或转录成病毒mRNA。同时宿主细胞DNA也转录成mRNA。7、以病毒mRNA为模板，在tRNA的参与下，合成病毒蛋白。8、装配核衣壳。9、以出芽方式分泌出细胞，形成完好的病毒颗粒。第五十页，共120页。HIV的感染步骤：第五十一页，共120页。HIV感染时抗体反响及抗原血症注意：对P24、P55的反响也见于未感染的个体第五十二页，共120页。促进AIDS发生的因素HIV感染后在一段时间内保持极低程度的复制，使AIDS无病症期〔临床埋伏期〕持续时间很长〔平均7～10年〕：1.由于细胞免疫和体液免疫可以降低和调节病毒复制。2.是HIV进入CD4+T淋巴细胞后，逃过免疫监视部分成为埋伏型。第五十三页，共120页。促进AIDS发生的因素研究说明，一些细胞因子和其他病毒感染，能激活HIV的复制和表达：糖皮质激素和白介素〔IL-4，IL-6和IL-10等细胞因子〕能协同增强HIV的复制。肿瘤坏死因子〔TNF〕α、β和IL-1亦能导致HIV的表达，其中特别是TNF-α。第五十四页，共120页。抵抗力HIV对热敏感，56℃30min灭活。室温保存7天，仍保持活性。不加稳定剂的前提下，-70℃冰冻失去活性，而35%山梨醇或50%胎牛血清中-70℃冰冻3个月仍保持活性。对消毒剂敏感，0.2%次氯酸钠0.1%漂白粉，70%乙醇，35%异丙醇、50%乙醚、0.3%H2O20.5%来苏尔处理5′能灭活病毒。对紫外线、γ射线有较强抵抗力。

第五十五页，共120页。HIV的多态性HIV是一种逆转录病毒HIV需要用它的逆转录酶来复制其基因组HIV逆转录酶缺少5’-3’修复活性，病毒在复制过程中会产生很多的错误HIV逆转录酶的错误率是3x10-5/碱基/复制周期HIV基因组含近1x104个碱基就概率推论,HIV每复制一次其基因组将含个错误结果22%被感染的细胞将至少含有1个错误碱基第五十六页，共120页。病毒多态性的负面影响疫苗:难以解决免疫逃避的问题.药物:难以解决耐药病毒的问题.第五十七页，共120页。HIV的传播方式如何有效阻断HIV的传播？第五十八页，共120页。1983年第一次被发现，1986年通过国际病毒分类委员会被命名。1985年在我国首次发现，为一男性阿裔美国旅游者。我省于1995年发现第一例HIV感染者。第五十九页，共120页。HIV是如何传播的？三个条件：1.有病毒从感染者体内排出2.排出的病毒要经过一定方式传递给别人3.有足量的病毒进入体内三种途径：1.血液传播2.性接触传播3.母婴传播第六十页，共120页。静脉注射毒品的人共用未经消毒的针具输入含有HIV的血液制品或器官移植医务人员工作中发生的职业暴露，如被针头刺伤、粘膜接触体液等血液传播第六十一页，共120页。性接触传播精液、阴道分泌物、月经血中的HIV可通过生殖器粘膜传播，未经设防的性活动很易引起HIV传播影响HIV性传播的因素：性伴数、性伴的感染阶段，性病和生殖器部分的损害程度，性交方式及保护措施等第六十二页，共120页。母婴传播的概率在25%-40%之间感染HIV的妇女可通过胎盘、分娩及哺乳将艾滋病传播给婴儿

母婴传播第六十三页，共120页。不同时期母婴传播的概率母婴传播哺乳妊娠分娩过程020％40％60％80％100％第六十四页，共120页。艾滋病实验室检测县级以上疾病预防控制中心和二级以上医疗卫活力构要建立艾滋病筛查实验室，不具备建立筛查实验室的要设立检测点，开展快速检测。

