胶质瘤患者肿瘤组织中IGF2BP2的表达及临床意义

胶质瘤患者肿瘤组织中IGF2BP2的表达及临床意义薛皓予;刘文庆;尚明华;王文斐;刘仲涛;田继辉【摘要】目的探讨胰岛素样生长因子2结合蛋白2(insulin-likegrowthfactor2bindingprotein2IGF2BP2)在脑胶质瘤中的表达状况.方法应用实时荧光定量PCR技术检测47例不同病理级别(9例Ⅱ级,21例Ⅲ级,17例Ⅳ级)胶质瘤组织IGF2BP2表达情况,同时采用免疫组化法检测47例肿瘤组织中IGF2BP2的表达情况.结果Ⅱ级胶质瘤IGF2BP2蛋白阳性表达率阳性率(100％)明显高于胶质瘤Ⅲ级(52.38％)(P=0.013)和Ⅳ级(11.76％)(P=0.000)胶质瘤Ⅲ级高于Ⅳ级(P=0.015);Ⅱ级胶质瘤IGF2BP2的基因表达量(0.075±0.020)高于Ⅲ级(0.047±0.011)(P=0.016)和Ⅳ级胶质瘤(0.026±0.004)(P=0.000),Ⅲ级胶质瘤IGF2BP2的基因表达量高于Ⅳ级胶质瘤(P=0.000)IGF2BP2IGF2BP2【期刊名称】《宁夏医科大学学报》【年(卷),期】2014(036)005【总页数】4页(P487-490)【关键词】胶质瘤;免疫组化;IGF2BP2;实时荧光定量PCR【作者】薛皓予;刘文庆;尚明华;王文斐;刘仲涛;田继辉【作者单位】宁夏医科大学,银川750004;宁夏医科大学总医院神经外科,银川750004;宁夏医科大学,银川750004;宁夏医科大学,银川750004;宁夏医科大学总医院神经外科,银川750004;宁夏医科大学总医院神经外科,银川750004【正文语种】中文【中图分类】R739.412mRNA-2(insulinlikegrowthfactors2bindingprotein2，IGF2BP2)是胰岛素生长因子家族中的一员[1]IGFIGFBPsIGF2BP2PCRIGF2BP2IGF2BP2材料与方法20125201347272015～7546(WHO2000963211561710%中性甲醛溶液固定，常规石蜡包埋。所有标本均经病理科医师确诊为脑胶质瘤。TrizolReagent(InvitrogencDNAsynthesiskit(FermentasSYBRGreen/ROXqPCRMasterMixPCRIGF2BP2Anti-IGF2BP2antiboby(Abcam)；FTC2000PCR(Bio-RAD)。RNA100mgTrizolReagentlmL；彻底匀浆后加入0.2mL氯仿,颠倒混匀；12000r·min-1离心，取上清，加入等体积异丙醇，颠倒混匀；12000r·min-1离心，弃上清，加入1mL75%乙醇洗涤RNA沉淀，12000r·min-1离心，弃上清；无酶ddH2O溶解RNA沉淀；紫外分光光度法检测RNA含量和纯度，琼脂糖凝胶电泳分析RNA完整性。cDNARNA5μg，PCR0.5μLOligo(dT)引物，ddH2O12μL，充分混匀；70℃5min，冰浴冷却；依次加入5×reactionbuffer4μL、Ribonucleaseinhibitor(20U·mL-1)1μLdNTPmix(10mmol·L-1)2μL，充分混匀并离心，37℃5minM-MuLVReverseTranscriptase(200U·mL-1)1μL；42℃60min70℃10min中止反应，冰上冷却。-20℃cDNAPCRβ-actinIGF2BP2β-actin5.0-3'，反向：5'-CTCTGGATAAGAGTGATGAT-3'，产物大小153bp；β-actin正向：5'-TGACGTGGACATCCGCAAAG-35'-CTGGAAGGTGGACAGCGAGG-3'，204bp。PCRPCR20μL：cDNA1μL，5×PCRbuffer4μL，Primers(25pmol·μL-1)0.5μL×2，SYBRGreenⅠ0.2μL，dNTPs(10mmol·L-1)1μL，Taq(5U·μL-10.2μL，Mg2+(25mmol·L-1)2μL，ddH2O11.1μLPCR：94℃4min；94℃30s、60℃30s、72℃30s30Ct基因表达指数测定本实验技术使用表达恒定的管家基因(β-actin)作为内参，来获得IGF2BP2相对于β-actin的表达指数计算各组2-ΔCt值并统计。免疫组化0.12min，3%H2O21∶100IGF2BP2(Abcam公司)孵育，40.1%PBS3IgGPBSTE2000-eNikonIGF2BP25200IG2FBP21；200%；1<25%；2：25%～50%；3>50%。将两者的乘积做为免疫组化半定量的评判标准：0分(-)、1～3分(+)、4～6分(++)、7～9分(+++)。