致突变实验综合分析及评价

致突变实验综合分析及评价——第二部分2023/2/101020304CONTENTS细菌回复突变试验（Ames试验）实验方案结果判断依据分析评价背景资料某单位欲对农药——96%二氯吡啶酸原药，进行致突变试验综合分析及评价，见相关资料。现请根据所学知识，查阅资料和文献，思考并讨论以下问题。2023/2/1细菌回复突变试验（Ames试验）[1]Ames试验是利用突变体的测试菌株，观察受试物能否纠正或补偿突变体所携带的突变改变，判断其突变性。原理：采用鼠伤寒沙门菌组氨基酸缺陷突变株作为指示微生物，检测受试物致突变的实验。鼠伤寒沙门菌突变型菌株为组氨基酸缺陷型(his-),不能自行合成组氨酸,在无组氨酸的选择性培养基上不能正常生长，而在含组氨酸的培养基上则可正常生长，当受到致突变物诱变后突变型回复突变为野生型（his+），表现为在无组氨酸的培养基上也能生长的菌落数。如图示：正向突变野生型细菌（his+）突变型细菌（his-）

回复突变目的：根据试验菌株在无组氨酸的培养基上能否形成菌落以及形成菌落的多少，判定受试物是否具有致突变性及致突变性的强弱。2023/2/1实验方案[2-5]一、实验名称：96%二氯吡啶酸原药的鼠伤寒沙门氏菌回复突变试验二、实验目的：观察95％二氯吡啶酸原药对鼠伤寒沙门菌回复突变试验(Ams试验)菌株基因突变，初步探讨其致突变性的强弱。为该农药的毒理学安全性评价提供基础数据。三、实验原理：鼠伤寒沙门菌突变型菌株为组氨基酸缺陷型(his-),不能自行合成组氨酸,在无组氨酸的选择性培养基上不能正常生长，而在含组氨酸的培养基上则可正常生长，当受到致突变物诱变后突变型回复突变为野生型（his+），表现为在无组氨酸的培养基上也能生长的菌落数。根据试验菌株在无组氨酸的培养基上能否形成菌落以及形成菌落的多少，判定受试物是否具有致突变性及致突变性的强弱。为弥补体外实验缺乏代谢活化系统的不足，在测试系统中加入哺乳动物微粒体酶（S9）。2023/2/1实验方案四、试验步骤1、受试物[5]：95％二氯吡啶酸原药，白色絮状固体。2、溶剂：二甲基亚砜(DMSO)，光谱纯，无菌。3、Ames菌株：鼠伤寒沙门菌标准突变株TA97、TA98、TA100和TA102。剂量：采用平板掺入法，在加S9(+S9)和不加S9(一S9)条件下进行测试。在不加S9的条件下测试该药对TA100菌株产生的最小毒性的浓度作为剂量选择的依据。查阅相关文献后（若没有相关文献则根据预实验结果）以每皿5000ug为最高剂量，按5倍组距下设每皿1000、200、40、8ug4个剂量组。4、对照组：设自发对照组、阴性对照组和阳性对照组。阳性对照组不加S9的TA97、TA98和TAl02菌株用敌克松(Dexon)，TAl00菌株用叠氮钠(NaN3)；阳性对照组加S9的TA97、TA98和TAl00菌株用2-氨基芴(2-AF)，TAl02菌株用1，8·二羟基蒽醌(1，8-HAQ)。37℃培养48h后计数每皿回变菌落数，每个剂量作3个平行皿。五、结果与评价。2023/2/1实验结果判断[4]若96%二氯吡啶酸原药的回变菌落数超过自发回变菌落数的两倍以上，且各剂量组间呈剂量一反应关系，则该药对鼠伤寒沙门菌标准突变型菌株有诱发基因突变的作用，反之，这无该作用。2023/2/1统计分析2023/2/1统计分析2023/2/1结果评价结果评价[4]：试验结果表明，受试物各剂量组对各测试菌株在加或不加S9的条件下，其回变菌落数均未超过阴性对照组回变菌落数的2倍，亦无明显的剂量——反应关系，而阳性对照组各测试菌株的回变菌落数均明显增加，并超过阴性对照组回变菌落数的2倍以上。因此可认为95％二氯吡啶酸原药无诱发菌株基因突变活性。2023/2/1参考文献[1]王心如.毒理学基础[M].人民卫生出版社，2014,162.[2]GB15193.4-2014食品安全国家标准细菌回复突变试验(S)[3]GB15670-1995,农药登记毒理学试验方法

(S)[4]张爱华，张华.公共卫生与预防医学实验