——中国遏制与防治艾滋病行动方案〔2006-年〕国务院第六十五页，共120页。HIV实验室应编写的SOP文件样本的接收、登记和处理检测方法和步骤仪器的使用维护和校准实验室中的质量控制结果解释和报告保密程序检测数据的记录与保存追踪和处理实验室的清理和消毒实验室平安防护第六十六页，共120页。标准化操作程序(SOP)1〕清楚、简洁的标题和统一的SOP编号2〕SOP编写和修改日期3〕编写和修订SOP的人员姓名4〕方法、目的和原理5〕相应的职业标准6〕检测设备和试剂7〕参考其他包含相关步骤的SOP8〕安康和平安操作指南(参考?标准?附件一，实验室平安施行SOP)9〕每一操作步骤和质控步骤用编号描绘10〕结果的讨论和报告以及出现问题时所采取的措施11〕附录，包括相关的附加文件如标准表格、设备和试剂盒说明书等。第六十七页，共120页。SOP和所有其它文档的普遍特征实验室所有人员都可容易查取所有职员熟悉岗位和内容所有程序符合当前实际情况SOP和其他书面程序由作者和/或主任签署和标明明日期–版本控制所有原始记录和报告签署和标明日期用墨涂改，签署和标明日期,而非“擦白〞掌握平安存放的文档的分布清单确定各种类型文件存放的时间.第六十八页，共120页。实验室相关记录表格HIV抗体初筛ELISA实验原始记录.docHIV抗体检测收样记录.doc门诊样本登记表.doc已确认血清样本保存记录表.doc冰箱温度记录.doc仪器使用记录.doc仪器维护及保养记录.doc特种垃圾记录\感染材料消毁表.doc特种垃圾记录\特种垃圾递送单.doc特种垃圾记录\消毒登记表.docHIV抗体筛查阳性送检单.docHIV抗体筛查报告.doc山西省确认实验室来访人员登记表.docHIV抗体初筛阳性样本专用登记表.dot第六十九页，共120页。艾滋病实验室检测艾滋病检测工作须遵守?实验室生物平安通用要求?、?全国艾滋病检测工作管理方法?及?全国艾滋病检测技术标准?。第七十页，共120页。艾滋病实验室检测工作要求1、开展艾滋病检测工作的实验室须经省级卫生行政部门评审验收，获得资格；艾滋病检测实验室技术人员须承受省级或省级以上的艾滋病检测技术和生物平安培训，经考核合格者由相关机构发给培训证书，持证上岗。非卫生专业技术人员不得从事艾滋病检测工作。2、艾滋病筛查实验室的职能：〔1〕开展艾滋病病毒抗体的筛查试验，根据需要可开展其他艾滋病检测工作。〔2〕负责将艾滋病病毒抗体筛查呈阳性反响的样品送当地艾滋病筛查中心实验室或艾滋病检测确证实验室。〔3〕定期汇总艾滋病检测资料，并上报当地艾滋病筛查中心实验室或艾滋病检测确证实验室。每月填写?HIV抗体检测数及阳性人数统计报表?〔?全国艾滋病检测技术标准?附件6〕，并于每月10日前完成网络直报，为开展网络直报的单位，由县级疾病预防控制机构搜集信息后统一上报。〔4〕对自愿咨询检测工作提供技术支持。3、检测技术及程序应符合?全国艾滋病检测技术标准?的要求。第七十一页，共120页。艾滋病实验室检测HIV抗体检测分为筛查试验〔包括初筛和复检〕和确证试验筛查试验常用方法：快速检测〔RT〕酶联免疫吸附实验〔ELISA，第三代或第四代试剂〕

第七十二页，共120页。艾滋病实验室检测筛查结果：阴性——出具“HIV抗体阴性〞报告阳性——填写“HIV抗体筛查阳性送检单〞，按照有关要求上送样品至市级筛查中心实验室或确证实验室，必要时可出具“HIV抗体待复查〞报告第七十三页，共120页。艾滋病检测一般工作流程——快速检测〔RT〕一般工作流程——快速检测〔RT〕第七十四页，共120页。艾滋病检测一般工作流程——酶联免疫吸附实验〔ELISA〕第七十五页，共120页。孕产妇艾滋病抗体检测及效劳流程〔旧〕第七十六页，共120页。孕期艾滋病检测及效劳流程第七十七页，共120页。产时艾滋病抗体检测及效劳流程〔旧〕