统计学方法SPSS18.0PCR:Dunnetts，P≤0.05结果PCRIGF2BP2IGF2BP2IGF2BP22-ΔCt：Ⅱ级胶质瘤(0.075±0.020)，Ⅲ级胶质瘤(0.047±0.011)；Ⅳ级胶质瘤(0.026±0.004)；经单因素方差分析检验，不同病理级别胶质瘤组织之间IGF2BP2基因表达量总体差异有统计学意义(P=0.006DunnettsIGF2BP2IGF2BP21胶质瘤患者中的IGF2BP2的染色强度明显高于Ⅲ级和Ⅳ级，Ⅲ级高于Ⅳ级,见图1(4)；根据显色强度和范围进行评价得知，表达“+++”只见于Ⅱ级中；在Ⅲ级和Ⅳ级中表达范围在“-～++”；10052.3811.761(P<0.05)。Ⅱ级胶质IGF2BP2(P=0.013)和Ⅳ级(P=0.000)胶质瘤；Ⅲ级强于Ⅳ级(P=0.0151。表1各级别胶质瘤中IGF2BP2的阳性表达水平分级nIGF2BP2表达-++++++阳性率/%Ⅱ级 90144100.00Ⅲ级 211074052.38∗Ⅳ级171511011.76∗∗★与Ⅱ级比较*P<0.05，**P<0.01；与Ⅲ级比较★P<0.013讨论近年来研究发现[4]在多种类型的肿瘤，如乳腺癌、肝癌、脂肪肉瘤和结肠癌中有IGF2IGFIGFBPsIGFBPsIGFsIGFIGF-R的相互作用[5]IGFBPsIGFBPsIGFRsIGFs[6]。IGF2BP2IMP2。IGF2BP22mRNA结合因子家族中的一员[7-8]。IMPIGF2IMPIGF2的翻译，从而降低IGF2的水平。反过来IMP促进IGF2的翻译，提高IGF2的水平。47IGF2BP2IGF2BP2～++”之间，特别是在IGF2BP2PCRIGF2BP2(0.075±0.020)的基因平均表达量明显高于Ⅲ级胶质瘤(0.047±0.011)和Ⅳ级胶质瘤(0.026±0.004)，随着胶质瘤恶性程度的增高，IGF2BP2mRNAIGF2BP2IGF2BP2目前对于IGF2BP2的研究甚少，在近年许多临床流行病学研究显示IGF2BP2基因多态性与胰岛β细胞功能受损、胰岛素抵抗及糖代谢紊乱等有关，提示IGF2BP2可能参与了2型糖尿病的发病。虽然对于IGF2BP2在肿瘤中的研究甚少，但是IGFBPs中的很多成员已经证实和肿瘤存在一定的相关性。有资料证明，IGFBP-4IGFBP-4抑制细胞IGFBP-4Y[9IGFBP7IGFBP7IGF2BP2性。本实验结果可能提示在胶质瘤发生发展过程中，肿瘤组织中的IGF2BP2抑制IGF2IGF2BP2IGF2BP2IGF2IGF2IGF2IGF2BP2恶性进展，而不依赖于与IGF2的结合。目前对于胶质瘤尚缺乏准确的分子标记物，我们的研究为IGF2BP2成为未来可能的肿瘤标记物提供了一种可能，还可以为分子病理诊断提供一定的帮助，但其目前的作用机制尚不清楚，有待于进一步的研究。后期我们将增加样本量及增加试验方法，来进行进一步的验证和探讨。【相关文献】ChristoforidisA，ManiadakiI.StanhopeR2005Growthhormoneinsulin-likegrowthfactor-1axisduringpuberty[J].PediatrEndocrinolRev,2005，3:5-10.SasakiJ，KonishiF，KawamuraYJ，etal.Clinicopathologicalcharacteristicsofcolorectalcancerswithlossofimprintingofinsulin-likegrowthfactor2[J].IntJCancer，2006，119(1):80.OMalleyFP,ParkersR,LattaE,etal.ComparisonofHER2/neustatusassessedbyquantitativepolymerasechainreactionandimmunohistochemistry[J].AmJClinPathol,2001,115:504-511.VMMacaulay.Insulin-likeGrowthFactorsandcancer[J].BrJCancer,1992，65:311-320.AJemal，RSiegel，EWard，etal.Cancerstatistics[J].CACancerJClin,2008，58:71-96.DSachdev，DYee．TheIGFsystemandbreastcancer[J].Endocrine-RelatedCancer，2001，8:197-209.ZhangJY，ChanEK.AutoantibodiestoIGF-ⅡmRNAbindingproteinp62andoverexpressionofp62inhumanhepatocellularcarcinoma[J].AutoimmunRev，2002,1(3):146-153.LuM，NakamuraRM，DentED，etal.AberrantexpressionoffetalRNA-bindingproteinp62inlivercancerandlivercirrhosis[J].