〔适用于孕期未承受HIV检测的产妇〕第七十八页，共120页。

产时艾滋病检测及效劳流程

〔适用于孕期未承受艾滋病检测的产妇〕

第七十九页，共120页。艾滋病检测样品样品运送流程第八十页，共120页。山西省艾滋病确证/筛查中心实验室11个各市级CDC开展艾滋病确证检测工作的实验室6个省CDC、太原市、大同市、晋城市、运城市、临汾市开展CD4检测的实验室9个省CDC、太原市、运城市、临汾市、长治市、大同市、朔州市、晋中市、晋城市开展病毒载量检测的实验室1个〔省CDC〕。第八十一页，共120页。梅毒实验室检测第八十二页，共120页。梅毒是由梅毒螺旋体引起的一种慢性、全身的性传播疾病，可分为后天获得性和胎传梅毒。获得性又分为早期和晚期梅毒。早期梅毒病期在2年以内，包括一期、二期和早期埋伏梅毒。晚期梅毒病期在2年以上，包括晚期良性梅毒、心血管梅毒、神经梅毒和晚期埋伏梅毒。胎传梅毒又分为早期〔出生后2年内发病〕和晚期梅毒〔出生后2年后发病〕第八十三页，共120页。梅毒的临床病程埋伏期：2～4周平均为3周一期梅毒：硬下疳出现持续3～8周可自行消失二期梅毒：损害持续3～12周可自行消失以后又可反复发作持续2年三期梅毒：病程大于2年可有严重的神经系统或心血管系统的损害第八十四页，共120页。梅毒发病的自然病程早期梅毒〔2年内〕

9~90天6周~6个月一期梅毒二期梅毒早期埋伏梅毒硬下疳皮疹无病症扁平湿疣梅毒性脱发系统性表现发热全身不适浅表淋巴结肿大关节炎关节疼痛虹膜炎脑膜炎

晚期梅毒〔2年后〕3~20年晚期埋伏梅毒三期梅毒无病症神经梅毒心血管梅毒脏器梅毒皮肤粘膜梅毒第八十五页，共120页。梅毒实验室检测暗视野显微镜检查：损害部位或淋巴结穿刺液见梅毒螺旋体非梅毒螺旋体抗原血清学试验〔RPR、USR、VDRL、TRUST〕：阳性如感染缺乏2－3周可阴性梅毒螺旋体抗原血清学试验(TPPA、TPHA、FTA-ABS、TP-ELISA、TP-WB)：阳性第八十六页，共120页。梅毒实验室检测脑脊液检查:正常时WBC计数<3×106/L,蛋白量<0.1-0.4g/L,异常时WBC计数≧10×106/L,蛋白量＞1-2g/L,且无其它原因引起该变化。VDRL或FTA-ABS试验阳性组织病理检查：有三期梅毒的组织病理变化第八十七页，共120页。梅毒实验室检测病原学直接检查–暗示野显微镜检查和免疫荧光检测：适用于早期梅毒的硬下疳和扁平湿疣期原理利用暗视野显微镜和荧光方法直接观察梅毒螺旋体的形态优点容易出结果时间短敏感性到达80%缺点需要受过专门培训并有丰富经历的实验人员对标本采集要求高需要在没有开场治疗之前检测第八十八页，共120页。梅毒实验室检测暗视野显微镜免疫荧光第八十九页，共120页。梅毒实验室检测非梅毒螺旋体抗原血清试验是用心磷脂作为抗原，检测血清中抗心磷脂抗体，本实验敏感性高而特异性较低。性病研究实验室试验〔VDRL〕快速血浆反响素试验(RPR)不加热血清反响素玻片试验(USR)甲苯胺红不加热血清试验〔TRUST〕第九十页，共120页。梅毒实验室检测TRUST实验检测规程〔非特异性抗体〕：一、原理：采用类脂质抗原重悬于含有特制的甲苯胺红溶液中制成，类脂质抗原能与患者血清或血浆中的反响素形成凝集反响，与甲苯胺红共同形成肉眼可见的凝集颗粒。二、操作步骤：㈠定性试验：①分别汲取50ul梅毒阳性对照和阴性对照均匀铺加在纸卡的两个圆圈中。②取待检血清或血浆50ul〔不需灭活〕置于纸卡的另一圆圈中。③用专用滴管及针头垂直分别滴加TRUST试剂1滴于上述血清中。④按每分钟100转摇动8分钟，立即于光线充足处肉眼断定结果，三分钟内完成㈡定量试验：将待检血清用生理盐水作倍比稀释，然后按上述定性方法进展试验，以呈现明显凝集反响的最高稀释度作为该血清的凝集效价。三、结果判断：①阳性反响〔+++～++++〕：可见中等或较大的红色凝聚物。②弱阳性反响〔+～++〕：可见较小的红色凝聚物。③阴性反响〔-〕：可见均匀的抗原颗粒而无凝聚物。四、本卷须知：①本试验在23～29℃条件下进展。②TRUST试剂使用前应充分摇匀。③本试验系非特异性反响，需结合临床进展综合分析，必要时需作梅毒螺旋体抗体特异性试验。第九十一页，共120页。第九十二页，共120页。梅毒螺旋体抗原血清试验： 荧光梅毒螺旋抗体吸收试验〔FTA-ABS〕梅毒螺旋体血凝试验〔TPHA血、TPPA颗粒〕酶联免疫吸附试验〔TP-ELISA〕梅毒螺旋体抗体蛋白免疫印迹实验〔TP-WB〕梅毒实验室检测第九十三页，共120页。实验室检测方法的敏感性和特异性比较 敏感性(%) 特异性(%) 一期 二期 埋伏 三期VDRL 78 100 95 71 98RPR 86 100 98 73 98TPHA 76 100 97 94 99FTA-ABS84 100 100 96 97第九十四页，共120页。梅毒实验室检测的意义NTP(TRUSTRPR…)TP(TPPAELISA…)意义——排除感染梅毒或极早期梅毒（潜伏期尚无任何抗体产生），AIDS合并感染梅毒+—假阳性—+梅毒既往感染,或早期梅毒++现症梅毒或治愈的晚期梅毒，既往感染（梅毒血清固定）第九十五页，共120页。影响梅毒血清学实验假阳性的常见原因非梅毒螺旋体血清学实验梅毒螺旋体血清学实验感染因素细菌性心内膜炎、软下疳病毒性肝炎传染性单核细胞增多症结核、麻风、麻疹、疟疾、水痘支原体或肺炎双球菌肺炎其它螺旋体感染，如雅司、品他传染性单核细胞增多症麻风疟疾莱姆病非感染因素妊娠、使用毒品、恶性肿瘤、自身免疫病、多发性骨髓瘤、慢性肝脏损害、衰老系统性红斑狼疮甲状腺炎第九十六页，共120页。前带现象第九十七页，共120页。梅毒治疗的血清学随访梅毒治疗的血清学随访〔1〕梅毒经充分治疗后，应随访2～3年。第一年每3个月复查一次，以后每半年复查一次，包括临床和血清〔非螺旋体抗原试验〕学检查。第九十八页，共120页。梅毒治疗的血清学随访〔2〕疗后6个月内血清滴度不下降4倍，应视为治疗失败，或再感染，需加倍剂量，重新治疗，还应考虑是否需要作脑脊液检查，以观察神经系统有无梅毒感染。第九十九页，共120页。梅毒治疗的血清学随访〔3〕一期梅毒在1年以内，二期梅毒在2年以内转阴均属正常。少数晚期梅毒可持续在低滴度上〔随访3年以上〕可判为血清固定。神经梅毒要随访CSF，每半年一次，直至CSF完全转为正常。第一百页，共120页。孕产妇梅毒检测及效劳流程第一百零一页，共120页。乙肝实验室检测第一百零二页，共120页。HBV简介嗜肝DNA病毒科正嗜肝DNA病毒属带包膜的DNA病毒完好的病毒颗粒又称Dane颗粒，直径42nm，由包膜和核心双层构造组成外膜为脂蛋白构造，主要成分为外表抗原〔HBsAg〕DNA为双链不完全环形DNA分子，全长3200bp，由长短不一的正负链组成。第一百零三页，共120页。Dane颗粒球形,双层衣壳。外衣壳=包膜(脂质双层+蛋白质)HBsAg等内衣壳：HBcAg、HBeAg内部：

DNA---环状双链DNA多聚酶HBV具有感染性的完好的HBV颗粒第一百零四页，共120页。乙肝病毒Dane颗粒构造形式图DNA多聚酶双股DNA核心HBcAgHBeAg内衣壳外衣壳脂质双层外壳蛋白PreS1PreS2HBsAg有逆转录酶活性有合成DNA功能第一百零五页，共120页。抵抗力抵抗力强于HAV；对低温枯燥紫外线耐受；不被70％乙醇灭活；高压灭菌、环氧乙烷、100℃10min可灭活；0.5%过氧乙酸、5%次氯酸钠灭活病毒，但不能消除HBsAg的抗原性。第一百零六页，共120页。传播方式传染源：急性、慢性患者或无病症HBsAg携带者传播途径：体液-血液传播-性接触传播-母婴传播第一百零七页，共120页。TransmissionHepatitisBisalsospreadbypercutaneousormucosalexposuretoinfectedbloodandvariousbodyfluids,aswellasthroughsaliva,menstrual,vaginal,andseminalfluids……Infectioninadulthoodleadstochronichepatitisinlessthan5%ofcases.……Inaddition,infectioncanoccurduringmedical,surgicalanddentalprocedures,tattooing,orthroughtheuseofrazorsandsimilarobjectsthatarecontaminatedwithinfectedblood.第一百零八页，共120页。大部分人在急性期无病症Mostpeopledonotexperienceanysymptomsduringtheacuteinfectionphase.一些人会有持续数周的的病症，包括黄疸、深色尿〔黑尿〕、极度疲劳、恶心、呕吐及腹痛，一小部分急性肝炎这可出现肝功能衰竭，可导致死亡。However,somepeoplehaveacuteillnesswithsymptomsthatlastseveralweeks,includingyellowingoftheskinandeyes(jaundice),darkurine,extremefatigue,nausea,vomitingandabdominalpain.Asmallsubsetofpersonswithacutehepatitiscandevelopacuteliverfailurewhichcanleadtodeath.临床病症第一百零九页，共120页。一部分人可转成慢性感染，进展为肝硬化或肝癌Insomepeople,thehepatitisBviruscanalsocauseachronicliverinfectionthatcanlaterdevelopintocirrhosisoftheliverorlivercancer.>90%安康成人感染乙肝病毒后一年内会自愈Morethan90%ofhealthyadultswhoareinfectedwiththehepatitisBviruswillrecovernaturallyfromtheviruswithinthefirstyear.临床病症第一百一十页，共120页。慢性转变主要取决于年龄，不到6岁的孩子成为感染乙肝病毒感染者的可能性最大：80–90%一岁内感染的婴儿进展为慢性感染30–50%六岁以下的儿童近进展为慢性感染Thelikelihoodthatinfectionwiththevirusbecomeschronicdependsupontheageatwhichapersonbecomesinfected.Childrenlessthan6yearsofagewhobecomeinfectedwiththehepatitisBvirusarethemostlikelytodevelopchronicinfections:80–90%ofinfantsinfectedduringthefirstyearoflifedevelopchronicinfections;30–50%ofchildreninfectedbe